环糊精包合对陈皮挥发油体外抗氧化性的影响

环糊精包合对陈皮挥发油体外抗氧化性的影响摘要目的：研究环糊精包合对陈皮挥发油体外抗氧化的影响。方法：本实验所用的陈皮挥发油采用水蒸气蒸馏法进行提取，再用饱和水溶液法对其进行包合，以包合率和收得率为指标评价包合效果，通过DPPH自由基清除能力和铁还原能力来研究包合物的体外抗氧化性，并与包合前的体外抗氧化进行对比，从而评价包合对陈皮挥发油体外抗氧化性的影响。结果：随着陈皮挥发油浓度增加，其体外抗氧化能力也增大，且环糊精包合后挥发油的DPPH自由基清除能力及铁还原能力较包合前的都降低。结论：环糊精包合对陈皮挥发油体外抗氧化性有一定的影响。Abstract

Objective:

To

study

the

effect

of

cyclodextrin

inclusion

on

the

anti-oxidation

of

volatile

oil

of

orange

peel.

Method:

In

this

experiment,

steam

distillation

method

was

used

to

extract

the

volatile

oil

of

tangerine

peel,

and

then

it

was

clathrated

by

the

saturated

aqueous

solution

method.

The

clathrate

efficiency

and

yield

rate

were

used

to

evaluate

the

clathrate

effect.

The

in

vitro

oxidation

resistance

of

the

inclusion

compound

was

studied

and

compared

with

the

in

vitro

oxidation

resistance

before

inclusion

to

evaluate

the

effect

of

inclusion

on

the

in

vitro

oxidation

resistance

of

volatile

oil

of

orange

peel.

Results:

As

the

concentration

of

volatile

oil

in

tangerine

peel

increased,

its

antioxidant

capacity

in

vitro

also

increased,

and

the

DPPH

free

radical

scavenging

ability

and

iron

reducing

ability

of

volatile

oil

after

cyclodextrin

inclusion

were

reduced

compared

with

those

before

inclusion.

Conclusion:

The

inclusion

of

cyclodextrin

has

a

certain

effect

on

the

antioxidant

activity

of

volatile

oil

of

orange

peel.关键词：陈皮；挥发油；β-环糊精包合；铁还原；DPPH自由基清除陈皮（CitrusReticulataPericarpium）为芸香科植物橘（CitrusreticulataBlanco）及其栽培变种的干燥成熟果皮，主要分布在我国福建、广西、广东、四川等地。陈皮最早收载于《神农本草经》，在我国已有几千年的悠久历史，陈皮气香，性温味辛而苦，归脾肺经，主要有理气健脾、燥湿化痰的功效，如在平胃散、保和丸、异功散中都有使用，中医临床多用于治疗脘腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多，现代研究表明其化学成分主要含有挥发油，橙皮苷、柠檬醛和柠檬烯等成分，其药理作用主要有刺激胃肠道和呼吸道的分泌。其中，陈皮挥发油含有多种活性成分，如柠檬烯、γ-松油烯等，是陈皮主要有效成分之一，具有抗氧化、祛痰、抑菌、抗癌、促消化等作用。但是中药挥发油存在的问题是挥发性较强，常温下全部或部分挥发，且极易被氧化分解，目前提高挥发油稳定性已经成为广大医药工作者的主要课题。经查阅文献，改善陈皮挥发油稳定性的方法主要采用环糊精包合、微囊化、乳化等技术，其中β环糊精包合成为目前最常用的提高挥发油稳定性的方法，为了切实将陈皮挥发油β环糊精包合技术应用于实际生活，本实验以β环糊精作为主体，陈皮挥发油作为客体，采用饱和水溶液法对其进行包合，再做包合物的体外抗氧化实验与包合前的体外抗氧化实验进行对比，考察包合对陈皮挥发油体外抗氧化性的影响，其中，体外抗氧化性以挥发油的DPPH自由基清除能力和铁还原抗氧化能力为评价指标。材料与仪器1.1药材与试剂陈皮（产地：浙江，批号：191213）；水（纯化水）；无水硫酸钠;DPPH（批号：1898664）;挥发油(本实验室制备);无水乙醇(批号:130922);磷酸二氢钠;磷酸氢二钠(批号:20161114);铁氰化钾;三氯乙酸(批号:20180322);β环糊精(批号:20170601);三氯化铁(批号:20150805);试剂均为分析纯；1.2仪器HDM-2000D数显搅拌电热套、电子分析天平、电子天平、挥发油测定器、紫外分光光度计、HB-05加热锅、鼓风干燥箱（型号：DHG-9055A）、磁力搅拌器（艾卡仪器设备有限公司）、抽滤泵实验方法2.1陈皮挥发油提取工艺称取130g陈皮，放置在2000ml圆底烧瓶，加10倍蒸馏水，浸泡30min，搭建挥发油提取装置，加热至沸腾，保持其微沸状态，提取7h，冷却，用无水硫酸钠脱水干燥后得到陈皮挥发油，于40C下避光保存。2.2包合工艺2.2.1包合物制备称取16gβ环糊精，加蒸馏水160ml于水浴锅上加热使其溶解，放凉，至40℃下成为饱和溶液，再将此饱和溶液放于恒温磁力搅拌器上，在转速为750r/min、温度为55℃的条件下缓慢滴加陈皮挥发油乙醇溶液（体积比为1:1）2ml，搅拌2.5h后，静置冷藏12h，取出后用布氏漏斗进行抽滤，弃去滤液，滤饼用无水乙醇洗涤三次，每次5ml，抽干后放于50℃的干燥箱中干燥，最后得白色粉末状的包合物。2.2.2包合物实际含油量的测定实验称取定量的包合物于500ml烧瓶中，加200ml的蒸馏水，连接挥发油测定器，使沸腾0.5h，停止加热，放置室温后读取油量。2.3DPPH自由基清除能力将包合物置于1000ml容量瓶中，加蒸馏水200ml，按照上述“2.2.2”项下测定法操作，收集挥发油，按附录溶液配制法配成体积分数为1%、2%、3%、4%、5%、6%的陈皮挥发油乙醇溶液。精密移取体积分数分别为1%、2%、3%、4%、5%、6%的挥发油乙醇溶液2ml置具塞试管，加2ml0.1mmol/LDPPH溶液，混合均匀，于室温下反应30min，在517nm处测其吸光度值（A1）。按上述方式测2ml样品液和2ml无水乙醇混合液的吸光度值（A2）；以同样方式测2mlDPPH溶液和2ml无水乙醇混合液的吸光度值（A0）。每一组重复测三次，取平均值。按照如下公式计算不同浓度挥发油乙醇溶液对DPPH自由基清除能力：清除率=[1-（A1-A2）/A0]*100%以纵坐标（y）为DPPH自由基的清除率，横坐标（x）为样品浓度做回归方程，并计算其相关系数（R2）。2.4还原能力将包合物置于1000ml容量瓶中，加蒸馏水200ml，按照上述“2.2.2”项下测定法操作，收集挥发油，按附录溶液配制法配成体积分数为1%、2%、3%、4%、5%、6%的陈皮挥发油乙醇溶液。取磷酸盐缓冲溶液2ml五份，分别加入装有2ml不同浓度挥发油乙醇溶液的试管中，再加入1%铁氰化钾溶液2ml，振荡，混合均匀后，在50℃水浴锅中反应20min，急速冷却，加入10%三氯乙酸溶液2ml，用微孔滤膜过滤。取续滤液4ml，加入蒸馏水4ml和0.1%FeCl30.8ml，混合均匀，室温下静置10min，在700nm处测定其吸光度。每一组重复测三次，取平均值。结果3.1DPPH清除能力结果图3-1-1和3-1-2所示，由图可以看出，陈皮挥发油具有一定的DPPH自清除自由基能力增强，表明清除自由基能力与体积分数呈一定量效关系。同时通过对比陈皮挥发油包合前DPPH自由基清除率，明显可以看出包合前陈皮挥发油的自由基清除能力优于等体积包合后陈皮挥发油的清除能力，由此可以说明β环糊精包合后对挥发油的DPPH自由基清除能力具有一定的影响。DPPH是一种较稳定的氮中心的自由基，在517nm处有最大吸收波长，本实验利用抗氧化剂捕捉DPPH自由基的孤对电子，使其在517nm处的吸光度值下降，吸光值的下降表明其抗氧化活性增强，以此指标来评价陈皮挥发油的抗氧化能力。图3-1-1图3-1-23.2总还原能力结果如图3-2-1和3-2-2所示，陈皮挥发油具有一定的铁还原能力，且随着挥发油体积分数的增加，吸光度值相应增加，铁还原能力也随之增大。且通过陈皮挥发油包合前后总还原能力的对比图，不难发现挥发油包合后的总还原能力低于包合前的总还原能力，表明环糊精包合对挥发油总还原能力具有一定的影响。本实验方法又称普鲁士蓝法，是利用挥发油可以把铁氰化钾还原成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾在酸性条件和Fe3+络合形成了普鲁士蓝，使吸光度值增大且700nm处吸光度值最大的原理。此实验方法通过测定挥发油的总还原能力，反映不同浓度挥发油供应电子的能力，此供应电子既可以与氧化物质发生反应，又可以和自由基反应，从而发挥抗氧化的作用。图3-2-1图3-2-2结论通过本实验铁还原法及DPPH自由基法的实验数据分析可知，陈皮挥发油的体外抗氧化活性与浓度呈显著的量效关系，并且通过对比环糊精包合前和包合后的DPPH自由基清除能力及总还原能力，发现包合后体外抗氧化能力下降，因此可以得出环糊精包合后会对陈皮挥发油的体外抗氧化造成一定影响的结论，但目前包合对体外抗氧化造成影响的机制尚不明确，且国内对此类研究鲜有报道，需要进一步深入探讨。附录1%、2%、3%、4%、5%、6%挥发油乙醇溶液精密量取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml,,加乙醇分别定容至25ml容量瓶0.1mmol/LDPPH精密称取0.0039gDPPH粉末置100ml容量瓶，加乙醇定容至刻度。磷酸缓冲溶液取A液（0.2mol/LNa2HPO4溶液：Na2HPO40.20g定容至100ml）37.5ml和B液（0.2mol/LNaH2PO4溶液：NaH2PO40.20g定容至100ml）62.5ml混合制成PH=6.6的磷酸盐缓冲溶液1%铁氰化钾称取1g铁氰化钾加蒸馏水定容至100ml容量瓶即得10%三氯乙酸称取10g三氯乙酸加蒸馏水定容至100ml容量瓶即得0.1%FeCl3溶液称取0.1g三氯化铁加蒸馏水定容至100ml容量瓶即得参考文献[1]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社,2015:89[2]崔佳韵,梁建芬.不同年份新会陈皮挥发油的抗氧化活性评价[J].食品科技,2019,44(01):98-102[3]王斌,乔妍,武倩男等.香茅叶挥发油的化学成分及其体外抗氧化活性[J].中成药,2016,38(4):841-845[4]何华,李先宽,宋新,霍艳,王冰.五味子挥发油抗氧化性研究[J].食品科技,2012,37(5):248-251[5]张海丽.陈皮提取物的抗氧化活性研究[J].黑龙江医药,2014,26(2):306-308[6]刘丽娜,徐玉娟,肖更生,吴继军,余元善,傅曼琴.不同年份陈皮黄酮成分分析及抗氧化活性评价[J].2020,51(3):623-629[7]吴广通,张夏华,李凤前.改善中药挥发油稳定性的制剂学研究进展[J].药学服