2025年临床基因扩增试题及答案

2025年临床基因扩增试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30题，计60分）1.关于聚合酶链式反应（PCR）的基本步骤，正确的顺序是：A.退火→变性→延伸B.变性→延伸→退火C.变性→退火→延伸D.延伸→变性→退火2.设计PCR引物时，以下哪项不符合原则？A.引物长度18-25bpB.引物GC含量40%-60%C.3’端避免连续3个G/CD.引物间互补序列超过5bp3.实时荧光定量PCR中，SYBRGreenI染料的作用是：A.特异性结合双链DNAB.标记探针5’端荧光基团C.淬灭荧光信号D.识别靶序列单链区域4.临床基因扩增实验室设置内标的主要目的是：A.监测扩增效率B.排除假阳性C.校准仪器误差D.验证试剂有效性5.实时荧光定量PCR中，“平台期”出现的主要原因是：A.引物耗尽B.模板浓度过高C.Mg²⁺浓度不足D.热启动酶未激活6.以下哪种污染是临床基因扩增实验室最常见的交叉污染来源？A.样本间核酸污染B.环境中气溶胶污染C.试剂本身携带的污染D.仪器内部残留污染7.采用绝对定量法检测HBVDNA时，标准品的制备要求不包括：A.与靶序列同源性≥95%B.浓度需经国际标准品溯源C.需包含内源性参照基因D.稳定性需经长期验证8.逆转录PCR（RT-PCR）中，若选择Oligo(dT)引物进行逆转录，最适用于：A.环状RNAB.总mRNAC.长链非编码RNAD.病毒单链RNA9.熔解曲线分析中，出现双峰的可能原因是：A.引物二聚体形成B.模板浓度过低C.退火温度过高D.Taq酶活性异常10.临床基因扩增实验室分区中，“扩增产物分析区”与“试剂准备区”之间的压差应满足：A.正压≥5PaB.负压≥5PaC.正压≥10PaD.负压≥10Pa11.检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）时，选择ORF1ab和N基因双靶标设计的主要目的是：A.提高检测灵敏度B.降低引物二聚体风险C.避免病毒变异导致的漏检D.缩短扩增时间12.以下哪种情况会导致荧光定量PCR结果Ct值偏大？A.模板中存在PCR抑制物B.引物浓度过高C.退火温度过低D.扩增循环数增加13.实验室使用全自动核酸提取仪时，若同一批次样本中阴性对照出现阳性结果，首先应排查：A.提取仪加样针污染B.试剂配置错误C.样本采集不规范D.扩增仪温度偏差14.人乳头瘤病毒（HPV）分型检测中，采用多重PCR技术的关键是：A.优化引物浓度比例B.增加扩增循环数C.提高变性温度D.使用热启动酶15.结核分枝杆菌（MTB）核酸检测中，若样本为痰液，预处理时需加入NaOH的主要作用是：A.灭活病毒B.消化黏液成分C.裂解结核杆菌细胞壁D.中和酸性环境16.以下关于基因扩增实验室质量控制的描述，错误的是：A.每批次检测需包含阴性质控、阳性质控B.阳性质控浓度应接近检测下限C.室内质控数据需保存至少2年D.仪器校准应使用计量认证的标准物质17.数字PCR（dPCR）与实时荧光定量PCR的主要区别是：A.无需标准曲线B.依赖Ct值计算C.可检测低丰度突变D.对抑制物更敏感18.检测血浆游离DNA（cfDNA）时，若样本溶血，可能导致：A.cfDNA浓度假性升高B.扩增效率提高C.熔解曲线峰型变窄D.内标Ct值偏小19.基因扩增实验室操作中，以下哪项符合生物安全要求？A.在扩增产物分析区进行样本处理B.戴手套接触公共物品后无需更换C.使用后枪头直接丢弃于普通垃圾桶D.实验结束后用10%次氯酸钠擦拭台面20.多重荧光PCR中，选择不同荧光通道的原则是：A.荧光基团发射光谱无重叠B.荧光强度一致C.淬灭基团类型相同D.探针长度一致21.以下哪种物质可有效去除实验室环境中的DNA污染？A.75%乙醇B.紫外线（254nm）照射C.去离子水D.生理盐水22.检测BRCA1基因突变时，若采用ARMS-PCR技术，其核心设计是：A.引物3’端与突变位点匹配B.探针标记不同荧光基团C.增加Mg²⁺浓度D.缩短退火时间23.实时荧光定量PCR结果判读中，“灰区”样本的处理原则是：A.直接判定为阳性B.重复检测并结合临床C.判定为阴性D.更换检测平台重新检测24.实验室使用的定量PCR仪，温度均匀性的校准应至少：A.每月1次B.每季度1次C.每半年1次D.每年1次25.以下关于逆转录过程的描述，正确的是：A.逆转录酶具有5’→3’外切酶活性B.dNTP浓度过高会抑制逆转录C.RNA模板需经95℃变性5分钟D.Oligo(dT)引物适用于所有RNA模板26.检测微小残留病灶（MRD）时，基因扩增方法的关键要求是：A.高灵敏度B.高特异性C.快速检测D.低成本27.基因扩增实验室中，“一次污染”指的是：A.扩增产物对环境的污染B.样本间交叉污染C.试剂本身携带的污染D.仪器残留污染28.以下哪种情况会导致扩增曲线呈“平台期不明显”？A.模板浓度过高B.引物浓度过低C.扩增循环数不足D.荧光染料过量29.人源内参基因（如β-actin）在临床检测中的作用是：A.验证样本核酸提取效率B.提高检测灵敏度C.区分感染类型D.缩短检测时间30.基因扩增实验室的“三不原则”不包括：A.不同区域物品不混用B.扩增后产物不返回前区C.未经验证的试剂不使用D.非实验人员不进入二、多项选择题（每题3分，共10题，计30分。每题至少2个正确选项，多选、少选、错选均不得分）1.影响PCR特异性的因素包括：A.引物设计B.退火温度C.dNTP浓度D.Taq酶浓度2.实时荧光定量PCR的应用场景包括：A.病原体载量监测B.基因表达量分析C.单核苷酸多态性（SNP）分型D.大片段基因缺失检测3.临床基因扩增实验室质量控制措施包括：A.定期校准仪器B.使用批次间质控品C.记录温湿度数据D.人员培训与考核4.核酸提取过程中导致产率降低的可能原因有：A.样本保存时间过长B.裂解液体积不足C.离心转速不够D.洗脱缓冲液pH不适5.荧光定量PCR结果假阳性的可能原因是：A.扩增产物污染B.引物二聚体形成C.样本中存在同源序列D.内标Ct值异常6.实验室处理污染事件的步骤包括：A.立即停止实验B.标记污染区域C.使用DNA酶清除污染D.验证清除效果7.多重PCR设计时需注意：A.引物间避免互补B.各靶标扩增效率一致C.荧光通道无重叠D.增加dNTP浓度8.以下关于内标的描述，正确的是：A.内标需与靶基因同时扩增B.内标可监测抑制物存在C.内标浓度需高于靶基因D.内标序列应与靶基因无同源性9.检测RNA病毒时，逆转录失败的可能原因有：A.RNA模板降解B.逆转录酶失活C.引物与模板不匹配D.dNTP浓度过低10.基因扩增实验室生物安全防护要求包括：A.穿实验服、戴手套B.样本处理在生物安全柜中进行C.废弃标本高压灭菌后处理D.实验人员定期健康监测三、案例分析题（共1题，计10分）某实验室使用实时荧光定量PCR检测HPV16型，同一批次检测中出现以下情况：-阳性对照（已知HPV16阳性）Ct值为28（正常范围25-30），熔解曲线单峰；-阴性对照（无核酸水）Ct值为38（仪器判读阈值为40），熔解曲线无峰；-样本A：Ct值为32，熔解曲线单峰；-样本B：Ct值为35，熔解曲线出现双峰（主峰82℃，次峰75℃）；-样本C：无Ct值，熔解曲线无峰。问题：1.该批次检测的内外部质量控制是否符合要求？说明理由。（3分）2.样本A、B、C的结果应如何判读？分析可能原因。（5分）3.针对样本B的情况，实验室应采取哪些验证措施？（2分）答案及解析一、单项选择题1.C（PCR基本步骤为变性（95℃解链）→退火（引物结合）→延伸（Taq酶合成DNA））2.D（引物间互补序列超过5bp易形成引物二聚体，需避免）3.A（SYBRGreenI特异性嵌入双链DNA，发射荧光）4.A（内标用于监测扩增过程中的抑制或效率问题）5.A（平台期因引物、dNTP等消耗，扩增速率下降）6.B（气溶胶污染是最常见的交叉污染来源）7.C（绝对定量标准品需溯源，但无需内源性参照）8.B（Oligo(dT)结合mRNA的polyA尾，适用于总mRNA逆转录）9.A（引物二聚体熔解温度较低，与靶序列峰形成双峰）10.B（扩增产物分析区为污染区，需保持负压防止污染扩散）11.C（双靶标设计可降低病毒变异导致的漏检风险）12.A（抑制物会延缓扩增，导致Ct值偏大）13.A（全自动提取仪加样针污染易导致阴性对照阳性）14.A（多重PCR需优化引物浓度比例以平衡扩增效率）15.B（NaOH用于消化痰液中的黏液，提高核酸提取效率）16.B（阳性质控浓度应覆盖检测范围，而非仅接近下限）17.A（dPCR通过计数微滴实现绝对定量，无需标准曲线）18.A（溶血释放的基因组DNA会导致cfDNA浓度假性升高）19.D（10%次氯酸钠可有效灭活核酸，符合生物安全要求）20.A（荧光通道选择需避免发射光谱重叠，防止信号干扰）21.B（254nm紫外线可破坏DNA结构，去除污染）22.A（ARMS-PCR通过引物3’端与突变位点匹配实现特异性扩增）23.B（灰区样本需重复检测并结合临床综合判断）24.C（定量PCR仪温度均匀性校准每半年至少1次）25.B（dNTP浓度过高会抑制逆转录酶活性）26.A（MRD检测需高灵敏度以识别低丰度肿瘤细胞）27.C（“一次污染”指试剂或样本本身携带的污染）28.B（引物浓度过低会导致扩增效率下降，平台期不明显）29.A（人源内参用于验证样本核酸提取是否成功）30.C（“三不原则”指区域物品不混用、产物不返回前区、非人员不进入）二、多项选择题1.ABCD（引物设计、退火温度、dNTP和Taq酶浓度均影响特异性）2.ABC（大片段缺失需其他方法如PCR-凝胶电泳检测）3.ABCD（仪器校准、质控品使用、环境记录、人员培训均为质控措施）4.ABCD（样本保存、裂解液、离心条件、洗脱液pH均影响提取产率）5.ABC（污染、引物二聚体、同源序列均可能导致假阳性）6.ABD（DNA酶无法清除环境中的DNA污染，需用紫外线或次氯酸钠）7.ABC（多重PCR需避免引物互补、平衡效率、避免荧光重叠）8.ABD（内标浓度应与靶基因相当，过高会竞争扩增）9.ABCD（RNA降解、酶失活、引物不匹配、dNTP不足均导致逆转录失败）10.ABCD（实验服、生物安全柜、高压灭菌、健康监测均为生物安全要求）三、案例分析题1.质量控制符合要求。阳性对照Ct值在正常范围且熔解曲线单峰，说明试剂和扩增体系有效；阴性对照Ct值＞40且无熔解峰，说明无扩增污染。2.样本A：Ct值32＜40且熔解曲线单峰，判为