单克隆抗体的出现与发展

单克隆抗体的出现与发展

一、概述

单克隆抗体，作为生物技术领域的一项重大突破，自其问世以来

便在生物医学领域引发了深刻的变革。这一技术的出现，不仅极大地

提高了抗体生产的标准化程度和产量，更以其高度的特异性和纯净度,

为疾病的诊断、预防和治疗开辟了新的途径。

单克隆抗体，简称mAb,是通过将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合

形成杂交瘤细胞，并筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞系而制备的。

这种制备方法彻底改变了传统多克隆抗体的生产方式，使得抗体的生

产更加精准、高效和可靠。

在医学应用中，单克隆抗体因其独特的性质而展现出巨大的潜力。

它们能够特异性地识别并结合目标抗原，从而实现对特定疾病或病理

状态的精准治疗。在癌症治疗中，针对特定癌细胞的单克隆抗体可以

携带药物直接攻击癌细胞，提高治疗效果并降低副作用。单克隆抗体

还广泛应用于疾病的早期诊断，如酶联免疫吸附试验（ELISA）等，

为疾病的早期发现和治疗提供了有力工具。

随着科技的不断发展，单克隆抗体的制备技术也在不断进步。基

因工程、蛋白质工程等新技术的应用，使得我们能够更加精确地控制

抗体的性质和功能，从而开发出更加安全、有效的抗体药物。生物信

息学和计算机科学的进步也为我们深入理解抗体与抗原的相互作用

机制提供了有力支持，为抗体药物的优化理供了理论依据。

单克隆抗体的出现与发展代表了生物技术的巨大进步，它不仅提

高了我们对于生命现象的理解，也极大地推动了医学和其他相关领域

的发展。随着科技的不断进步和应用领域的不断拓展，单克隆抗体将

在医疗、生物技术、农业等多个领域发挥更加重要的作用，为人类健

康事业的发展做出更大的贡献。

1.简要介绍抗体及其在生物医学领域的重要性

作为一种特殊的蛋白质，是生物体在受到外来抗原刺激后产生的

免疫反应的核心组成部分。它们能够特异性地识别并结合抗原，进而

启动一系列生物学过程，以清除抗原并保护机体免受外来物质的侵害。

在生物医学领域，抗体因其高度的特异性和亲和性而备受瞩目，广泛

应用于疾病诊断、预防和治疗等多个方面。

在疾病诊断方面，抗体作为一类重要的生物标志物，能够反映机

体对特定抗原的免疫反应状态。通过检测血清中的抗体水平，医生可

以判断患者是否感染了某种病原体，或者是否患有某种自身免疫性疾

病。抗体还可以用于肿瘤的诊断，通过检测特定肿瘤相关抗原的抗体，

有助于早期发现和诊断肿瘤。

在疾病预防方面，抗体具有中和病原体、阻止其感染细胞的能力。

通过接种疫苗或直接注射抗体，可以预防某些传染病的发生。抗体还

可以用于被动免疫，即将抗体直接输入体内，以迅速提高机体的免疫

力，对抗病原体的侵袭。

在治疗方面，抗体药物的研发和应用为许多疾病的治疗带来了新

的希望。通过利用抗体的特异性识别能力，可以设计出针对特定抗原

的药物，以治疗肿瘤、自身免疫性疾病等。抗体还可以用于药物的靶

向输送，将药物精确地送达病变部位，提高治疗效果并减少副作用。

抗体在生物医学领域具有广泛的应用前景和重要的科学价值。随

着生物技术的不断进步和抗体药物的不断发展，相信未来会有更多创

新的抗体应用方式出现，为人类健康事业做出更大的贡献。

2.单克隆抗体技术的出现背景与意义

单克隆抗体技术的出现并非偶然，而是基于人类对抗体认识的深

入以及免疫学、细胞生物学等多个学科领域的技术积累。在单克隆抗

体技术问世之前，抗体的制备主要依赖于传统的多克隆抗体技术，这

种技术制备的抗体成分复杂、特异性低，且难以进行标准化和大规模

生产，限制了其在医学研究和临床应用中的潜力。

20世纪60年代，多发性骨髓瘤的发现为单克隆抗体技术的诞生

提供了重要的启示。多发性骨髓瘤是一种浆细胞来源的肿瘤，能够在

及其在未来医学和生物技术领域的潜力。通过深入分析单克隆抗体的

制备技术、作用机制以及在疾病诊断和治疗中的具体应用案例，我们

期望能够揭示其在现代生物医学中的重要地位及价值。

文章将按照逻辑清晰、层次分明的结构进行展开。我们将回顾单

克隆抗体的起源和早期研究，包括其理论基础的奠定和实验技术的突

破。我们将详细介绍单克隆抗体的制备方法和优化过程，探讨不同制

备技术对抗体性质和功能的影响。文章将重点阐述单克隆抗体在医学

领域的广泛应用，包括感染性疾病、肿瘤治疗、自身免疫性疾病等方

面的研究进展和临床应用案例。我们还将关注单克隆抗体在生物技术

领域的应用，如药物研发、生物分析等方面。

文章将展望单克隆抗体的未来发展趋势和挑战，探讨新技术、新

方法的出现对单克隆抗体领域的影响，以及未来可能面临的技术瓶颈

和市场前景。通过本文的阐述，我们期望能够为读者提供一个全面、

深入的了解单克隆抗体的视角，并激发更多人对这一领域的关注和兴

趣。

二、单克隆抗体技术的起源与基本原理

单克隆抗体技术的起源可追溯至20世纪70年代，当时英国科学

家MiIstein和Kohler首次成功地将产生抗体的单个B淋巴细胞与骨

髓肿瘤细胞进行细胞融合，从而开启了单克隆抗体技术的新篇章。这

一技术的出现，不仅为免疫学领域带来了革命性的突破，也为后续的

医学诊断和治疗提供了强有力的工具。

单克隆抗体技术的基本原理在于利用细胞融合技术，将具有特定

抗原识别能力的B淋巴细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞进行

融合。B淋巴细胞在受到抗原刺激后，能够产生针对该抗原的特异性

抗体，但其在体外环境中无法进行无限分裂。而骨髓瘤细胞则具有在

体外环境中无限传代的能力，但本身并不具备产生抗体的功能。通过

将这两种细胞进行融合，得到的杂交瘤细胞既继承了B淋巴细胞的抗

体产生能力，又保留了骨髓瘤细胞的无限漕殖特性。

在单克隆抗体技术的实际操作中，首先需要通过免疫动物获得特

定的抗原，并激发其体内B细胞产生特异性抗体。从动物的脾脏或骨

髓中分离出这些B细胞，并与骨髓瘤细胞进行融合°融合后的杂交瘤

细胞经过筛选和扩增，最终可以得到能够稳定产生单克隆抗体的细胞

株。这些单克隆抗体具有高度特异性和亲和力，能够精确识别并结合

目标抗原，从而在医学诊断、治疗和科研领域发挥重要作用。

单克隆抗体技术的出现，极大地推动了免疫学领域的发展。与传

统的多克隆抗体相比，单克隆抗体具有更高的特异性和纯度，能够更

准确地识别目标抗原，减少非特异性反应和交叉反应的发生。单克隆

抗体还可以通过基因工程技术进行改造和优化，进一步拓展其应用范

围和功能。

随着生物技术的不断发展和完善，单克隆抗体技术也在不断更新

和优化。该技术已经广泛应用于医学诊断、治疗、科研等多个领域，

为人类的健康事业做出了重要贡献。随着对单克隆抗体技术的深入研

究和探索，相信其将在更多领域展现出更广阔的应用前景和潜力。

1.杂交瘤技术的诞生与发展

在生物医学研究领域中，单克隆抗体的出现堪称是一场革命性的

突破。这一技术的诞生与发展，离不开杂交瘤技术的创新与应用。杂

交瘤技术，又称单克隆抗体技术，是制备抗体的关键手段，为现代生

物医学研究提供了强大的工具。

杂交瘤技术的诞生可以追溯到20世纪70年代中期。英国剑桥大

学的科学家Milstein和Khler率先开展了这一领域的研究。他们巧

妙地将具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞与能够分泌抗体的小鼠B细

胞进行融合，成功获得了能够传代培养和持续分泌单克隆抗体的小鼠

杂交瘤细胞。这一技术的诞生，不仅解决了传统抗体制备方法中抗体

来源有限、特异性不强等问题，而且为单克隆抗体的制备提供了全新

的途径。

随着杂交瘤技术的不断发展，其应用领域也不断拓宽。科学家们

通过优化细胞融合条件、改进筛选方法等手段，不断提高杂交瘤细胞

的稳定性和抗体产量。他们还探索了将杂交瘤技术应用于不同物种、

不同组织来源的抗体制备，使得单克隆抗体的种类和数量都得到了极

大的丰富。

杂交瘤技术的发展也为生物医学研究带来了深远的影响。通过制

备特异性强的单克隆抗体，科学家们能够更准确地定位和研究生物体

内的特定分子和细胞，从而揭示了许多重要的生物学过程和疾病机制。

单克隆抗体还广泛应用于药物研发、免疫治疗等领域，为人类的健康

事业做出了重要贡献。

杂交瘤技术也面临着一些挑战和限制。由于鼠源性抗体与人体亲

和力有限，可能导致成药安全性问题；从免疫到特异性杂交瘤鉴定的

工作流程漫长且复杂，也限制了该技术的广泛应用。随着科学技术的

不断进步和创新，相信未来杂交瘤技术将会得到进一步的完善和发展,

为生物医学研究带来更多的突破和进步。

2.单克隆抗体技术的基本原理

单克隆抗体技术的诞生，无疑是现代生物技术领域的一次重大突

破。这一技术的核心原理在于，通过细胞融合技术，将具有分泌特异

性抗体能力的B淋巴细胞与具有大量繁殖能力的骨髓瘤细胞进行融

合，形成杂交瘤细胞。这种杂交瘤细胞既保留了B淋巴细胞合成分泌

特异性抗体的能力，又具备了骨髓瘤细胞无限增殖的特性，从而实现

了既能生产高度均仅针对某一特定抗原表位的抗体，又能实现抗体的

大量制备。

在单克隆抗体技术的实际操作中，首先需要获得针对某一特定抗

原的免疫B淋巴细胞。这通常是通过将抗原注射入动物体内，刺激其

免疫系统产生相应的抗体，然后从动物的脾脏等组织中分离出B淋巴

细胞。利用细胞融合技术，将这些B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合,

形成杂交瘤细胞。这些杂交瘤细胞经过筛选和克隆化，最终得到能够

稳定分泌针对特定抗原表位抗体的细胞株。

通过培养这些杂交瘤细胞，我们可以获得大量的单克隆抗体。这

些抗体具有高度均一性，只针对特定的抗原表位，因此具有极高的特

异性和灵敏度。由于单克隆抗体技术可以实现抗体的大量制备，因此

也为抗体的应用提供了便利.

单克隆抗体技术的基本原理在于通过细胞融合技术，将B淋巴细

胞与骨髓瘤细胞进行融合，形成能够稳定分泌高度均针对特定抗原表

位抗体的杂交瘤细胞。这一技术的出现，为现代生物医学研究和临床

应用提供了强有力的工具。

3.早期单克隆抗体的制备过程

单克隆抗体的制备过程是一项精细且复杂的生物技术操作，它标

志着生物医学领域的一次重大突破。这一过程的实现主要依赖于细胞

融合技术和选择性培养技术。

制备单克隆抗体需要从免疫动物中获取致敏B淋巴细胞。研究者

会选择纯系小鼠作为免疫动物，通过注射特定的抗原，使小鼠产生免

疫反应并生成相应的B淋巴细胞。这些B淋巴细胞能够分泌特异性抗

体，针对特定的抗原进行识别和攻击。

研究者需要将致敏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合。骨髓瘤细

胞是一种能够在体外无限增殖的细胞，而B淋巴细胞则具有分泌特异

性抗体的能力。通过细胞融合技术，研究者可以将这两种细胞的特性

结合在一起，形成杂交瘤细胞。这种杂交瘤细胞既能够无限增殖，又

能够分泌针对特定抗原的抗体。

融合后的杂交瘤细胞需要通过选择性培养技术进行筛选。研究者

会利用特定的培养基，筛选出那些能够稳定分泌特异性抗体的杂交瘤

细胞系。这些细胞系被进一步培养和扩增，用于大量生产单克隆抗体。

研究者会从筛选出的杂交瘤细胞系中提取单克隆抗体。这些抗体

具有高度特异性、高纯度和高灵敏度的特点，能够用于疾病的诊断、

治疗和生物研究等多个领域。

早期单克隆抗体的制备过程虽然复杂，但它的成功为生物医学领

域带来了巨大的变革。随着技术的不断进步和优化，单克隆抗体的制

备过程变得更加高效和可靠，为人类的健康事业做出了重要贡献。

三、单克隆抗体技术的突破与进展

单克隆抗体技术的突破与进展可谓日新月异，其在生物医药领域

的地位日益凸显，为疾病诊断与治疗带来了革命性的变革。

自20世纪80年代初，Kohler和Mlsrein成功建立了体外细胞

杂交融合的杂交瘤细胞技术，从而制备出纯度极高的单克隆抗体以来,

单克隆抗体技术便开启了飞速发展的序幕。这一技术的出现，彻底改

变了传统多克隆抗体的生产方式，使得抗体的生产更加标准化、产量

更高、品质更均一°

随着生物技术的不断发展，单克隆抗体技术也在不断创新和完善。

基因敲除技术、蛋白质工程等新技术的应用，使得我们能更加精确地

控制抗体的性质和功能。通过对抗体基因的改造，可以使其具有更强

的亲和力、更低的免疫原性或更好的稳定性，从而进一步提高其在诊

断和治疗中的效果。

单克隆抗体技术的突破还体现在制备过程的优化上。通过改进细

胞培养条件、优化杂交瘤细胞的筛选和克隆方法，可以进一步提高单

克隆抗体的产量和纯度。新的分离和纯化技术的出现，也使得单克隆

抗体的制备更加高效和便捷。

在临床应用方面，单克隆抗体技术也取得了显著的进展。越来越

多的单克隆抗体药物被批准用于治疗各种疾病，如癌症、自身免疫性

疾病等。这些药物通过特异性地识别并攻击病原体或异常细胞，实现

了对疾病的精准治疗，大大提高了治疗效果并降低了副作用。

随着生物信息学和计算机科学的发展，我们对抗体与抗原的相互

作用机制将有更深入的理解。这将为单克隆抗体技术的进一步优化和

创新提供理论支持。随着精准医疗概念的普及，单克隆抗体在个体化

治疗中的应用也将得到更大的发展。

单克隆抗体技术的突破与进展不仅提高了我们对于生命现象的

理解，也极大地推动了医学和其他相关领域的发展。我们有理由相信,

在不久的将来，单克隆抗体技术将在更多领域发挥更大的作用，为人

类健康事业作出更大的贡献。

1.基因工程抗体技术的兴起

随着生物技术的迅猛发展，基因工程抗体技术于20世纪80年代

后期崭露头角，并迅速成为单克隆抗体研究领域的崭新篇章。这一技

术的兴起，不仅极大地丰富了抗体药物的种类，更提升了其疗效和安

全性，为众多疾病的诊断和治疗开辟了新的道路。

基因工程抗体技术通过改造抗体的基因序列，实现对抗体性质的

精确调控。与传统的杂交瘤技术相比，基因工程抗体技术具有更高的

灵活性和可定制性，能够制备出具有特定功能、更高亲和力、更低免

疫原性的抗体。通过基因敲除或替换技术，可以消除抗体中的非必需

成分，降低其在人体内的免疫原性，从而提高药物的耐受性和安全性。

基因工程抗体技术还能够实现抗体的人源化改造。通过将鼠源抗

体中的部分序列替换为人源序列，可以显著降低抗体在人体内的免疫

排斥反应，提高药物的疗效和患者的生存质量。这一技术的突破，使

得单克隆抗体药物在肿瘤治疗、自身免疫性疾病等领域的应用更加广

泛。

随着基因测序和蛋白质组学等技术的不断发展，基因工程抗体技

术的应用也日益深入。研究人员可以通过对抗体基因和蛋白质结构的

深入分析，揭示抗体与抗原相互作用的分子机制，为抗体的优化和设

计提供更为坚实的理论基础。

基因工程抗体技术的兴起为单克隆抗体的研究和发展注入了新

的活力。这一技术不仅提高了抗体的性能和质量，更拓展了其在医学

领域的应用范围。随着基因编辑、合成生物学等前沿技术的不断进步,

基因工程抗体技术有望在单克隆抗体的制备和应用中发挥更加重要

的作用，为人类健康事业作出更大的贡献。

2.人源化抗体、嵌合抗体和完全人源化抗体的出现

随着单克隆抗体技术的不断发展和完善，人们逐渐认识到鼠源单

克隆抗体在人体应用中的局限性，如免疫原性强、半衰期短等。科研

人员开始致力于改造和优化单克隆抗体，使其更好地适应人体环境,

提高治疗效果。这一过程中，人源化抗体、嵌合抗体和完全人源化抗

体的出现，标志着单克隆抗体技术进入了一个新的阶段。

人源化抗体是通过基因工程技术对鼠源单克隆抗体进行改造，使

其大部分氨基酸序列为人源序列所取代，从而降低了异源性，减少了

免疫副反应。这种抗体保留了亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性，

同时又大大降低了对人体的免疫原性，因此在临床应用中具有更广阔

的前景。

嵌合抗体则是利用DNA重组技术，将异源单抗的轻、重链可变区

基因插入含有人抗体恒定区的表达载体中，转化哺乳动物细胞表达出

嵌合抗体。这种抗体分子中轻重链的V区是异源的，而C区是人源的，

从而减少了异源性抗体的免疫原性，同时保留了亲本抗体特异性结合

抗原的能力。

完全人源化抗体则是通过基因敲除术将小鼠1g基因敲除，代之

以人Ig基因，然后用Ag免疫小鼠，再经杂交瘤技术产生。这种抗体

完全由人源基因编码，因此具有更好的人体相容性和更低的免疫原性,

是目前抗体技术发展的一个重要方向。

人源化抗体、嵌合抗体和完全人源化抗体的出现，不仅提高了单

克隆抗体的治疗效果，降低了对人体的免疫原性，同时也拓展了单克

隆抗体在医学领域的应用范围。这些新型的抗体在疾病诊断、治疗和

预防等方面发挥着越来越重要的作用，为人类的健康事业做出了巨大

的贡献。

3.抗体库的构建与高通量筛选技术

随着生物技术的飞速发展，单克隆抗体的研究与应用进入了全新

的阶段。抗体库的构建与高通量筛选技术的出现，为单克隆抗体的制

备和应用提供了强大的技术支持:。

又称为抗体基因文库，是指通过基因工程手段，将大量的抗体基

因片段集合在一起，形成一个庞大的基因库。这些抗体基因片段可以

来源于自然界中的免疫细胞，也可以通过合成生物学手段进行人工设

计。抗体库的构建不仅实现了对抗体资源的有效整合，更为后续的抗

体筛选提供了丰富的候选对象。

高通量筛选技术则是抗体库构建后的关键环节。传统的抗体筛选

方法往往效率低下，且难以保证筛选出的抗体具有高度的特异性和亲

和力。而高通量筛选技术则通过自动化、并行化的手段，实现对大量

抗体的高效筛选。基于流式细胞术的高通量筛选技术，可以在短时间

内对数以万计的抗体进行筛选，并准确评估其与抗原的结合能力。

抗体库的构建与高通量筛选技术的结合，使得单克隆抗体的制备

更加高效、精准。通过构建不同种类的抗体库，如人源化抗体库、嵌

合抗体库等，可以针对特定的疾病或抗原制备出具有高度特异性和亲

和力的单克隆抗体。这些抗体在疾病诊断、治疗以及生物研究等领域

具有广泛的应用前景。

高通量筛选技术还可以应用于抗体的优化和改造。通过对抗体结

构、功能等方面的深入研究，可以设计出更加高效、安全的抗体药物，

为人类的健康事业作出更大的贡献。

抗体库的构建与高通量筛选技术的出现，为单克隆抗体的制备和

应用开辟了新的道路。随着这些技术的不断完善和发展，相信未来单

克隆抗体将在更多领域展现出其独特的优势和潜力。

四、单克隆抗体在生物医药领域的应用

单克隆抗体作为现代生物医药领域的一颗璀璨明珠，其应用已经

渗透到多个疾病治疗领域，为人类的健康事业做出了巨大贡献。

在肿瘤治疗方面，单克隆抗体以其高度的特异性和亲和力，成为

肿瘤免疫治疗的重要武器。通过识别并结合肿瘤细胞表面的特定抗原,

单克隆抗体能够激活机体的免疫系统，对肿瘤细胞进行精准打击。己

有多种针对不同肿瘤类型的单克隆抗体药物问世，并在临床治疗中取

得了显著疗效。

单克隆抗体在自身免疫性疾病的治疗中也发挥着重要作用。这类

疾病往往是由于机体免疫系统对自身组织产生异常反应所致。单克隆

抗体通过调节免疫系统的功能，抑制过度活跃的免疫反应，从而减轻

疾病症状并改善生活质量。

在感染性疾病领域，单克隆抗体同样展现出强大的应用潜力。针

对病毒、细菌等病原体，研究人员可以制备出具有中和作用或阻断感

染过程的单克隆抗体，为感染性疾病的预防和治疗提供新的手段。

单克隆抗体还在神经性疾病、心血管疾病等其他领域发挥着重要

作用。随着研究的深入和技术的不断进步，单克隆抗体在生物医药领

域的应用前景将更加广阔。

1.疾病的诊断与治疗

单克隆抗体的出现与发展，极大地推动了疾病的诊断与治疗技术

的进步。作为一种高度特异性的生物制剂，单克隆抗体能够精准地识

别并结合目标抗原，从而在疾病的诊断、预防和治疗中发挥着不可替

代的作用。

在诊断方面，单克隆抗体被广泛应用于各种疾病的检测。通过制

备针对特定病原体的单克隆抗体，医学界可以实现对疾病的快速、准

确诊断。在感染性疾病的诊断中，单克隆抗体可以用于检测病原体抗

原或抗体，帮助医生快速判断病原体类型，为患者提供及时有效的治

疗方案。单克隆抗体还可用于肿瘤的诊断，通过检测肿瘤细胞表面的

特异性抗原，实现对肿瘤的早期发现和定位。

在治疗方面，单克隆抗体已经成为许多疾病的重要治疗手段。它

们可以通过中和病原体、阻断信号传导、调节免疫反应等多种机制，

实现对疾病的精准治疗。在肿瘤治疗中，单克隆抗体被广泛应用于靶

向治疗和免疫治疗。通过针对肿瘤细胞表面的特异性抗原，单克隆抗

体可以精准地抑制肿瘤细胞的生长和扩散，提高患者的生存率和生活

质量。在自身免疫性疾病、感染性疾病等领域，单克隆抗体也发挥着

重要作用，为患者的康复带来了希望。

随着生物技术的不断发展和完善，单克隆抗体的制备技术也日益

成熟。我们有理由相信，单克隆抗体将在疾病的诊断与治疗领域发挥

更加广泛和深入的作用，为人类的健康事业作出更大的贡献。

2.药物研发与生物制剂

随着单克隆抗体技术的日益成熟，其在药物研发与生物制剂领域

的应用也愈加广泛和深入。单克隆抗体因其高度的特异性和靶向性，

成为了许多疾病治疗的重要工具，尤其在肿瘤、自身免疫性疾病以及

神经系统疾病等领域展现出了巨大的潜力。

在药物研发方面，单克隆抗体药物已经成为制药业发展最快的领

域之一。通过针对特定疾病抗原设计并制备单克隆抗体，研究人员能

够开发出针对性更强、副作用更小的治疗药物。一些针对特定肿瘤抗

原的单克隆抗体药物，能够精确识别并攻击肿瘤细胞，从而提高治疗

效果并降低对正常细胞的损害。单克隆抗体还可用于携带其他药物分

子，实现药物的定向输送和释放，进一步提高治疗效率。

在生物制剂方面，单克隆抗体也发挥着越来越重要的作用。生物

制剂是指利用生物技术手段制备的具有生物活性的药物，而单克隆抗

体正是其中的重要一员。通过基因工程技术，研究人员可以对单克隆

抗体的结构进行改造和优化，以提高其稳定性和治疗效果。单克隆抗

体还可用于制备免疫诊断试剂，如酶联免疫吸附试验（EL1SA）等，

为疾病的早期诊断和治疗提供有力支持。

随着精准医疗概念的普及和发展，单克隆抗体在个体化治疗中的

应用也H益受到重视。通过对患者体内特定抗原的识别和检测，医生

能够为患者制定更加精准的治疗方案，提高治疗效果并降低不良反应

的发生。

尽管单克隆抗体在药物研发与生物制剂领域取得了显著的成果，

但仍面临一些挑战和问题。单克隆抗体的制备过程相对复杂且成本较

高，限制了其在一些经济欠发达地区的应用。对于某些疾病，单克隆

抗体的治疗效果可能并不理想，需要进一步研究和改进。

单克隆抗体在约物研发与生物制剂领域的应用已经取得了显著

的成果，为许多疾病的治疗提供了新的手段。随着技术的不断进步和

应用领域的不断拓展，单克隆抗体有望在更多领域发挥更大的作用，

为人类健康事业做出更大的贡献。

五、单克隆抗体技术的挑战与前景

尽管单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗方面取得了重大成就，但

其发展仍然面临一些挑战。制备单克隆抗体的过程相对复杂，需要专

业的技术和设备支持，这在一定程度上限制了其应用的广泛性和可及

性。单克隆抗体的生产成本较高，尤其是在研发和规模化生产过程中,

这使得其市场应用受到一定的经济压力。单克隆抗体在体内的半衰期

相对较短，需要频繁给药，这给患者带来了不便，也增加了治疗成本。

尽管存在这些挑战，单克隆抗体技术的发展前景依然广阔C随着

科技的不断进步和创新，我们有望解决上述挑战，并推动单克隆抗体

技术在更多领域得到应用。通过优化制备工艺和提高生产效率，可以

降低单克隆抗体的生产成本，使其更加普及和可负担。通过改进给药

方式和延长半衰期，可以提高单克隆抗体的治疗效果和患者的生活质

量。

单克隆抗体技术有望在精准医疗、个体化治疗等领域发挥更大的

作用。随着对疾病机制的深入理解和生物信息学、计算机科学的快速

发展，我们可以更加精确地设计和优化单克隆抗体，以针对特定的疾

病靶点进行精准治疗。单克隆抗体技术还有望与其他生物技术手段相

结合，如基因编辑、细胞治疗等，共同推动医学领域的发展。

虽然单克隆抗体技术目前面临一-些挑战，但其广阔的应用前景和

巨大的发展潜力使其成为生物医药领域的重要研究方向。我们有理由

相信，在未来的发展中，单克隆抗体技术将为人类健康和医学事业做

出更大的贡献。

1.技术挑战与局限性

单克隆抗体的出现与发展，无疑是生物医学领域的一项重大突破。

其制备与应用过程中也面临着诸多技术挑战与局限性。

单克隆抗体的制备过程需要精细的细胞融合技术和筛选方法。尽

管杂交瘤技术的出现极大地推动了单克隆抗体的生产，但这一技术仍

需要经验丰富的操作人员和严格的质量控制。细胞融合的成功率并不

总是理想的，这导致制备过程的效率较低，成本较高。

单克隆抗体的亲和性和生物活性存在一定的局限性。尽管单克隆

抗体具有高度特异性和纯净度，但其对某些抗原的识别能力可能不如

多克隆抗体。单克隆抗体在体内环境中的稳定性和持久性也需进一步

提高，以确保其治疗效果的持续性和安全性。

单克隆抗体的应用还受到人体免疫系统的限制。由于单克隆抗体

通常来源于其他物种(如小鼠)，它们在人体内可能引发免疫反应，

产生人抗鼠抗体(HAMA)o这不仅可能影响单克隆抗体的治疗效果，

还可能带来安全隐患。研究人员需要通过抗体人源化等技术手段来降

低这种风险。

单克隆抗体的制备和应用还受到伦理和法规的约束。在制备过程

中，可能需要使用动物进行实验，这引发了关于动物福利和伦理的讨

论。单克隆抗体的临床应用也需要经过严格的审批和监管，确保其安

全性和有效性。

单克隆抗体的出现与发展虽然为生物医学领域带来了巨大的进

步，但在其制备和应用过程中仍面临着诸多技术挑战与局限性。随着

科技的不断进步和研究的深入，相信这些挑战和局限性将得到逐步解

决，单克隆抗体将在更多领域发挥更大的作用。

2.前景展望

单克隆抗体作为现代生物医学领域的濯璨明珠，其出现与发展为

疾病治疗与预防开辟了新的道路。单克隆抗体技术将继续在多个方面

展现出广阔的前景。

随着基因编辑技术的不断进步，单克隆抗体的设计和优化将更加

精准和高效。科研人员将能够更精确地调控抗体的亲和力、特异性和

稳定性，从而开发出更加高效、安全的抗体药物。这将有助于解决当

前抗体药物存在的一些局限性和问题，如免疫原性、抗药性等。

单克隆抗体在个性化医疗和精准治疗方面将发挥越来越重要的

作用。通过对患者基因型、表型以及疾病机制的深入研究，科研人员

将能够开发出针对特定患者群体的定制化抗体药物。这将有助于提高

治疗效果、降低副作用，并推动医疗领域向更加个性化和精准化的方

向发展。

单克隆抗体在肿瘤免疫治疗、感染性疾病治疗以及自身免疫性疾

病治疗等领域的应用也将不断拓展。随着对肿瘤免疫逃逸机制、病原

体感染过程以及自身免疫反应调控机制的深入了解，科研人员将能够

开发出更加有效的抗体药物，为这些疾病的治疗提供新的希望。

单克隆抗体技术还将与其他生物技术手段相结合，形成更加综合

和高效的治疗方案。抗体药物可以与细胞疗法、基因疗法等技术相结

合，共同应对复杂性疾病的挑战。这种跨学科的合作将为单克隆抗体

技术的发展注入新的活力，推动生物医学领域不断进步。

单克隆抗体的前景展望十分广阔。随着科研人员的不断努力和技

术手段的不断创新，单克隆抗体将在疾病治疗与预防中发挥越来越重

要的作用，为人类健康事业做出更大的贡献。

六、结论

单克隆抗体的出现与发展，无疑是现代生物医学领域的一大革命

性突破。从最初的基础理论探索，到技术上的不断突破与创新，再到

如今在医疗实践中的广泛应用，单克隆抗体已经深刻改变了我们对许

多疾病的认识与治疗方式。

通过回顾单克隆抗体的出现与发展历程，我们可以看到，科技进

步是推动其发展的重要动力。随着分子生物学、细胞生物学、免疫学

等相关学科的发展，以及基因工程技术、蛋白质工程技术等现代生物

技术的不断创新，单克隆抗体的制备技术越来越成熟，性能也越来越

优越。

单克隆抗体在医疗实践中的应用也取得了显著成效。无论是用于

疾病诊断，还是用于治疗，单克隆抗体都展现出了独特的优势和潜力。

尤其在肿瘤治疗、自身免疫性疾病治疗等领域，单克隆抗体已经成为

不可或缺的重要药物。

单克隆抗体的发展仍面临一些挑战和问题。制备成本较高、免疫

原性较强、可能引发不良反应等。未来还需要在制备技术、免疫原性

降低、安全性提高等方面进行深入研究和泰索。

L总结单克隆抗体技术的出现与发展历程

在生物医学领域，单克隆抗体技术的出现与发展历程堪称一部波

澜壮阔的史诗。自1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦开

创性地建立了杂交瘤技术以来，单克隆抗体便以其独特的优势，逐渐

在科研和临床应用中占据重要地位。

杂交瘤技术的诞生，标志着抗体技术从多克隆抗体时代迈向了单

克隆抗体时代。这一技术通过将骨髓瘤细胞与经抗原激活的B细胞融

合，形成能够持续分泌特定抗体的杂交瘤细胞，从而实现了对单一抗

原决定簇的高度特异性识别。这种高度均一且特异性强的抗体，为后

续的生物医学研究和疾病治疗提供了有力工具。

随着基因工程技术的不断进步，单克隆抗体技术也迎来了新的发

展阶段。研究者们开始尝试将鼠源单抗进行人源化改造，以减少其在

人体内的免疫原性。从最初的人鼠嵌合单抗，到进一步的人源化单抗,

再到如今的全人源单抗，每一次技术的飞跃都使得单克隆抗体在临床

应用中的安全性和有效性得到了显著提升。

单克隆抗体己经成为生物医药领域的重要组成部分，广泛应用于

肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病等多个领域的治疗。随着技术的

不断发展，单克隆抗体的制备和应用也将更加精准、高效和个性化，

为人类的健康事业贡献更多力量。

回顾单克隆抗体技术的出现与发展历程，我们不禁为科学家们的

智慧和勇气所折服。正是他们不懈的探索和创新，才使得这一技术得

以不断发展和完善，为人类健康事业带来了革命性的变革。我们有理

由相信，单克隆抗体技术将继续在生物医学领域发挥重要作用，为人

类的健康事业创造更加美好的未来。

2.强调单克隆抗体在生物医药领域的重要性与潜力

单克隆抗体在生物医药领域的重要性与潜力，可谓是不容忽视的

革命性力量。它们凭借高度特异性、强效性和低副作用等诸多优势,

在疾病诊断和治疗中发挥着日益重要的作用。

单克隆抗体在疾病治疗方面展现出了巨大的潜力。它们能够精确

地识别并结合到目标抗原上，从而有效地中和病原体、阻断病理过程

或调节免疫反应。这使得单克隆抗体成为治疗多种疾病，包括癌症、

自身免疫性疾病和感染性疾病等的有力武器。某些针对特定肿瘤抗原

的单克隆抗体，能够诱导肿瘤细胞凋亡或抑制其生长，为癌症患者提

供了新的治疗选择。

单克隆抗体在疾病诊断方面也具有重要的应用价值。它们可以作

为高灵敏度和高特异性的探针，用于检测生物样本中的病原体、抗原

或抗体等生物标志物。这种诊断方法不仅准确度高，而且能够实现对

疾病的早期发现和预测，为疾病的预防和治疗提供了有力支持。

随着生物技术的不断发展和创新，单克隆抗体的制备技术和应用

策略也在不断进步。基因工程技术的应用使得我们可以根据需要设计

和改造单克隆抗体的结构和功能，从而进一步提高其疗效和降低副作

用。基于单克隆抗体的免疫疗法和药物联合疗法等新型治疗策略也在

不断探索和实践中，为未来的生物医药领域带来了更多的可能性。

单克隆抗体在生物医药领域的重要性和潜力不言而喻。它们不仅

为疾病的治疗和诊断提供了新的思路和方法，也为生物医药产业的创

新发展注入了新的活力。随着技术的不断进步和应用领域的不断扩展,

我们有理由相信单克隆抗体将会在生物医药领域发挥更加重要的作

用。

3.对未来研究方向与发展趋势的展望

随着基因编辑技术的不断进步，如CRISPRCas9等，我们可以预

见，未来的单克隆抗体研究将更加精准地定位并编辑目标基因，从而

生产出具有更高亲和力和特异性的抗体。这将为疾病治疗提供更加有

效的武器，尤其是针对那些目前尚无有效治疗手段的复杂疾病。

单克隆抗体在免疫治疗领域的应用将更加广泛。随着对免疫系统

机制的深入理解，研究者们将能够设计出更加智能的单克隆抗体，它

们能够精准地识别并攻击病原体，同时减少对正常细胞的损伤。这将

为癌症、自身免疫性疾病等提供新的治疗策略。

单克隆抗体在预防医学领域也将发挥重要作用。通过研发针对特

定病原体的单克隆抗体，我们可以实现对疾病的早期预防，从而降低

疾病的发生率和传播风险。这对于控制传染病、提高公共卫生水平具

有重要意义。

随着生物信息学和大数据技术的快速发展，单克隆抗体的研发过

程将更加高效和智能化。通过对大量数据的挖掘和分析，我们可以预

测抗体的性能、优化实验设计，并加速新抗体的发现和验证过程。这

将大大缩短单克隆抗体的研发周期，降低研发成本，为更多患者带来

福音。

单克隆抗体的未来研究方向与发展趋势将涉及基因编辑技术的

应用、免疫治疗领域的拓展、预防医学的重要性以及生物信息学和大

数据技术的融合。这些发展方向将共同推动单克隆抗体领域取得更加

丰硕的成果，为人类的健康事业做出更大的贡献。

参考资料：

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均仅针对某一特定

抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤(hybridcma)

抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的

致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。

用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一

种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。

单克隆抗体是人工制备的杂交瘤细胞生产的，杂交瘤细胞是由一

个经抗原激活后的B细胞与一个骨髓瘤细胞融合形成。单克隆抗体优

点：纯度高，特异性强，交叉反应少，制备的成本低。缺点：对技术

有一定的要求，而且通过抗原的化学处理很容易丢失表位。

1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C米尔斯坦在自然杂交技术

的基础上，创建了杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小

鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠B细胞融合，成为杂交细胞

系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞

的合成和分泌特异性抗体的特点。将这种杂交瘤作单个细胞培养，可

形成单细胞系，即单克隆。利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能得

到大量的、高浓度的、非常均一的抗体，其结构、氨基酸顺序、特异

性等都是一致的，而且在培养过程中，只要没有变异，不同时间所分

泌的抗体都能保持同样的结构与机能。这种单克隆抗体是用其他方法

所不能得到的。

这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和

可重复性问题，可用于探讨

⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法（“导弹”疗法,利用

单克隆抗体与靶细胞特异性结合，将药物带至病灶部位。单克隆抗体

可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究，为人

类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。

免疫动物是用R的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的

过程。一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方

案进行免疫注射。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，

刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴

细胞。

采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压

研磨，制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞

按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各

种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择

性培养基。在HAT培养基中，未融合的小鼠骨髓瘤细胞中DNA的从头

合成途径会被阻止；未融合的骨髓瘤细胞又因缺乏次黄喋吟-鸟喋吟-

磷酸核糖转移酶(HGPRT),不能利用补救途径合成DNA；这样未融合

小鼠骨髓瘤细胞的两个DNA合成途径都被阻止，骨髓瘤细胞DNA不能

复制而死亡。未融合的B淋巴细胞虽具有次黄噪吟-鸟喋吟-磷酸核

糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的

杂交瘤细胞由于从3淋巴细胞获得了次黄喋吟-鸟喋吟-磷酸核糖转

移酶，可以通过补救途径合成DNA,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的

特性，杂交瘤细胞能在HAT培养基中存活和增殖。

在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性

单克隆抗体的细胞，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进

行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，

筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。

经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、

亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

(1)体内诱生法取BALB/c小鼠，首先腹腔注射5ml液体石蜡或

降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞

在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠

腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。

(2)体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过

程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去

除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的

抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的

生产量。

是指能够刺激机体产生(特异性)免疫应答，并能与免疫应答产

物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生免疫效应(特异性反应)的

物质。

很多物质都可以成为抗原，抗原的具体分类可以参见抗原，在进

行单克隆抗体制备过程中，很多物质都可以成为抗原，在常规的科研

实验中，科研者经常选用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug重组蛋白、

偶联多肽、偶联小分子等作为抗原产生特异性的单克隆抗体。

单克隆抗体制备的宿主动物一般选用BALB/c小鼠，鼠单抗的应

用范围相当广泛，一些国内外公司均开发出了兔的单克隆抗体制备技

术。

免疫原分为可溶性抗原和颗粒性（细胞）抗原，用无菌盐水稀释

并与佐剂混合，腹腔注射抗原与佐剂彻底混匀后形成的稳定乳状液，

在免疫原提供持续的免疫应答基础上进行加强免疫

细胞融合的方法有物理法，如电融合、激光融合，化学融合法和

生物融合法，如灭活的仙台病毒，此处例举化学融合法中的一种即聚

乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG）,在分子量为200〜700时，呈无色、

无臭的粘稠状液体，分子量大于1000时，呈乳白色蜡状固体，能溶

于水、乙醇及其他许多有机溶剂，与许多化学药品不起作用。用作细

胞融合剂的聚乙二醇一般选用分子量为4000者，常用浓度为50%,

pHO〜pH2（用1O96N&HCO3调整），分子量小的PEG,融合效应差，分

子量过大，则粘性太大，不易操作。50%浓度，pH偏碱时融合效应最

高口也有采用30%〜50%浓度的PEG加上10%二甲亚飒口不同批号的

PEG,即使分子量相同，但融合率却有明显差异，选用时必须注意。

每批都必须进行细胞毒性试验后方可应用。要买高纯度的，一般选供

气相色谱用的PEG。

融合的方法很多，常用的有转动法和离心法。融合时脾细胞和骨

髓瘤细胞的比例为1:1至1（）:1不等。3:1或5:1最为常用。

（6）50%PEG：取分子量4000,高纯度的（日本进口或Serva）PEG10g

放入25ml瓶中高压灭菌，使用前用预热于40℃的1640液10ml等量

(W/V)混合，以酚红检查pH,一般不必调pH。如pH有改变，可用

HC1或NaHC03调整。

⑵在50ml沉淀管中混合108脾细胞和107小鼠骨髓瘤细胞，并

力口入50nli5%FCS—1640液。

⑸轻敲管底部，使沉淀流动，把沉淀管放于水浴中，使其

达融合温度。

⑹加预热至40c的50%PEG8ml,用1ml吸管缓慢滴加，边加边摇

沉淀管，肉眼观察可见有颗粒出现，滴加过程要求持续2min。

(M)往已于前一日种有饲养细胞的40孔塑料培养盘中滴加融合的

细胞液,每孔1滴(约05ml)。

(⑹第10日换入含HAT的完全1640培养液。注意轻轻吸取上清液,

勿将固定于孔底的细胞吸出，根据需要加入适量的饲养细胞。

⑰于第15日加入含有HAT的完全1640培养液。在每次换液前用

倒置显微镜观察，大约在10天左右就可观察到杂交瘤细胞生长出来。

大多数杂交瘤细胞在10~20天内出现，但也有在1个月左右才能出现

的。杂交瘤细胞出现后，吸取上清液，检查抗体。

(18)对继续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，依情

况取消HAT液和完全1640液而代之以10%FCS-1640液。同时保存于

液氮和进行克隆化，在这期间每代都要检查抗体，以防止产生抗体细

胞的变异和丢失。

1.技术上的误差常常导致融合的失败。供者淋巴细胞没有查到

免疫应答。这必然要失败的。

2.融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一

个无毒无菌的操作环境。

克隆化的细胞可以在体外进行大量培养，收集上清液而获得大量

的单一的克隆化抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不

能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液。而体内杂交瘤细胞繁殖

可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞

的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小

鼠(无胸腺的裸鼠)，杂交瘤细胞就开始无限地繁殖，直至宿主死亡。

产生肿瘤细胞的小鼠腹水和血清中含有大量的杂交瘤细胞分泌的单

克隆抗体，这种抗体的效价往往高于培养细胞上清液的1001000倍。

利用免疫抑制剂，如降植烷、液体石蜡、抗淋巴细胞血清等，可

以加速和促进肿瘤的生长。

(2)收取对数生长期的杂交瘤细胞，用5%FCS—1640液洗涤一次,

1000r/min离心lOmin。

(3)取样，用台盼蓝染色，计活细胞数，重新用5%FCS—1640液

配成0X107细胞的悬液。

(4)给注射了降植烷的小白鼠接种杂交瘤细胞，每只腹腔注射1ml

(含0X107个细胞/ml)o

(5)接种后10天左右时间肿瘤体积最大，此时可由腹腔抽取腹水,

每隔广3天取1次，可取10次。血清可由腋下动脉或心脏采血后分

离。

(1)小鼠腹水用冷PBS液稀释4倍后，于00义105转离心30min,

去沉淀。

(2)在4c于上清中缓缓滴加饱和硫酸铉液，边加边搅拌，使

溶液最终为50%硫酸镂浓度。

(3)此溶液置冰中30miiT60min,然后5000r/min离心lOmin,

去上清。

(4)将沉淀溶于Tris-HCl缓冲液(40mMol/LNaCl)中(溶液

可能混浊)。

(5)装入透析袋于Tris—HC1缓冲液(20mMol/LNaCl)中透析

除盐。

(6)离心去沉淀。(7)溶液稀释(1:100或更高倍稀释)后，

于280nm测蛋白含量，估计蛋白质含量lA280unit=8mg蛋白质一般每

ml腹水中，含有总蛋白约25mg'36mgo

(8)过DEAE一纤维素柱：纤维素柱高40cm,以20mMol/LNaClTris

缓冲液平衡。透析样品以Tris缓冲液等量稀释。

样品进入柱床速度为以NaCl线形梯度洗脱。大

部分单克隆IgG于40mMol/L和80mMol/LNaCl洗脱，也有极少例外的

单克隆抗体于120nlMol/L~150mMol/LNaCl洗脱。测0D280nm收集蛋白

峰，单克隆IgG保存备用。

杂交瘤产生各种免疫球蛋白，但主要是IgG和Ig'L究竟是哪种

为主，则决定于抗原的免疫程序。且3天后就取脾，多为产生IgM的

B淋巴细胞。免疫多次的多为IgG。

2.单克隆抗体的类型、亚型的测定：购买兔抗小鼠Ig类型和亚

型的标准抗血清，采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类

型和亚型。

本试剂盒利用双抗体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清

中单克隆抗体或特异亲和纯化的单克隆抗体的类和亚类（可区分出

IgGl\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）o采用小鼠抗体共有位点的二抗

包被微孔板，与加入的培养上清中的小鼠抗体结合，再加入HRP标记

的抗小鼠各类、亚类的抗体来分别反应，最后用™B底物系统显色并

用稀硫酸终止，再通过酶标仪检测吸光度来判断被测单克隆抗体的类

或亚类。本试剂盒具有极高的分辨率，是您鉴定小鼠单克隆抗体类、

亚类的可靠工具。

首先将试剂盒恢复室温（大约30分），然后用纯水把清洗液配

成工作浓度（一份浓缩清洗液加19份纯水）。

取出酶标板。每个标本需要6孔，阳性对照6孔。多余的用自封

袋保存，记得放入干燥剂。

将细胞培养上清（或特异亲和纯化的抗体）50ul加入酶标微孔

板，每个标本加6孔，阳性对照也是加6孔每孔50口1。然后每孔再

加入50H1标本稀释液。贴上封板膜37c温育30分钟。

弃去板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗

5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100ul,通用

阳性对照的6孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板

膜37℃温育30分钟。

吸弃板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗

5遍。每孔分别加入显色剂A和显色剂B各50口1,换一张新的封板

膜贴板避光37℃显色20分钟。

本试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果，看显色蓝的那个孔

所对应的前标二抗就知道此标本的1g类或亚类。更口J将反应终止液

（每孔50口1）终止反应后用酶标仪450nm测定波长，630nm参考波

长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的

Ig类或亚类。阳性对照0D小于5实验无效，需要重做。

2-8℃避光保存效期一年。不正确存放或过于频繁开启使用有可

能因此使效期缩短。

在检测腹水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议

您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况

下您可以选择的C030215抗体鉴定试剂。它会给您带来满意的结果。

手洗板子时一定要把孔加满，停留10秒然后弃尽，最后要拍干

净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出，要

吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。

单抗的特异性鉴定可以采用各种方法，如免疫荧光法、ELISA法、

间接血凝和免疫印迹技术等，同时还需做免疫阻断试验等。

单抗的效价测定可采用凝集反应、ELISA或放射免疫测定。不同

的测定方法效价不同。培养上清液的效价远不如腹水的效价。采用凝

集反应，腹水效价可达5X104。而采用ELISA检查，腹水效价可达0

X106o单抗的效价以培养上清和腹水的稀释度表示。

经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，以得到单个细胞的后代

分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各

种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体

的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性

状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时

期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞

丧失产生抗体的能力，所以需要再次或多次克隆化培养。克隆化次数

的多少由分泌能力强弱和抗原的免疫性强弱而决定。免疫性强的抗原

克隆次数可少一些，但至少要3〜5次克隆才能稳定。克隆化的方法

很多，包括有限稀释法、显微操作法、软琼脂平板法及荧光激活分离

法等。

（1）微量培养盘，盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞

（即饲养细胞）每孔2万〜4万。

（1）取出抗体阳性孔细胞，用HT培养液制成细胞悬液。并取样

进行台盼兰染色，计数。

⑵用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml

和的悬液。

（3）用吸管将细胞悬液分别种入微量培养盘，每孔05ml,细胞

含量分别为10个/孔、2个/孔、1个/孔和5个/孔。

（5）每天用倒置显微镜观察克隆生长情况，选择只有一个集落

生长的孔，弃掉两个以上和没有细胞生长的孔。

（6）克隆大量繁殖后，布满孔底的1/3〜1/2时，，测培养液抗体。

（7）抗体阳性孔细胞，移到有饲养层的组织培养瓶中，并传2〜

4代就可以脱离饲养细胞，建成克隆株。

（二）软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达

到克隆化，具体操作如下：

2.将117ml完全DMEM液和3mllO倍浓度的DMEM液混合，置45℃

水浴预热。

3.将琼脂糖与DMEM液混合,即为含5%琼脂糖的完全DMEM液,

并加75X108脾细胞。

5.DMEM中的细胞与DMEM一琼脂1:1混合,将细胞琼脂混合物

2ml铺于凝固的平板上，使其全部覆盖。

7.用PBS配制6%琼脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃,在保温情

况下取一试管，迅速加入1/25%羊红血球，2ml豚鼠补体，7nli6%琼

脂糖。

8.用3nli琼脂糖一羊红血球混合液覆盖克隆。于37CCO2箱孵

育lh〜2h。从克隆上部溶解羊红血球的溶血范围，可筛选抗羊红血球

Igo

在直径6cm培养皿中，加入lml0X108细胞悬液放置5%C02饱和

湿度，37U温箱中放置30nlin以上，倒置显微镜卜，寻找那些与周围

相距甚远的单个细胞，将毛细管口（一头有直角弯头毛细管，一头连

接一尺长乳胶管，用口控制液体进入）水平置放于液面上，直到看见

管口，吸入毛细管，将管中细胞移到预先加有0X104~0X104饲养细

胞96孔板内，即可获得单个细胞形成的克隆。(四)荧光激活分离

法

用一种荧光激活细胞分类器(FluoresceinActivafedCellSorter,

FACS)o其基本原理是：将细胞经荧光抗体染色后，经喷嘴形成单个

细胞的线形液滴，在莱塞光激发下，荧光素发射荧光，此信号由光电

倍增管接收，再结合细胞形态大小产生光散射信号，经电脑处理，产

生信号并与预定的信号对比，根据细胞荧光强度及细胞大小不同，将

细胞分成不同级别，在电场中发生偏离，而分别收集于不同容器中。

(2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌

条件下取脾。

(3)把脾放入5ml含有5%FCS的1640液中，冰浴下轻轻洗去脾上

的红血球°

(4)用镀子轻轻挤压脾，做成脾细胞悬液，用毛细管将悬液移入

小试管中。

(5)直立小试管3min,使大块的结缔组织下沉，把细胞悬液移入

离心管中。

(6)以5%FCS—1640充满离心管，并以400g离心7min〜lOmin(与

此同时应开始制备骨髓细胞)。

⑼计算细胞，以台盼兰染色用相差显微镜检查，活细胞数应高

于80%为合格。

骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白，这样的瘤细胞融合

后，可能影响或降低所分泌抗体的滴度，所以必须选育出非分泌免疫

球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。

①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系，以便两者

的组织相容性抗原一致；

③骨髓瘤细胞生长需要一个较高的细胞密度,最好106个细胞

/ml；

@F0以653最为常用，它是由矿物油4一甲基一15烷(Pristane,

降植烷)诱发出来的一种浆细胞瘤(MinerolOilplasmacytoma,MOPC)

并经过培育形成一一株8-氮鸟噂吟有抵抗力的亚系。骨髓瘤细胞一般

由有关单位直接引入，保存于-195。。液氮罐中，试验时复苏、增殖、

传代即可。由于骨髓瘤细胞是半贴壁状态，很容易脱落，因此不需要

胰酶处理。为了防止出现返祖现象，可将培养基内加入15ug/ml8一

氮鸟喋吟。取约IX107〜6X107对数生长期(即培养15h〜20h)的

骨髓瘤细胞，在室温离心(400g)lOmin,沉淀以5%FCS—1640液再

悬浮并计数。

在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖,

必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养细

胞(Feedercell)o在细胞融合和单克隆的选择过程中，就是在少量

的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体，因此在这一过程中必须

使用饲养细胞。许多种类的动物细胞都可以做饲养细胞，如正常的脾

细胞、胸腺细胞、腹腔渗出细胞等，常选用腹腔渗出细胞，其中主要

是巨噬细胞和淋巴细胞。

一方面做饲养细胞，另一方面巨噬细胞可以吞噬死亡的细胞和细

胞碎片，为融合细胞的生长造成良好的环境。腹腔细胞的来源可以是

与骨髓瘤细胞同系鼠。也可以是其他种类的小鼠，如C57鼠，昆明小

白鼠等。

(4)用注射器将4nli6%蔗糖溶液注入腹腔，用手指轻揉Imin仍

用该注射器回抽腹腔液体，加入离心管。

(6)弃上清，以HT培养液将细胞制成悬液。台吩蓝染色计数活

细胞，使每毫升含40万个活细胞。

(7)以1ml吸管将细胞种入微量培养皿，每孔05ml,含2万个

细胞，放入C02培养箱培养，即可供细胞融合和克隆化之用.

单克隆抗体问世以来，由于其独有的特征已迅速应用于医学很多

领域。主要表现在以下儿个方面。

作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯

度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分

析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用，很大程

度上促进了商品化试剂盒的发展。

单克隆抗体对抗原的识别，与多克隆抗体有很大的不同。不同试

剂盒因使用的单克隆抗体不同，识别抗原的位点不同，导致检测结果

有一定差异。标准化问题还需要进一步研究。

单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个

惰性的固相基质(如Speharose2B^4B、6B等)上,并制备成层析

柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生

特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗

脱液的离子强度或pH,欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可

得到欲纯化的抗原。

将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，

利用单克隆抗体的导向作用，将药物或放疗物质携带至靶器官，直接

杀伤靶细胞，称为肿瘤导向治疗。将放射性标记物与单克隆抗体连接,

注入患者体内可进行放射免疫显像，协助肿瘤的诊断。单克隆抗体主

要为鼠源性抗体，异种动物血清可引起人体过敏反应。制备人-人单

克隆抗体或人源化抗体更为重要，但此方面仍未取得明显进展。

(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞

株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。

(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记

抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。

(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内

的放射免疫显像和免疫导向治疗。

(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用

范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法

不能用单克隆抗体完成。

(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较

局O

单克隆抗体药物的发展起源于1975年，杂交瘤技术的问世使大

量制备均一的鼠源单克隆抗体成为可能。1986年第一个抗移植后免

疫排斥反应的鼠源单克隆抗体muromonab-CD3(0KT3),经美国食品药

品监督管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)批准上市,

但是来源于鼠源淋巴细胞杂交瘤的抗体被人的免疫系统识别，会引起

严重的人抗鼠抗体反应(humananti-mouseantibody,HAMA),不仅

使治疗性单抗半衰期变短，有时还会引起严重的不良反应。

单克隆抗体药物的发展在1988年到1993年间陷入低谷。随着重

组DNA技术的发展，各种抗体人缘化技术迅速发展，单克隆抗体药物

经历了人鼠嵌合单抗、人源化单抗阶段。随后出现的噬菌体展示文库

技术和转基因小鼠技术，使全人源单抗的产生成为可能，2002年第

一个全人源抗体阿达木单抗上市。

单克隆抗体在医药治疗上有广泛的前景，被用于治疗肿瘤、自身

免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病。阿达木用于缓

解抗风湿性药物(DMARD)治疗无效的结构性损伤的中至重度类风湿关

节炎(RA)。

鼠源性单克隆抗体、嵌合性单克隆抗体、人源化单克隆抗体和全

人源单克隆抗体。

全人源单克隆抗体：其抗体的可变区和恒定区都是人源的，去除

免疫原性和毒副作用。

人杂交瘤技术、EBV转化B淋巴细胞技术、噬菌体显示技术

(phagedisplay)、转基因小鼠抗体制备技术(transgenicmouse)

和单个B细胞抗体制备技术等。

由人源化和全人源抗体制备的人源化和全人源抗体药物因其具

有高亲和力、高特异性、毒副作用小的特点，克服了动物源抗体及嵌

合抗体的各种缺点，已经成为了治疗性抗体药物发展的必然趋势。

阿达木单抗作为生物单抗药物，在疗效和技术门槛方面难以挑战;

越来越多的医生在治疗类风湿时首选皮下注射给药的剂型，不需要注

射过程和费用，虽然与依那西普的对比临床试验还未出来，但是人们

普遍认为阿达木单抗的疗效更好。

2010年全球治疗用单抗药物的销售总额达到440亿美元，如果

加上100亿美元的单抗诊断和研究试剂，羊抗药物的市场总量达到

550亿美元。2011年单抗药物的市场总量已经达到628亿美元。全球

单克隆抗体药依旧会保持较高的增长率。到