2026届新高考生物冲刺复习微生物的培养技术及应用

12026届新高考生物冲刺复习微生物的培养技术及应用温故知新无细胞结构原核细胞真核细胞微生物类群病毒：新冠病毒等RNA病毒；

噬菌体等DNA病毒细菌：蓝细菌、大肠杆菌等；放线菌：链霉菌等单细胞真菌：酵母菌、霉菌等；原生生物：草履虫、衣藻等温故知新3培养基的配置无菌技术微生物的基本培养技术为需要的微生物提供合适的营养和环境条件确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来自然界实验室1培养基的配制(1)概念:(2)作用:(3)类型:人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。①

按物理性质：②

按化学组成：③

按目的用途：(4)成分:液体培养基、固体培养基天然培养基、合成培养基选择培养基、鉴别培养基1培养基的配制固体培养基液体培养基加入凝固剂（如琼脂）分离、鉴定、计数和菌种保存等扩大培养，工业生产固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。菌落一般单个微生物在培养基表面或内部形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。①

按物理性质：液体培养基、固体培养基。琼脂是从红藻中提取的多糖。琼脂是一种脂质。❌1培养基的配制菌落是鉴定菌种的重要依据。细菌放线菌霉菌酵母菌1培养基的配制蔗糖（C12H22O11）10g硝酸钠（NaNO3）3g磷酸氢二钾（K2HPO4）1g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5g氯化钾（KCl）0.5g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）0.01g琼脂15～20g蒸馏水定容至1000mL查氏培养基（培养霉菌）牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至1000mL哪一种培养基的成分明确？②

按化学组成：合成培养基、天然培养基。1培养基的配制牛肉膏蛋白胨牛肉膏是采用新鲜牛肉经过消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。蛋白胨是一种外观呈淡黄色的粉剂。一般用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（肉类）和植物蛋白（豆类）等两种。1培养基的配制选择培养基鉴别培养基③

按目的用途：选择培养基、鉴别培养基1培养基的配制+氨苄青霉素选择培养基培养基+氨苄青霉素培养基没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?1培养基的配制+氨苄青霉素具有抗氨苄青霉素能力的菌落没有氨苄青霉素抗性的细菌选择培养基培养基+氨苄青霉素培养基没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?1培养基的配制划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分目的用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基天然培养基合成培养基鉴别培养基培养基的类型及用途1培养基的配制(1)概念:(2)作用:(3)类型:人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。①

按物理性质：②

按化学组成：③

按目的用途：(4)成分:主要营养物质：碳源、氮源、水、无机盐等液体培养基、固体培养基天然培养基、合成培养基选择培养基、鉴别培养基1培养基的配制(4)培养基的营养成分:①基本成分：碳源、氮源、无机盐、水碳源无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等自养微生物异养微生物功能：①构成细胞物质和一些代谢产物②有机碳既是碳源又是能源。氮源无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等功能：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等。含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源。无机盐功能：提供无机营养

调剂PH

维持渗透压水功能：良好的溶剂

维持生物大分子结构的稳定1培养基的配制②

特殊条件：pH、O2和特殊营养物质培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加

；培养霉菌时，需要将培养基调制

；培养细菌时，需要将培养基调制

；培养厌氧微生物时，需要提供

条件生长因子、氨基酸、维生素、碱基等“个性定制”(4)培养基的营养成分:维生素酸性中性或弱碱性无氧1培养基的配制培养基成分提供的主要营养牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨10g碳源、氮源和维生素NaCl

5g无机盐H2O定容至1000mL氢元素、氧元素牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌）牛肉膏蛋白胨牛肉膏是采用新鲜牛肉经过消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。蛋白胨是一种外观呈淡黄色的粉剂。一般用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（肉类）和植物蛋白（豆类）等两种。(4)培养基的营养成分:1培养基的配制目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配置量；营养要协调：培养基中各营养物质的浓度和比例要适宜；pH要适宜：细菌培养基呈中性或微碱性；霉菌培养基呈酸性。(5)培养基的配制原则:练习(2021山东)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色,乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是(

)A.甲菌属于解脂菌B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力B练习(2021山东)含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭，硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等,下列说法错误的是(

)A.乙菌的运动能力比甲菌强B.为不影响菌的运动需选用液体培养基C.该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D.穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染B练习操作步骤:①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养,得到A、B菌液;②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂,分别制成平板Ⅰ、Ⅱ,并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。回答下列问题。(1)实验所用培养基中作为碳源的成分是______。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源,氮源在菌体内可以参与合成_______________(答出2种即可)等生物大分子。

(2)步骤①中,在资源和空间不受限制的阶段,若最初接种N0个A细菌,繁殖n代后细菌的数量是___________。

(2022全国甲)某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌,在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力,并分析两个菌株的其他生理功能。实验所用的培养基成分如下。培养基Ⅰ:K2HPO4,MgSO4,NH4NO3,石油。培养基Ⅱ:K2HPO4,MgSO4,石油。石油蛋白质、核酸N02n练习(3)为了比较A、B降解石油的能力,某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验,结果如表所示(“+”表示有透明圈,“+”越多表示透明圈越大,“-”表示无透明圈),推测该同学的实验思路是

____________________________

_____________________________________。

菌株透明圈大小平板Ⅰ平板ⅡA+++++B++-(4)现有一贫氮且被石油污染的土壤,根据上表所示实验结果,治理石油污染应选用的菌株是_______,理由是_______________________

_____________________________________。

取浓度、体积相同的A、B两种菌液,将A菌液分别接种到平板Ⅰ、Ⅱ的甲孔内,将B菌液分别接种到平板Ⅰ、Ⅱ的乙孔内,置于适宜温度下培养一段时间后观察透明圈大小A

平板Ⅱ是一个缺氮但含有

石油的环境,只有A菌株能在平板Ⅱ上生长2无菌技术

获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染！2无菌技术是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。操作的空间、操作者的衣着和手用于培养微生物的器皿、接种用具和培养基-----与消毒最本质区别消毒无菌技术灭菌是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。注意：避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触为了避免周围环境微生物污染，操作应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中部分微生物的方法。(1)概念应用场景：概念：应用场景：概念：2无菌技术(2)常用的消毒和灭菌方法a.煮沸消毒法：b.巴氏消毒法：c.化学药剂消毒法：d.紫外线消毒法：①

消毒方法：100℃煮沸5～6min，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。62～65℃下消毒30min或80～90℃处理30s～1min，适合一些不耐高温的液体，如牛奶。可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且不破坏牛奶的营养成分。用70%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射30min。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。2无菌技术原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性。优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。对象：培养基等注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。a.湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅(2)常用的消毒和灭菌方法②

灭菌方法：高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121℃下维持15～30min。2无菌技术原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等。对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于

玻璃器皿(如试管、培养皿、吸管、注射器)

金属器具(如针头、镊子、剪刀等)的灭菌。干热灭菌箱内160～170℃下加热2～3h。干热灭菌箱b.干热灭菌：(2)常用的消毒和灭菌方法②

灭菌方法：2无菌技术酒精灯火焰灼烧原理：使微生物燃烧对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位。c.灼烧灭菌：(2)常用的消毒和灭菌方法②

灭菌方法：2无菌技术类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物。强烈的理化方法，杀死所有微生物。煮沸消毒家庭餐具等生活用品100℃煮沸5～6min巴氏消毒牛奶等不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体（皮肤、伤口）、水源等擦拭等,如用70%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基及多种器材和物品高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121℃,15～30min接种室、接种箱，超净工作台（迅速彻底）常用的消毒、灭菌方法2无菌技术项目消毒灭菌作用强度较为____

的物理、化学因素消灭微生物的数量物体表面或内部

微生物物体内外的

微生物能否消灭芽孢、孢子消灭

芽孢能消灭

芽孢和孢子适用对象操作空间、操作者的衣着和手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等常用方法温和强烈一部分所有比较：消毒与灭菌部分全部煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法湿热灭菌、干热灭菌灼烧灭菌2无菌技术无菌技术适用对象常用方法消毒日常用品煮沸消毒牛奶等不耐高温的液体巴氏消毒酒精擦拭双手氯气消毒水源化学药物消毒超净工作台接种室，接种箱紫外线消毒灭菌培养基湿热灭菌玻璃器皿（培养皿等）干热灭菌接种工具（涂布器接种环接种针等）灼烧灭菌2无菌技术(2022湖北)灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是(

)A.动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行B.微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染C.为防止蛋白质变性,不能用高压蒸汽灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌D.可用高压蒸汽灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌D3微生物的纯培养在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。(1)相关概念培养物：纯培养物：纯培养：获得纯培养物的过程就是纯培养。(2)纯培养步骤配制培养基灭菌接种分离培养等纯培养物都是菌落。❌液体培养基也可用于纯培养3微生物的纯培养配置培养基：称取去皮马铃薯200

g切块，加水1000mL，煮烂，用纱布讨滤，加20g________，15~20g_______用蒸馏水定容至1000mL。①制备培养基葡萄糖琼脂(2)方法步骤：【探究·实践】酵母菌的纯培养3微生物的纯培养配置培养基：称取去皮马铃薯200

g切块，加水1000mL，煮烂，用纱布讨滤，加20g________，15~20g_______用蒸馏水定容至1000mL。①制备培养基葡萄糖琼脂(2)方法步骤：【探究·实践】酵母菌的纯培养灭菌：配制好的培养基转移到锥形瓶中进行___________灭菌；培养皿进行灭菌。高压蒸汽3微生物的纯培养配置培养基：称取去皮马铃薯200

g切块，加水1000mL，煮烂，用纱布讨滤，加20g________，15~20g_______用蒸馏水定容至1000mL。①制备培养基葡萄糖琼脂(2)方法步骤：【探究·实践】酵母菌的纯培养灭菌：配制好的培养基转移到锥形瓶中进行___________灭菌；培养皿进行灭菌。高压蒸汽倒平板：待培养基冷却至____0C，在____________附近倒平板50酒精灯火焰3微生物的纯培养待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰旁附近倒平板。倒平板的具体操作步骤如下。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。不要完全打开，且在酒精灯旁边操作，以免杂菌污染培养基既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；又可以避免培养基中的水分较快地蒸发。琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时高于50℃会烫手，低于50℃时，若不及时操作，琼脂会凝固。倒平板注意事项：【探究·实践】酵母菌的纯培养3微生物的纯培养问题思考与分析：问1.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？空白对照；将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。【探究·实践】酵母菌的纯培养3微生物的纯培养②

接种和分离单个细胞微生物群单个菌落连续划线稀释分散生长繁殖(2)方法步骤：【探究·实践】酵母菌的纯培养3微生物的纯培养②

接种和分离平板划线法①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞

②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞③试管口通过火焰④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。(2)方法步骤：【探究·实践】酵母菌的纯培养3微生物的纯培养12345【平板划线法注意事项】1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次；2.划线首尾不能相接；3.每次划线前灼烧接种环进行灭菌；4.划线操作结束后，仍需灼烧接种环。连续划线法分区划线法3微生物的纯培养

为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？

在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？杀死接种环上原有微生物取菌种前灼烧：每次划线前灼烧：杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞接种结束后灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者问问题思考与分析：3微生物的纯培养完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-48h。划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）作对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染.用记号笔标记培养皿中菌落皿底上平板划线法可以对菌种进行分离，不能对培养液中菌种进行计数③

酵母菌培养(2)方法步骤：练习(2023浙江1月)某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌,进行了如下实验:取泡菜汁样品,划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基,经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是(

)A.培养基pH需偏碱性B.泡菜汁需多次稀释后才能划线接种C.需在无氧条件下培养D.分离得到的微生物均为乳酸菌C平板划线法本身有逐步稀释分散的效果。(3)纯化菌株时,通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_________________________________________

_