DB13∕T 5584-2022 兔须癣毛癣菌诊断与防治技术规程

ICS11.220

CCSB41

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河北省地方标准

DB13/T5584—2022

兔须癣毛癣菌诊断与防治技术规程

2022-05-31发布2022-07-01实施

河北省市场监督管理局发布

DB13/T5584—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

本文件由河北省农业农村厅提出。

本文件起草单位：河北工程大学。

本标准主要起草人：柳焕章、刘建钗、于国杰、刘利强、刘会洽、杜鹃、刘彦威、刘娜、崔国

林、刘艳莉、吴志勇、崔玉革、李晶晶、娄路平、李夫宏、刘孟啸、赵梓筱。

I

DB13/T5584—2022

兔须癣毛癣菌诊断与防治技术规程

1范围

本文件规定了兔须癣毛癣菌病的临床诊断、实验室诊断和综合判定。

本文件适用于兔类、牛、羊、犬、猫等须癣毛癣菌病的诊断及其须癣毛癣菌病原的检测和防治。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本

文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

DB51/T1419-2012大熊猫须癣毛癣菌病检验技术规范

3术语和定义

须癣毛癣菌Trichophytonmentagrophytes

为人畜共患的皮肤真菌。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PDA：马铃薯葡萄糖琼脂培养基；

TSA：胰蛋白胨大豆琼脂培养基；

YEPD：酵母浸出粉胨葡萄糖培养基；

DMSO：二甲基亚砜；

5临床诊断

当兔出现以下部分或全部情形时，可作为初步诊断的依据。

临床症状

感染的兔皮肤出现瘙痒、脱毛和皮肤炎症，以头部、四肢部位最多。各种年龄的兔均可感染。

病理变化

病变部位因脱毛而露出粉红色的皮肤并发炎，有的出现结痂，有的结痂下面出现化脓性炎症。

6实验室诊断

包括常规检测和定量PCR检测技术。

常规检测

6.1.1样品采集

将患皮癣病的兔，用75%酒精对患处消毒，取无菌手术刀刮取患处及边缘的皮屑、痂皮和被毛等

病料，放入无菌的离心管中于冷藏保存。

6.1.2病原菌的分离纯化与形态观察

把采集的病料接种到沙氏培养基（含0.5mg/mL氯霉素）平板，放入27℃真菌培养箱培养10d，

观察菌落生长情况菌落特征，并涂片镜检，确定纯化后保存备用。

对照兔须癣毛癣菌菌典型菌落形态和菌体形态特征进行初步鉴别（参见附录A）。

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6.1.3病料显微镜检查（改良的KOH法）

取少量病料（皮屑、被毛等），放在清洗干净的载波片上，滴加改良复方KOH溶液（KOH15g加

入30mL蒸馏水中溶解后，依次加入DMSO40mL，甘油20mL，摇匀后加入蒸馏水至1000mL混匀）1～

2滴，加盖玻片，用滤纸吸净周边溢液，在显微镜下镜检。

结果判断：将同种病料连续重复两次检查，以病料中查到特征性菌丝和孢子为阳性结果，以检

查不到菌丝和孢子为阴性。

定量PCR检测

6.2.1样品采集

从发病的兔场选择有典型皮肤真菌病的家兔，在病变与健康皮肤组织交界处，用无菌手术刀片

刮取皮屑，放入灭菌的平皿中冷藏保存。

6.2.2基因组DNA提取

使用真菌DNA提取试剂盒提取。

6.2.3引物合成

参照GenBank中兔须癣毛癣菌benAfum基因转录间隔区序列（KP099602），使用PrimerExpress

6.0软件设计特异性引物（预期扩增片段大小140bp）：

上游引物F：（5'-GCAAAGAAGCCTGGAAGAAG-3'）

下游引物R：(5'-GGAGACCATCTGTGAGAGTT-3)

6.2.4定量PCR反应体系和反应程序

采用25μL的反应体系：SYBRPremixExTaq（2×）12.5μL，上、下游引物各0.5μL，DNA模板

1.0μL，用双蒸水补足至25μL。反应程序为：94℃预变性60S；94℃10S，60℃30S，72℃30

S，进行40个循环。反应结束后，作熔解曲线，采用软件自动分析。

6.2.5结果判断

当待测样品实时荧光定量PCR检测结果有“S”型扩增曲线，Ct值≤36.5，且Tm值介于86.48℃～

86.65℃之间时，判定待测样品中含有须癣毛癣菌。未出现扩增曲线和Tm值，则判断样品中不含须癣

毛癣菌。

7综合判定

结合临床诊断、实验室检测结果，可确诊兔须癣毛癣菌病。

8综合防治

预防措施

环境病原菌的净化。可采用火焰喷杀或火碱等消毒产品的喷洒，保持兔舍和运动场宽敞，阳光

充足；保持垫料清洁干燥，发现病兔及时隔离或移除。科学饲养管理，提高兔群的免疫力和抗病能

力。

治疗措施

根据药敏试验结果，选择敏感抗真菌药物治疗。对病兔的药物治疗宜采用内服与外敷相结合的

方法。

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DB13/T5584—2022

A

A

附录A

（资料性）

须癣毛癣菌形态学判断

A.1须癣毛癣菌形态学判断

须癣毛癣菌菌落形态特征为：在PDA培养基上，菌落为白色，中央致密稍凸起，周围较松散，背

面为黄褐色。符合须癣毛癣菌菌丝和孢子的显微形态特征为：在显微镜下可见典型的螺旋菌丝，小

分生孢子较多，呈葡萄状；大分生孢子较少，呈棒状，有分隔。由菌落形态及