2025年核酸检测员考试题及答案

2025年核酸检测员考试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30题，计60分）1.关于新型冠状病毒核酸检测样本采集，以下操作正确的是：A.采集口咽拭子时，棉签仅擦拭单侧扁桃体B.鼻咽拭子插入深度为鼻尖至耳垂距离的1/3C.采样前受检者需用清水漱口3次D.儿童采集口咽拭子时，可让其发出“啊”声暴露咽后壁答案：D解析：口咽拭子需擦拭双侧扁桃体及咽后壁（A错误）；鼻咽拭子插入深度应为鼻尖至耳垂距离的2/3（B错误）；采样前30分钟内避免漱口、进食（C错误）；儿童配合时发出“啊”声可充分暴露咽后壁（D正确）。2.病毒保存液（VTM）的主要成分不包括：A.Hanks平衡盐溶液B.牛血清白蛋白C.抗生素（青霉素、链霉素）D.乙二胺四乙酸（EDTA）答案：D解析：病毒保存液通常含缓冲液（如Hanks）、蛋白质保护剂（如BSA）、抗生素（防细菌污染），EDTA为核酸提取保存液成分（用于抗凝），非病毒保存液必需成分（D错误）。3.核酸检测实验室（PCR实验室）的核心功能分区不包括：A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增分析区D.消毒灭菌区答案：D解析：PCR实验室标准分区为试剂准备区、样本处理区（核酸提取）、扩增区、产物分析区（或合并扩增与分析区），消毒灭菌为各分区辅助操作，非核心功能区（D错误）。4.关于生物安全柜的使用，以下错误的是：A.操作前需开机运行10分钟以上B.手臂进出时应缓慢，避免影响气流C.柜内物品应尽量靠后放置，避免遮挡排风口D.操作结束后需用75%乙醇擦拭表面答案：C解析：生物安全柜内物品应尽量靠内放置，且避免遮挡回风口（C错误）；其他选项均符合生物安全柜操作规范。5.实时荧光定量PCR检测中，Ct值的定义是：A.荧光信号达到设定阈值时的循环数B.扩增曲线的平台期荧光强度C.基线期的平均荧光值D.阴性对照的荧光信号值答案：A解析：Ct（CycleThreshold）值指荧光信号达到设定阈值时所经历的循环次数，是定量分析的核心参数（A正确）。6.核酸提取过程中，若使用磁珠法，关键步骤不包括：A.样本裂解（破坏病毒包膜释放核酸）B.磁珠与核酸特异性结合（在高盐低pH环境）C.洗涤（去除蛋白、盐离子等杂质）D.高温变性（使双链DNA解旋为单链）答案：D解析：磁珠法提取核酸包括裂解、结合、洗涤、洗脱（低盐高pH释放核酸），高温变性为PCR扩增步骤（D错误）。7.关于样本运输，以下符合要求的是：A.常温下运输，2小时内送达实验室B.使用95kPa压力蒸汽灭菌的运输箱C.样本与冰袋直接接触以确保低温D.运输过程中保持样本直立，防止泄漏答案：D解析：样本应在2-8℃冷藏运输（A错误）；运输箱需符合生物安全要求（如UN3373包装），非压力蒸汽灭菌（B错误）；样本与冰袋需用隔离材料分隔（C错误）；直立放置防泄漏（D正确）。8.检测过程中发现“内标（IC）扩增失败”，可能的原因是：A.引物探针设计错误B.样本中存在PCR抑制物C.扩增仪温度校准偏差D.荧光通道设置错误答案：B解析：内标用于监测核酸提取及扩增过程是否受抑制，若内标失败提示样本中存在抑制物（如血红蛋白、胍盐残留）（B正确）。9.核酸检测结果报告中，“未检出”的正确表述是：A.样本中未检测到病毒核酸B.受检者未感染病毒C.检测结果为阴性D.样本质量不符合检测要求答案：A解析：“未检出”仅表示本次检测未发现病毒核酸，不能直接等同于“未感染”（可能因采样时间过早、病毒载量低等）（A正确）。10.关于防护服穿脱，以下错误的是：A.穿防护服前需检查是否有破损B.脱防护服时应先脱外层手套，再摘护目镜C.脱卸过程中避免接触防护服外表面D.脱完后需用速干手消毒剂消毒双手答案：B解析：脱防护服时应先摘护目镜（或面屏），再脱外层手套（B错误），其他步骤符合规范。11.实验室发生样本泄漏时，应急处理步骤正确的是：①立即停止操作，标记污染区域②用吸水纸覆盖泄漏物，倒足量含氯消毒剂（有效氯≥2000mg/L）③静置30分钟后，按医疗废物处理污染材料④用75%乙醇二次擦拭污染区域A.①②③④B.①③②④C.②①③④D.①②④③答案：A解析：泄漏处理流程：停止操作→覆盖消毒剂→静置→清理→二次消毒（A正确）。12.以下哪种情况的样本应拒收？A.样本管标签仅标注“1号”，无姓名和采样时间B.样本保存液量为1.5ml（要求1-3ml）C.样本运输温度为10℃（要求2-8℃）D.样本采集后4小时送达实验室答案：A解析：标签信息不全（无姓名、采样时间）属于关键信息缺失，应拒收（A正确）；保存液量在范围内（B可接收）；运输温度轻微超标需评估（C不一定拒收）；4小时内送达符合要求（D可接收）。13.实时荧光PCR仪的校准周期通常为：A.每3个月B.每6个月C.每年D.每2年答案：C解析：PCR仪需每年由计量机构校准，确保温度准确性（C正确）。14.核酸检测实验室的空气流向应满足：A.试剂准备区→样本处理区→扩增区，压力递减B.样本处理区→试剂准备区→扩增区，压力递增C.扩增区→样本处理区→试剂准备区，压力递减D.各区域压力相等，无严格流向答案：A解析：PCR实验室需保持压力梯度，防止交叉污染，气流方向为清洁区（试剂准备）→半污染区（样本处理）→污染区（扩增），压力递减（A正确）。15.关于阳性对照的使用，以下正确的是：A.每批次检测至少设置1个阳性对照B.阳性对照使用灭活的病毒培养物C.阳性对照应与样本同批提取、扩增D.阳性对照Ct值应≥35答案：C解析：阳性对照需与样本同步处理（C正确）；每批次至少2个（A错误）；可用质粒标准品（B错误）；Ct值应≤30（D错误）。16.咽拭子采样时，拭子头接触的关键区域是：A.舌尖B.软腭C.双侧扁桃体及咽后壁D.悬雍垂答案：C解析：咽拭子需擦拭双侧扁桃体及咽后壁（病毒富集区域）（C正确）。17.核酸提取仪的日常维护不包括：A.清洁磁棒（去除残留磁珠）B.校准加样针的吸液量C.更换废液桶中的消毒剂D.升级PCR扩增程序答案：D解析：核酸提取仪维护涉及硬件清洁、校准、废液处理，PCR程序升级属于软件操作（D错误）。18.检测结果出现“单靶标阳性”（如ORF1ab阳性，N基因阴性），正确的处理是：A.直接报告阳性B.重新提取原样本核酸，复检C.报告“检测结果不确定”D.视为污染，忽略该结果答案：B解析：单靶标阳性可能因引物结合效率差异或低病毒载量，需复检确认（B正确）。19.实验室生物安全二级（BSL-2）的基本要求不包括：A.实验室入口设置生物危害标识B.配备生物安全柜和高压蒸汽灭菌器C.工作人员需穿戴防护服、手套、护目镜D.实验室内设独立的空气净化系统（万级洁净度）答案：D解析：BSL-2实验室无强制洁净度要求（D错误），其他为基本要求。20.关于样本保存，以下正确的是：A.2-8℃保存不超过48小时B.-20℃保存可长期（>1年）使用C.反复冻融不影响检测结果D.保存液浑浊的样本仍可直接检测答案：A解析：2-8℃保存≤48小时（A正确）；-20℃保存≤1个月，-70℃可长期保存（B错误）；反复冻融导致核酸降解（C错误）；保存液浑浊可能污染，需评估（D错误）。21.实时荧光PCR反应体系中，dNTP的作用是：A.提供DNA合成的原料B.激活Taq酶活性C.结合模板DNA，引导扩增D.稳定反应体系pH答案：A解析：dNTP（脱氧核苷酸）是DNA合成的原料（A正确）。22.采样人员防护装备（PPE）的穿戴顺序正确的是：A.口罩→帽子→防护服→手套→护目镜B.帽子→口罩→护目镜→防护服→手套C.防护服→帽子→口罩→手套→护目镜D.帽子→口罩→防护服→护目镜→手套答案：D解析：正确顺序：帽子→医用防护口罩→防护服→护目镜/面屏→手套（D正确）。23.检测过程中，若发现“阴性对照扩增”，最可能的原因是：A.样本核酸提取效率低B.扩增仪温度过高C.实验室交叉污染（如气溶胶）D.引物探针浓度过低答案：C解析：阴性对照扩增提示污染（如气溶胶、加样错误）（C正确）。24.关于核酸检测质量控制，以下错误的是：A.每批次检测需包含阴、阳性对照B.室内质控品应覆盖低、中、高浓度C.失控时，已检测样本结果可直接报告D.质控数据需保存至少2年答案：C解析：失控时需排查原因，已检测样本需重新检测（C错误）。25.新型冠状病毒核酸检测的靶标基因通常不包括：A.ORF1abB.N基因C.E基因D.S基因答案：D解析：常用靶标为ORF1ab、N、E基因，S基因因变异大较少作为检测靶标（D错误）。26.采样拭子的材质要求是：A.棉拭子（吸收性强）B.木杆（不易折断）C.聚酯纤维（无核酸酶）D.海绵头（增大采样量）答案：C解析：采样拭子需用非棉（棉可能含抑制物）、非木（可能含核酸酶）材质，常用聚酯纤维（C正确）。27.实验室废弃物处理中，感染性废物的处理方式是：A.直接投入生活垃圾桶B.高压蒸汽灭菌（121℃，30分钟）后按医疗废物处理C.用75%乙醇浸泡30分钟后丢弃D.焚烧处理（无需预处理）答案：B解析：感染性废物需先高压灭菌（121℃，30分钟），再按医疗废物处理（B正确）。28.关于扩增曲线的解读，以下正确的是：A.基线期（前15个循环）荧光值应平稳B.指数期荧光值下降提示扩增失败C.平台期荧光值越高，样本病毒载量越高D.无扩增曲线表示样本病毒载量极低答案：A解析：基线期（通常前15个循环）荧光值应无明显变化（A正确）；指数期荧光应上升（B错误）；平台期受反应体系限制，不反映病毒载量（C错误）；无扩增曲线可能为阴性或抑制（D错误）。29.核酸检测报告的基本信息不包括：A.受检者姓名、身份证号B.检测方法（如实时荧光PCR）C.实验室地址及联系电话D.样本类型（如口咽拭子）答案：C解析：报告需包含受检者信息、检测方法、样本类型等，无需实验室联系电话（C错误）。30.关于实验室环境消毒，以下正确的是：A.空气消毒可用紫外线灯（强度≥70μW/cm²）照射30分钟B.桌面消毒用500mg/L含氯消毒液擦拭C.地面消毒用75%乙醇喷洒D.仪器表面用95%乙醇擦拭答案：A解析：紫外线灯强度≥70μW/cm²，照射≥30分钟（A正确）；桌面消毒需1000-2000mg/L含氯消毒液（B错误）；地面消毒用含氯消毒液（C错误）；仪器表面用75%乙醇（D错误）。二、多项选择题（每题3分，共10题，计30分。每题至少2个正确选项，错选、漏选均不得分）1.咽拭子采样时，可能影响检测结果的因素包括：A.采样深度不足（未触及扁桃体或咽后壁）B.采样后拭子未完全浸入保存液C.受检者采样前30分钟内吸烟D.拭子头反复摩擦牙龈答案：ABCD解析：采样深度不足（A）、保存液接触不充分（B）、口腔污染物（吸烟残留，C）、误采牙龈（D）均可能导致病毒载量不足或抑制物干扰。2.核酸提取过程中，导致提取效率降低的原因有：A.样本裂解时间不足（病毒包膜未完全破坏）B.磁珠用量过少（无法结合所有核酸）C.洗涤次数过多（核酸被洗脱）D.洗脱缓冲液体积过大（核酸浓度稀释）答案：ABCD解析：裂解不充分（A）、磁珠量不足（B）、过度洗涤（C）、洗脱体积过大（D）均会影响提取效率。3.实验室生物安全防护的核心措施包括：A.严格分区管理（清洁区、半污染区、污染区）B.正确使用个人防护装备（PPE）C.规范操作（如避免气溶胶产生）D.定期进行生物安全培训答案：ABCD解析：分区管理（A）、PPE使用（B）、规范操作（C）、培训（D）均为生物安全核心措施。4.实时荧光PCR检测中，“假阴性”结果的可能原因有：A.样本采集时间过早（病毒载量低于检测限）B.核酸提取过程中抑制物残留（如血红蛋白）C.引物探针与病毒变异株不匹配D.扩增仪温度设置错误（退火温度过高）答案：ABCD解析：病毒载量低（A）、抑制物干扰（B）、引物不匹配（C）、温度错误（D）均可能导致假阴性。5.样本接收时需核对的信息包括：A.样本管标签与申请单信息一致（姓名、编号）B.样本类型（口咽/鼻咽拭子）与检测要求匹配C.保存液量是否在规定范围（1-3ml）D.运输温度记录（2-8℃）答案：ABCD解析：标签一致性（A）、样本类型（B）、保存液量（C）、运输温度（D）均为接收核对内容。6.关于防护服穿脱，以下正确的是：A.穿防护服前需先戴帽子和口罩B.脱防护服时应从颈部和腰部解开，避免接触外表面C.脱卸后需将防护服内面朝外包裹，扎紧封口袋D.穿脱过程需在缓冲间进行，避免交叉污染答案：ABCD解析：穿戴顺序（A）、脱卸方法（B）、包裹方式（C）、区域要求（D）均符合规范。7.核酸检测实验室质量控制的关键环节包括：A.试剂验收（批间差异、效期）B.仪器校准（PCR仪、离心机）C.人员培训（采样、检测、报告）D.室内质控（阴/阳性对照、弱阳性质控品）答案：ABCD解析：试剂验收（A）、仪器校准（B）、人员培训（C）、室内质控（D）均为质量控制关键。8.检测结果审核时，需重点关注的内容有：A.阴/阳性对照是否符合预期（阴性无扩增，阳性Ct≤30）B.内标（IC）是否正常扩增（排除抑制）C.样本Ct值是否在有效范围（通常≤38）D.检测时间与采样时间间隔是否超过48小时答案：ABCD解析：对照结果（A）、内标状态（B）、Ct值有效性（C）、时间间隔（D）均需审核。9.实验室发生气溶胶污染时，应急处理措施包括：A.立即停止操作，关闭风机B.用含氯消毒液（2000mg/L）喷洒空气C.紫外线灯照射实验室4小时以上D.更换所有实验耗材（如吸头、离心管）答案：ACD解析：关闭风机（A）、紫外线照射（C）、更换耗材（D）为有效措施；空气喷洒消毒液效果有限（B错误）。10.关于核酸检测的伦理与法律要求，以下正确的是：A.检测前需取得受检者知情同意（特殊情况除外）B.检测结果仅用于指定用途，不得泄露C.阳性结果需按规定时限上报卫生行政部门D.实验室需具备相应资质（PCR实验室备案、检测人员培训合格）答案：ABCD解析：知情同意（A）、隐私保护（B）、结果上报（C）、资质要求（D）均符合伦理与法律规定。三、判断题（每题1分，共10题，计10分。正确填“√”，错误填“×”）1.采样时，拭子头可接触受检者牙齿、舌头或唾液，不影响检测结果。（×）解析：接触牙齿、舌头可能引入抑制物或降低病毒载量。2.病毒保存液的主要作用是灭活病毒，因此采样后可立即常温运输。（×）解析：保存液需2-8℃运输，常温可能导致核酸降解。3.PCR实验室各分区的仪器（如离心机、移液器）可交叉使用，只需清洁即可。（×）解析：分区仪器需专用，避免交叉污染。4.核酸提取完成后，需立即进行扩增，否则核酸会降解。（×）解析：提取后的核酸可-20℃保存24小时，-70℃长期保存。5.检测结果为“阳性”时，需使用原样本重复检测，并更换不同厂家试剂复核。（√）解析：阳性结果需复检确认，避免假阳性。6.生物安全柜内可以同时进行阳性样本和阴性样本处理，只要分区操作。（×）解析：生物安全柜内禁止同时处理阴阳样本，防止交叉污染。7.采样人员脱卸防护装备时，可直接用手触摸防护服外表面。（×）解析：脱卸时需避免接触外表面，防止污染。8.扩增仪的温度偏差（如±0.5℃）不会影响检测结果。（×）解析：温度偏差可能导致引物退火效率变化，影响Ct值。9.实验室废弃的一次性手套属于感染性废物，需高压灭菌后处理。（√）解析：接触样本的手套需按感染性废物处理。10.核酸检测报告中，“未检出”等同于“阴性”，可直接用于排除感染。（×）解析：“未检出”可能因采样时机等因素，不能完全排除感染。四、简答题（每题10分，共4题，计40分）1.简述口咽拭子采样的操作要点及注意事项。答案：操作要点：①受检者坐位，头微仰，张大嘴，发出“啊”声暴露咽后壁；②采样人员右手持拭子，避免触及其它物品；③拭子头快速擦拭双侧腭弓、扁桃体及咽后壁（各2-3次）；④采样后立即将拭子头垂直插入病毒保存液，折断尾部（保留1cm在管内），旋紧管盖。注意事项：①采样前30分钟避免受检者进食、饮水、吸烟；②每采1人更换手套（或消毒手套）；③动作轻柔，避免引发受检者恶心呕吐；④拭子头避免接触口唇、牙齿等部位；⑤采样后样本需2小时内冷藏运输（2-8℃）。2.列举PCR实验室生物安全三级防护（BSL-3）的主要要求（至少5项）。答案：①实验室需为独立建筑或隔离区域，设缓冲间（双门互锁）；②空气单向流动（外环境→缓冲间→实验室），保持负压（-30Pa至-50Pa）；③工作人员需穿戴正压防护服（或全封闭呼吸防护装备）；④所有操作在生物安全柜（II级或III级）内进行；⑤实验废弃物需经双重高压灭菌（121℃，60分钟）或化学消毒后处理；⑥配备紧急冲淋装置和洗眼器；⑦严格门禁管理，仅限培训合格人员进入。3.说明实时荧光PCR实验室分区的功能及气流控制要求。答案：分区功能：①试剂准备区：配制、分装PCR反应体系（不含样本核酸）；②样本处理区：样本接收、核酸提取、加样（含样本核酸）；③扩增区：进行PCR扩增反应；④产物分析区：分析扩增结果（如读取Ct值）。气流控制：各区域需保持压力梯度，防止交叉污染。气流方向为：试剂准备区（正压）→样本处理区（微正压）→扩增区（微负压）→产物分析区（负压），相邻区域压差≥5Pa；空气经高效过滤器（HEPA）处理后排放，不得循环使用。4.当检测中发现某样本Ct值为37（接近检测限），应如何处理？答案：处理流程：①核查原始数据，确认扩增曲线是否符合要求（指数期明显、无杂峰）；②检查内标（IC）是否正常扩增（排除抑制物干扰）；③若内标正常，重新提取原样本核酸，使用同一试剂复检；④复检结果若仍为Ct≤38（或实验室设定的阳性阈值），报告“阳性”；⑤若复检无扩增或Ct>38，报告“未检出”；⑥记录处理过程（包括原始结果、复检结果、分析结论），并归档保存；⑦若为临床样本，建议结合流行病学史、临床表现及其他检测（如抗原、抗体）综合判断。五、案例分析题（共2题，第1题20分，第2题30分，计50分）案例1：