DB34∕T 4315-2022 甜叶菊组培快繁技术规程

ICS65.020.20

CCSB34

34

安徽省地方标准

DB34/T4315—2022

甜叶菊组培快繁技术规程

TechnicalregulationsfortissuecultureandrapidpropagationofSteviarebaudiana

2022-10-26发布2022-11-26实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T4315—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由阜阳师范大学提出。

本文件由安徽省农业农村厅归口。

本文件起草单位：阜阳师范大学、界首市佳祺农业开发有限公司、淮北泽优农业发展有限公司、安

徽田园居电子商务股份有限公司、安徽省功能性果饮生态发酵工程研究中心、中国科学院亚热带农业生

态研究所、安徽稷神农业科技有限公司、阜阳市颍州区农业广播电视学校、阜南县公桥乡农业综合服务

站、淮北市相山区农业农村水利局、安徽农之源生态农业有限公司。

本文件主要起草人：兰伟、徐高骁、胡新、孔祥峰、纵玉华、胡仲华、刘旭、杜天志、杨光硕、李

瑞龙、陈颖、于涛、徐灵杰、张顺。

I

DB34/T4315—2022

甜叶菊组培快繁技术规程

1范围

本文件规定了甜叶菊[Steviarebaudiana（Bertoni）Hemsl.]组培快繁的组培设施、培养基配

制、灭菌、无菌苗初代培养、继代增殖培养、生根培养、炼苗、组培苗清洗和移栽、档案管理。

本文件适用于甜叶菊组培苗工厂化生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

JB/T10594日光温室和塑料大棚结构与性能要求

LY/T2289林木种苗生产经营档案

NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4组培设施

洗涤室

4.1.1应宽敞明亮、通风良好、水电配套、排水畅通。墙面和地面应便于清洁，地面要做防滑处理。

4.1.2配置洗瓶机、烘箱、小推车等。

准备室

4.2.1应空间宽敞、清洁明亮、通风良好、墙壁光滑、地面平坦。设有工作台和水池。

4.2.2配置高压蒸汽灭菌锅、微波炉、托盘、水浴锅、蒸馏水器、冰箱、培养箱、电子分析天平、电

子天平、电热磁搅拌器、酸度计、培养基自动定量灌装机等。

接种室

4.3.1应干爽安静、清洁明亮，墙壁光滑平整，地面平坦无缝。

4.3.2配置超净工作台、双筒实体显微镜、空调、紫外灯、空气净化装置、组培灭菌器、镊子、剪刀

等。

培养室

4.4.1应温度可控，光照强度和光照时间可控，湿度可控，相对密闭。

4.4.2配置紫外灯、空气净化装置、空调、程控定时器、温度计、湿度计、光照培养箱等。

1

DB34/T4315—2022

温室

温室建造按JB/T10594的规定执行。可选择玻璃温室或薄膜温室，温度可控范围15℃～32℃，

可以喷水补湿，并且具有良好的防虫隔离条件。

5培养基配制

培养基类型

5.1.1基本培养基

MS培养基为基本培养基，成分见附录A。

5.1.2初代培养基

MS＋6-BA（6-苄氨基嘌呤）1.0mg/L～1.5mg/L+NAA（萘乙酸）0.1mg/L～0.2mg/L+白砂糖30

g/L+卡拉胶5.5g/L。

5.1.3继代增殖培养基

MS＋6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L＋白砂糖30g/L+卡拉胶5.5g/L。

5.1.4生根培养基

1/2MS＋IBA0.1mg/L～0.5mg/L+白砂糖20g/L+琼脂粉5.0g/L。

培养基配制

5.2.1按NY/T2306的规定执行。

5.2.2用1.0mol/LNaOH或HCl调节培养基pH值至5.8。

5.2.3每瓶分装培养基厚度0.8cm～1.0cm。

6灭菌

培养基灭菌

培养基应于12h内置于高压灭菌锅内，在1.1kg/cm2、121℃条件下，灭菌15min～20min，待

压力降至0时，尽快取出存放在接种室中指定位置备用。

接种工具灭菌

将剪刀、镊子等接种工具包扎好置于高压灭菌锅内，在1.1kg/cm2、121℃条件下，灭菌15min～

20min，待压力降至0时，取出放置在超净工作台上。

超净工作台灭菌

将灭菌的培养基和接种工具放置在超净工作台上，接通电源，打开超净工作台上的紫外灯灭菌25

min～30min，先启动风机，再关闭紫外灯。接种前，工作台面用70％乙醇擦拭一遍。

7无菌苗初代培养

2

DB34/T4315—2022

外植体选取

选用生长健壮、无病虫害的甜叶菊植株，取顶端长5～6节的茎段为外植体备用。

外植体清洗

将选取的外植体用2‰～5‰洗衣粉溶液清洗茎段表面污垢后，在自来水下流水冲洗10min～15min。

外植体消毒

在超净工作台上，用无菌滤纸吸干外植体表面水分，浸入70％乙醇中消毒25s～30s后，将70％

乙醇倒去，用无菌水冲洗2次后，再浸入有效氯浓度2.0％次氯酸钠溶液消毒15min～20min，倒出

次氯酸钠溶液后，再用无菌水冲洗4～5次，置于无菌滤纸上备用。

外植体接种

7.4.1接种工具消毒

接种时，剪刀、手术刀和镊子等接种工具保持无菌状态。

7.4.2外植体切取

将已消毒的外植体切除下端部分及上端幼叶，留取长1.5cm～2.0cm带侧芽茎段备用。

7.4.3接种

将切取的茎段接种在诱导培养基上。每瓶培养基接种2～3个茎段，做好编号等信息标记。

培养条件

培养温度为23℃～27℃，光照强度2000lx～3000lx，连续定时光照时间12h/d。

培养时间

培养25d～30d。

8继代增殖培养

转接

将生长健壮的无菌甜叶菊幼苗切成单株，转接至继代增殖培养基上。

培养条件

同7.5。

培养时间

培养25d～30d。

培养代数

继代增殖次数控制在15代以内。

3

DB34/T4315—2022

9生根培养

转接

选取生长健壮、长势均匀，苗高2.0cm～3.0cm的继代培养苗，转接到生根培养基中。

培养条件

同7.5。

培养时间

培养18d～20d。

10炼苗

炼苗时期

培养瓶内组培苗长出4～5条长2.0cm～5.0cm不定根时，便可炼苗。

炼苗条件

培养瓶放置在遮光率为70％～75％、相对湿度为70％～90％、温度为20℃～30℃的温室中，打

开或半打开培养瓶盖炼苗。

炼苗时长

炼苗2d～3d。

11组培苗清洗和移栽

用自来水将炼苗后的组培苗基部的培养基冲洗干净后，移栽至已灭菌的基质中。

12档案管理

按LY/T2289的规定执行。

4

DB34/T4315—2022

A

附录A

（资料性）

MS培养基成分表

MS培养基成分表见表A.1。

表A.1MS培养基成分表

含量

成分

（mg/L）

硝酸钾KNO31900

硝酸铵NH4NO31650

大量元素硫酸镁MgSO4·7H2O370

磷酸二氢钾KH2PO4170

氯化钙CaCl2·2H2O440

硫酸锰MnSO4·4H2O22.3

硫酸锌ZnSO4·7H2O8.6

硼酸H3BO36.2

微量元素碘化钾KI0.83

钼酸钠Na2MoO4·2H2O0.25

硫酸铜CuSO4·5H2O0.025

氯化钴CoCl2·6H2O0.025

乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA37.25

铁盐