AMLZ对SD大鼠30天尾静脉注射给药毒性研究

AMLZ对SD大鼠30天尾静脉注射给药毒性研究AMLZ对SD大鼠30天尾静脉注射给药毒性研究[摘要]目的：从非临床安全性评价的角度出发，探究生物制品类抗急性淋巴细胞白血病药AMLZ对SD大鼠的毒性。方法：将200只SD大鼠按体重、性别随机均衡分成溶媒对照组、AMLZ低、中、高剂量组4组，每组50只，雌雄各半。每周进行一次鼠尾静脉注射AMLZ，持续28天后，处死120只动物，进行解剖检查。结果：AMLZ低剂量组与溶媒对照组相比，其雌性血液中RBC、HGB、HCT、中性粒细胞四个指标偏高，其均有明显的统计学差异（P＜0.05）；AMLZ中剂量组与溶媒对照组相比，其雄性及雌性血液中RBC、HGB、HCT三个指标偏高，雌性血液中中性粒细胞指标偏高、淋巴细胞偏低，其均有明显的统计学差异（P＜0.05）；AMLZ高剂量组与溶媒对照组相比，其雄性及雌性血液中RBC、HGB、HCT三个指标偏高，雌性血液中中性粒细胞指标偏高、淋巴细胞偏低，其均有明显的统计学差异（P＜0.05）。其他指标均无明显统计学差异（P＞0.05）。结论：实验数据表明，AMLZ对SD试验大鼠的血液系统中RBC、HGB、HCT、中性粒细胞、淋巴细胞有小幅度的影响，生物制品类抗急性淋巴细胞白血病药AMLZ对SD大鼠未产生血液系统毒理学意义的影响，表明AMLZ较常规化疗药、生物制品类药有一定的优势，具有良好的开发前景。【关键词】安全性评价；生物制品；急性淋巴细胞白血病；SD大鼠StudyontoxicityofAMLZtoSDratsafter30daysoftailintravenousinjection[abstract]objective:Fromtheperspectiveofnon-clinicalsafetyevaluation,toexplorethetoxicityofAMLZ,abiologicalanti-acutelymphoblasticleukemiadrug,onSDrats.Methods:200SDratswererandomlydividedintosolventcontrolgroup,AMLZlowdosegroup,AMLZmediumdosegroupandAMLZhighdosegroupaccordingtobodyweightandgender.Eachgroupof50,maleandfemalehalf.ThetailintravenousinjectionofAMLZwasperformedonceaweekfor28days,andallanimalswerekilledforanatomicalexamination.Results:Comparedwiththesolventcontrolgroup,thefourindexesofRBC,HGB,HCTandneutrophilinthebloodoftheAMLZlowdosegroupwerehigherthanthoseinthesolventcontrolgroup,andthereweresignificantstatisticaldifferences(P<0.05).Comparedwiththesolventcontrolgroup,thethreeindexesofRBC,HGBandHCTinthebloodoftheAMLZmediumdosegroupwerehigherthanthatofthesolventcontrolgroup,whiletheneutrophilindexandlymphocytewerehigherinthebloodoftheAMLZmediumdosegroupandlowerinthebloodoftheAMLZmediumdosegroup,respectively.Comparedwiththesolventcontrolgroup,thebloodRBC,HGBandHCTindexesintheAMLZhigh-dosegroupwerehigherthantheRBC,HGBandHCTindexesinthemaleandfemaleblood,andtheneutrophilindexesandlymphocytesinthefemalebloodwerehigherthanthoseinthemaleandfemaleblood,withstatisticallysignificantdifferences(P<0.05).Therewasnosignificantdifferenceinotherindicators(P>0.05).Conclusion:ExperimentaldatashowthatAMLZontheSDexperimentalratsbloodsystemofRBC,HGB,HCT,neutrophilsandlymphocyteswithsmallamplitude,theinfluenceofthebiologicalproductsofacutelymphoblasticleukemiadrugsAMLZonSDratsbloodsystemstoxicologysignificanceinfluence,suggestsAMLZthanconventionaleffectivedrugs,biologicalproductshavecertainadvantages,hasgooddevelopmentprospects.[keywords]safetyevaluation;Biologicalproducts;Acutelymphoblasticleukemia;SDrats目录11769_WPSOffice_Level1引言 112672_WPSOffice_Level11抗肿瘤药物研究进展 218599_WPSOffice_Level11.1抗肿瘤药物分类 217084_WPSOffice_Level11.2免疫疗法的分类 211154_WPSOffice_Level11.3急性淋巴细胞白血病 31.4主要血液学指标的意义 327334_WPSOffice_Level11.5采血因素对血液指标检测结果准确性的影响 4819_WPSOffice_Level12材料与方法 511838_WPSOffice_Level12.1材料 511486_WPSOffice_Level12.2方法 623464_WPSOffice_Level13实验结果 94473_WPSOffice_Level13.1AMLZ长期给药对试验SD大鼠临床观察以及摄食量的影响 98935_WPSOffice_Level13.2AMLZ长期给药对试验SD大鼠体重的影响 1010666_WPSOffice_Level13.3AMLZ对试验SD大鼠血液系统的血液学指标的影响 1110541_WPSOffice_Level13.4AMLZ对试验SD大鼠凝血相关指标的影响 1324692_WPSOffice_Level14分析与讨论 141438_WPSOffice_Level14.1AMLZ鼠尾静脉给药对白细胞及其相关指标的影响 1412243_WPSOffice_Level14.2AMLZ鼠尾静脉给药对红细胞及其相关指标的影响 1513321_WPSOffice_Level14.3AMLZ鼠尾静脉给药对凝血相关指标的影响 1728435_WPSOffice_Level14.4展望与不足 1713919_WPSOffice_Level1结论 18参考文献 1918675_WPSOffice_Level1致谢 21引言恶性肿瘤是以细胞异常增殖和转移为特点的疾病，是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病[1]。癌细胞通过无限制、无止境地增生，从而大量消耗患者体内的营养物质。2018年国家癌症中心提出：因恶性肿瘤引起的死亡率居所有疾病死亡率的第二。据报道,我国各地区白血病的发病率在各类肿瘤中占第六位[2]，急性淋巴细胞白血病（ALL）属于白血病的一个常见类型。ALL是最常见于儿童的恶性肿瘤之一，约占儿童白血病的80％，占成人白血病20％[3]，也可在其他年龄段发病，其发病高峰年龄为2～10岁、15～24岁、以及80岁以上。其发病机制至今尚不完全清楚，可能与病毒感染、基因突变、化学因素、放射因素以及其他血液系统疾病有关。ALL最常见的治疗包括化疗、造血干细胞移植、免疫治疗以及分子靶向治疗等[4]。目前ALL的治疗仍以多药联合的化疗方案为主要手段，但无法避免其引起的不良反应以及细胞耐药的问题[5]。其以血液系统毒性最为常见，其中骨髓抑制及并发感染对患者的生活质量及治疗效果影响最大，其主要表现为白细胞、嗜中性粒细胞、红细胞和血小板的减少，严重者会因此并发感染、出血与贫血等不良反应[6]。目前治疗白血病最有效的方法是造血干细胞移植，但仍难以解决移植所引起的并发症和疾病复发这一难题。靶向治疗只针对特定的基因型产生作用，其免疫治疗在治疗白血病中有着良好的应用前景[7]。2014年7月诺华与宾夕法尼亚大学合作开发的治疗ALL的CAR-T药物-CTL019获得美国FDA的认可，被授予“突破性疗法认定”并引起了全球的关注，免疫治疗开始在白血病治疗这一领域崭露头角，有望成为治疗白血病的新模式[8]。单个或多个血液系统指标的变化有着其可参考的生理意义，通过这些指标的变化可初步推断某一类药物对身体各方面的影响。受试物AMLZ为生物制品类抗急性淋巴细胞白血病药，本研究主要以非临床安全性评价的角度出发，探究AMLZ对大鼠毒性反应的特点和规律。确定安全剂量范围，为临床安全用药提供提供依据。1抗肿瘤药物研究进展抗肿瘤药物分类表1抗肿瘤药物分类抗代谢类药物破坏DNA结构和功能的药干扰蛋白质合成的药物烷化剂抗肿瘤抗生素抑制DNA合成以干扰核酸代谢，如氨甲喋呤（MTX）、巯嘌呤（6-MP）、氟尿嘧啶(5-FU)等。但此类药物容易引起的ADR包括血小板和白细胞的减少、肝功能损害等[9]。通过烷化作用，交叉联结肿瘤细胞DNA，破坏其结构与功能[10]，如烷化剂、铂类等。但此类药物容易引起血小板和白细胞的减少与神经毒性等的不良反应阻滞了它的发展。干扰肿瘤细胞DNA、RNA与蛋白质的合成，导致细胞变异死亡[11]。如抗肿瘤抗生素（阿霉素、柔红霉素等）、拓扑异构酶抑制剂等，但可能会引起心脏毒性及骨髓抑制。通过干扰氨基酸的提供、rRNA功能、纺锤丝的形成，抑制了蛋白质的合成，导致细胞死亡[12]。如L-门冬酰胺酶（ASP）、三尖杉酯碱（HRT）、长春花碱类、紫杉醇类等。1.2免疫疗法的分类表2免疫疗法的分类非特异性免疫刺激免疫检点单克隆抗体过继细胞回输单克隆抗体肿瘤免疫通过刺激T细胞或抗原呈递细胞从而加强抗原呈递过程，并抑制Treg，增强T细胞活性[13]。因治疗范围小、周期过长、ADR等导致该法不被广泛应用。随着人们对抗原呈递过程研究的深入以及了解，其成为二十世纪末治疗癌症的新型方案[14]。从肿瘤中分离出淋巴细胞，体外培养成具高效杀瘤作用的免疫细胞，再输送回体内[15]，又叫肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法。通过抗体依赖细胞毒作用及补体固定作用使细胞溶解[16],增加巨噬细胞的吞噬活性，清除淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病的白血病干细胞，并未发现贫血以及肝肾毒性[17]。在树突状细胞存在下，肿瘤疫苗通过肿瘤抗原刺激体内T细胞进而破坏肿瘤细胞的结构[18]，达到免疫杀伤的作用。1.3急性淋巴细胞白血病1.3.1急性淋巴细胞白血病近10年的变化趋势与情况分析ALL呈全国散发趋势，但从数据看来，油田和污染区域发病率略高。美国国立环境卫生与健康科学研究所对不同职业与急性淋巴细胞白血病的研究，发现从事汽车产业、美容业、染料生产业等人员发生白血病的发生率较高。ALL在儿童期（O～9岁）为发病高峰期，在30岁前发病率随着年龄的增长呈下降趋势，青少年时期（10～29岁）男性发病率显著高于女性，而农村较城市相比，城市大发病率显著高于农村。造成性别差异的原因，考虑为男性相对于女性较爱吸烟喝酒、男性不如女性关注个人健康状况等；造成城村差异，考虑为城市生活节奏快、包容性较大，汽车行业、美容美发行业较多，人群受电离辐射（电磁场）、环境的影响较大等等。

1.4主要血液学指标的意义1.4.1白细胞数（WBC）和中性粒细胞数（N）白细胞包括嗜中性粒细胞(N)、淋巴细胞(L)等，是重要的人体保护机能，有着“人体卫士”的美称[19]。当人体遭到病菌的侵入时，其可集中于病菌入侵部位，通过其胞内含有的溶酶体酶等杀菌物质，有效吞噬或杀伤入侵人体的病菌。当人体内的白细胞数值升高，表示身体可能有炎症。白细胞数值升高常见于细菌感染、白血病、尿毒症等，降低常见于病毒性感染、伤寒、化疗以及放疗后。1.4.2红细胞总数（RBC）和血红蛋白数（HGB）RBC也被称之为红血球，在血液的血细胞含量中属其最多，红细胞中含有血红蛋白，能与空气中的氧气结合，向身体各组织输送氧，故是机体进行气体交换的主要媒介[20]。红细胞增加过多时，血液变稠，不易流动，易造成血管阻塞；数量减少时，输送能力降低导致缺氧状态，产生贫血[21]。1.4.3血小板总数（PLT）血小板在止血凝血、创伤愈合、血管损伤的修复等方面起非常重要的作用。血小板计数增多的因素常包括炎症、缺铁性贫血等；减少的因素包括再生障碍性贫血、急性白血病等，有出血不止的风险[22]。1.4.4凝血酶原时间（PT）与活化部分凝血活酶时间（APTT）PT反映外源性凝血系统的功能是否正常，而APTT反映内源性凝血是否正常，两者延长多因获得性凝血因子的缺乏以及纤维蛋白原的缺乏等，缩短则反映血液处于高凝状态[23]。1.5采血因素对血液指标检测结果准确性的影响1.5.1麻醉剂的影响资料表明，麻醉剂的选择，对血液检测的结果存在一定的影响。对于白细胞计数与分类，使用戊巴比妥钠麻醉的影响要小于水合氯醛；而对于RBC与HGB，则使用戊巴比妥钠麻醉的影响要大于水合氯醛[24]。综合考虑下，本实验采用腹腔注射戊巴比妥钠对SD大鼠进行麻醉，尽量减少对血液学指标的影响。1.5.2采血时间以及送检时间的影响麻醉、采血前禁食不禁水至少12h，以免食物经消化系统处理后成乳糜微粒进入血液系统，使血液呈乳糜状，造成血样浑浊影响比色进而影响检测结果[25]。采血后应立即上下颠倒3~5次，以充分混匀抗凝剂与血液，防止凝血。采集的血液标本应在30min内送至临床检验室，样本量多时应分批送检，以保证标本及时被检测。1.5.3采血方法的影响目前对SD大鼠的采血方法包括尾尖采血、眼眶后静脉丛、颈静脉以及腹主动脉采血法。但前三种会给大鼠带来较大的痛苦，易引起大鼠的应激反应包括排泄、激素的分泌，造成血液指标的改变[26]。腹主动脉具取血量大、不损伤器官、不易溶血等优点。故本试验采用戊巴比妥钠麻醉后进行腹主动脉采血法，以减少因大鼠应激对检验结果的影响。2材料与方法2.1材料2.1.1药物信息该药物AMLZ为生物制品类抗急性淋巴细胞白血病药，是仍未上市的新药，鉴于保密性，在此不方便透露其详细的信息。其为无色澄明液体，溶于水，pH：6.9。临床拟用剂量为2mg/kg，每周给药1次。静脉给药时将本品用0.9%氯化钠注射液稀释后使用。根据目前临床使用抗急性淋巴细胞白血病药物的不良反应研究，推测该药物也可能引起类似的不良反应，故因此设计实验方案。2.1.2实验条件动物房室温介于20℃~26℃，相对湿度40％~70％（采用DSR-TTLA温湿度监控系统自动记录），换气次数≥15次/h，照明采用12h/12h昼夜明暗交替。饲养方式为笼养，雌雄分开，自由摄食、饮水。实验开始后每笼3～5只，饲养笼具为不锈钢笼。饲料每天投放1次，鼠笼及饲料盒每2周更换1次，每周更换饮水瓶1次、更换饮水3次；盛接粪便的托盘，每天更换1次。动物饮用水为纯净水，来自实验动物室纯净水系统。每月取样1次送本中心遗传及生殖毒理室进行微生物检测；按中华人民共和国国家标准GB5749-2006，每年取样2次送广州分析测试中心进行水质检测。饲料由广东省医学实验动物中心提供，每年取样1次送广州分析测试中心进行营养物质及有害物质检测。以确保符合国家对非临床安全性评价机构的要求，减少外界因素对试验的影响，保证试验结果的准确性。2.1.3试验动物试验动物来源于广东省医学实验动物中心，购入5~6周龄SPF级SD大鼠210只，雌雄各半，动物接收时体重140g~160g。饲养一周进行适应性观察后（应确保每天至少对动物观察一次，要求纳入实验当中的所有动物均符合实验要求），选用经适应性饲养合格的200只SD大鼠按体重、性别随机均衡分成溶媒对照组、AMLZ低、中、高剂量组4组，每组50只，雌雄各半,每笼3~5只进行群养。2.1.4实验仪器TP-2101十分之一电子天平、BS223S千分之一电子天平、SW-CJ-1D净化工作台、全自动血液分析仪、全自动凝血仪、全自动生化分析仪、尿十项分析仪。2.1.5实验主要试剂表3实验主要试剂试剂名称批号来源规格受试物AMLZS201704003保密100mg/10mL/瓶0.9%氯化钠注射液D16102403-1湖南科伦制药有限公司500mL:4.5g戊巴比妥钠溶液S201706020上海倍卓生物科技有限公司100ml/瓶2.2方法2.2.1分组方法选用经适应性饲养合格的200只SD大鼠，雌雄各半，用Excel软件按体重、性别随机均衡分成溶媒对照组、AMLZ低剂量组、AMLZ中剂量组、AMLZ高剂量组。每组50只，雌雄各半。（见表4）表4动物分组组别动物数（只）动物号♀♂♀♂溶媒对照组25251~2525~50低剂量组252551~7576~100中剂量组2525101~125126~150高剂量组2525151~175176~2002.2.2剂量设计及其给药方法由于该药物为新药，并无前人经验可借鉴，因此该剂量为探索剂量。AMLZ临床拟用剂量为2mg·kg-1·次-1（根据拟用临床剂量法[27]，大鼠临床等效剂量12.2mg生药·kg-1），本试验共设4个剂量组，即低、中、高三个剂量组和溶媒对照组，各剂量组给药体积均为10mL·kg-1·次-1，溶媒对照组给予等体积的0.9%氯化钠注射液。（详见表5）表5剂量设计组别动物数（只）受试物名称剂量（mg·kg-1）浓度（mg·mL-1）相当于临床拟用剂量倍数溶媒对照组500.9%氯化钠注射液———AMLZ低剂量组50AMLZ12.51.256.25AMLZ中剂量组50AMLZ25.02.5012.50AMLZ高剂量组50AMLZ50.05.0025.002.2.3受试物调配方法表6受试物调配方法AMLZ低剂量组AMLZ中剂量组AMLZ高剂量组抽取AMLZ药液1瓶至量筒中，取适量的0.9%NaCl注射液稀释至80mL，配成浓度为1.25mg·mL-1药液。抽取AMLZ药液2瓶至量筒中，取适量的0.9%NaCl注射液稀释至80mL，配成浓度为2.50mg·mL-1药液。抽取AMLZ药液4瓶至量筒中，取适量的0.9%NaCl注射液稀释至80mL，配成浓度为5.00mg·mL-1药液。2.2.4实验方法动物每周进行一次鼠尾静脉注射给药，持续28天，记录给药时间。根据每周测定的大鼠体重，调整给药体积。给药期间每天进行一般临床观察,内容包括外观、体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、排泄物性状等。每周测定一次动物体重及摄食量，在给药结束后处死120只动物，进行血液学与凝血功能检查。2.2.5采样方法麻醉、采血前禁食不禁水至少12h，麻醉采用30mg·mL-1的戊巴比妥钠溶液，按40mg·kg-1（1.33mL·kg-1）对大鼠进行腹腔注射，动物进入深麻状态后，于大鼠腹主动脉采血。2.2.6血液学检查EDTA-K2抗凝管采血约1.9mL用于血常规检测，采血后立即上下颠倒3~5次，使抗凝剂与血液充分混匀，防止凝血。用SiemensADVIA2120全自动动物血液分析仪进行测定，检测指标方法见表7。表7血液学指标检测与方法序号血液学检查方法1红细胞总数（RBC）鞘流电阻法2血红蛋白（HGB）比色法3白细胞总数（WBC）流式细胞术的半导体激光检测法4血小板总数（PLT）鞘流电阻法5红细胞容积（HCT）鞘流电阻法6平均红细胞容积（MCV）鞘流电阻法7平均红细胞血红蛋白（MCH）鞘流电阻法8平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）鞘流电阻法9网织红细胞计数（Ret）鞘流电阻法10白细胞分类百分比鞘流电阻法11中性粒细胞（N）流式细胞术的半导体激光检测法12淋巴细胞（L）流式细胞术的半导体激光检测法13单核细胞（M）流式细胞术的半导体激光检测法14嗜酸性粒细胞（E）流式细胞术的半导体激光检测法15嗜碱性粒细胞（B）流式细胞术的半导体激光检测法2.2.7凝血检查柠檬酸钠抗凝管采血约1.8mL用于凝血四项检测，采血后立即上下颠倒3~5次，使抗凝剂与血液充分混匀，防止凝血。用离心机3000r/min离心血浆标本10min分离血浆后，用SysmexCA1500全自动血凝仪进行测定，检测指标方法见表8。表8凝血功能检测方法序号凝血功能检查方法1凝血酶原时间（PT）凝固法2活化部分凝血活酶时间（APTT）凝固法2.2.8统计学方法数据采用SPSS统计分析软件包进行统计处理并以均数加减标准差（）表示；计量资料符合正态分布检验和方差齐性检验（没有统计学意义即>），则进行各组间的单因素方差分析（One-WayANOVA），>≤SNK-q检验进行比较分析。若不符合正态分布检验和方差齐性检验（有统计学意义即≤），则与等级资料采用相同的统计方法，即进行Kruskal-WallisH检验，若≤，则证明该药物对血液系统的影响有统计学意义。3实验结果3.1AMLZ长期给药对试验SD大鼠临床观察以及摄食量的影响实验期间，各组试验SD大鼠外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、排泄物等均未见明显异常，均处于正常水平。AMLZ各剂量组试验大鼠与溶媒对照组试验大鼠相比，其摄食量在第0天、第7天、第14天、第21天、第28天均无明显统计学差异（P＞0.05）。（见表9）表9AMLZ对SD大鼠摄食量的影响（g·100g体重-1·d-1，±s）时间性别笼数（n）溶媒对照组低剂量组中剂量组高剂量组D0♀58.3±0.98.0±0.57.5±0.87.2±0.4♂510.3±0.78.9±0.88.4±0.89.0±1.2D7♀58.7±1.07.9±1.38.1±0.47.6±1.4♂59.1±1.29.7±0.88.5±0.98.5±1.2D14♀58.0±0.67.6±0.38.3±1.49.3±2.6♂58.2±1.28.2±0.58.0±0.78.6±1.1D21♀58.0±0.88.8±0.48.6±0.59.5±3.0♂57.4±1.08.1±0.38.3±0.78.8±1.3D28♀58.2±0.88.6±0.48.9±0.59.9±3.0♂58.4±1.08.8±0.38.6±0.79.0±1.33.2AMLZ长期给药对试验SD大鼠体重的影响试验期间，AMLZ各剂量组试验大鼠与溶媒对照组试验大鼠相比，其体重第0天、第7天、第14天、第21天、第28天均无明显统计学差异（P＞0.05）。（见表10）表10AMLZ对SD大鼠体重的影响（g，±s）时间性别动物数（n）溶媒对照组低剂量组中剂量组高剂量组D0♀25168.2±6.3170.9±5.2169.4±6.0168.4±6.4♂25195.0±13.0196.1±10.3194.7±10.7197.1±7.9D7♀25182.2±9.2174.7±8.3172.3±10.0171.6±12.2♂25234.0±16.9236.9±17.6238.8±16.6239.6±9.7D14♀25187.8±10.0179.8±10.8175.9±10.7181.0±9.1♂25247.9±16.1244.7±15.2249.4±14.9250.8±12.7D21♀25199.4±14.0194.3±12.3189.8±11.0192.2±9.4♂25280.6±17.6276.7±17.7281.7±17.6283.5±14.5D28♀25218.5±13.4221.4±15.1206.7±13.0208.9±10.3♂25301.4±15.3297.3±15.9299.8±16.9302.8±13.53.3AMLZ对试验SD大鼠血液系统的血液学指标的影响AMLZ低剂量组试验大鼠与溶媒对照组试验大鼠相比，其雌性血液中RBC、HGB、HCT、中性粒细胞四个指标偏高，其均有明显的统计学差异（P＜0.05）；AMLZ中剂量组试验大鼠与溶媒对照组试验大鼠相比，其雄性及雌性血液中RBC、HGB、HCT三个指标偏高，雌性血液中中性粒细胞指标偏高、淋巴细胞偏低，其均有明显的统计学差异（P＜0.05）；AMLZ高剂量组试验大鼠与溶媒对照组试验大鼠相比，其雄性及雌性血液中RBC、HGB、HCT三个指标偏高，雌性血液中中性粒细胞指标偏高、淋巴细胞偏低，其均有明显的统计学差异（P＜0.05）。除此之外，AMLZ低、中、高剂量组试验大鼠血液中的其他指标与溶媒对照组相比，均无明显统计学差异（P＞0.05）。（详见图1、图2、图3、图4、表11、表12）图1AMLZ鼠尾静脉给药对试验SD大鼠血液中RBC的影响图2AMLZ鼠尾静脉给药对试验SD大鼠血液中HGB的影响图3AMLZ鼠尾静脉给药对试验SD大鼠血液中HCT的影响图4AMLZ鼠尾静脉给药对试验SD大鼠血液中中性粒细胞的影响表11AMLZ对SD大鼠血常规的影响（±s）组别性别动物数（n）WBCRBCHGBHCTMCVMCHMCHCPLT×109/L×1012/Lg/dL％fLPgg/dL×109/L溶媒对照组♀153.94±1.366.39±0.4212.7±0.536.3±2.556.9±1.319.9±1.035.0±1.81093±119♂154.85±1.586.78±0.4613.2±0.739.6±1.958.4±1.919.5±0.633.3±0.51070±149低剂量组♀153.45±0.677.12±0.45*13.9±0.6*40.1±1.7*56.3±1.619.4±0.534.6±0.61101±136♂154.81±2.667.10±0.5413.7±0.841.6±2.958.7±1.319.3±0.632.8±0.71106±132中剂量组♀152.63±1.377.21±0.43*13.9±0.6*40.3±1.5*55.9±1.919.3±0.534.6±0.61131±94♂154.92±1.257.82±0.46*14.8±0.5*44.3±1.7*56.8±2.719.0±0.833.4±0.81177±179高剂量组♀153.08±0.997.42±0.43*14.5±0.7*41.4±1.8*55.9±2.119.6±0.835.0±0.71107±120♂153.88±2.167.72±0.39*14.8±0.6*44.2±1.7*57.2±1.819.2±0.633.5±0.41131±96注：“*”表示与溶媒对照组相比，P＜0.05。表12AMLZ对SD大鼠白细胞分类及网织红细胞计数的影响（±s）组别性别动物数（n）中性N（%）淋巴L（%）单核M（%）嗜酸E（%）嗜碱B（%）Ret（%）溶媒对照组♀1513.8±4.082.4±4.52.2±0.71.5±0.50.1±0.13.7±1.0♂1512.6±5.285.0±5.61.6±0.50.7±0.30.1±0.14.7±0.8低剂量组♀1521.1±13.6*75.7±13.61.6±0.51.5±0.40.1±0.03.8±1.2♂1513.4±9.684.0±10.51.7±0.90.8±0.50.2±0.35.2±1.2中剂量组♀1521.9±5.4*74.1±6.4*1.8±0.42.0±0.80.1±0.14.3±1.5♂1519.8±13.277.4±13.81.9±1.00.8±0.10.1±0.13.7±1.1高剂量组♀1524.5±8.7*71.2±9.0*2.1±1.02.1±0.80.1±0.13.7±0.7♂1515.6±5.481.0±6.62.3±1.31.0±0.50.1±0.13.7±1.6注：“*”表示与溶媒对照组相比，P＜0.05。3.4AMLZ对试验SD大鼠凝血相关指标的影响AMLZ低、中、高剂量组试验大鼠与溶媒对照组试验大鼠相比，其雌性的PT指标偏低，且均有明显的统计学差异（P＜0.05）。除此之外，AMLZ低、中、高剂量组试验大鼠凝血的其他指标与溶媒对照组相比，均无明显统计学差异（P＞0.05）。（详见图5、表13）图5AMLZ鼠尾静脉给药对试验SD大鼠凝血功能PT的影响表13AMLZ对SD大鼠血凝的影响（±s）组别性别动物数（n）PT（Sec）APTT（Sec）Fbgg/LAPTT（Sec）溶媒对照组♀1510.0±0.715.4±1.12.73±0.2545.0±1.5♂1525.6±7.035.1±6.43.37±0.4448.3±1.6低剂量组♀158.8±0.4*14.3±1.32.75±0.3246.4±5.0♂1520.5±5.730.1±7.03.39±0.1350.8±3.5中剂量组♀159.1±0.4*14.6±1.02.70±0.2246.8±2.2♂1522.4±6.130.8±4.63.41±0.5449.3±3.4高剂量组♀159.1±0.4*14.5±1.92.69±0.3247.7±2.4♂1518.3±7.730.4±8.03.36±0.2148.7±2.8注：“*”表示与溶媒对照组相比，P＜0.05。4分析与讨论4.1AMLZ鼠尾静脉给药对白细胞及其相关指标的影响白细胞及其相关指标包括白细胞数（WBC）、中性粒细胞（中性N）、淋巴细胞（淋巴L）等。从实验结果数据看来，AMLZ各剂量组雌性大鼠中性粒细胞百分数上升，且上升幅度随剂量的增大而增大（见图6），而相同组别中淋巴细胞百分数下降，且下降幅度随着剂量的增大而增大。其他白细胞相关指标与溶媒对照组相比，均未发现异常。这种情况的出现的原因尚不明确，查阅资料后，猜测如下：第一，可能是由于AMLZ导致大鼠免机体处于应激状态，提高机体防御力以及抗感染[28]；第二，中性粒细胞、淋巴细胞两者均属于白细胞分类，中性粒细胞数偏高，相对性的淋巴细胞数会降低[29]。图6AMLZ鼠尾静脉给药对雌性大鼠血液中中性粒细胞的影响图7AMLZ鼠尾静脉给药对雌性大鼠血液中淋巴细胞的影响4.2AMLZ鼠尾静脉给药对红细胞及其相关指标的影响红细胞及其相关指标主要包括红细胞数（RBC）、血红蛋白浓度（HGB）、红细胞比容（HCT）等。从试验结果数据看来，AMLZ各剂量组SD大鼠RBC、HGB、HCT上升，且上升幅度随着剂量的增大而增大（见图8、9、10）。其他红细胞相关指标与溶媒对照组相比，均未发现异常。这种情况出现的原因尚不明确，查阅资料后，猜测如下：药物进入大鼠体内后，增强骨髓生成RBC的能力，但RBC的增多并不是机体需要，无代偿意义，故RBC偏高。RBC中含有HGB，因RBC增多故HGB增多。HCT是指在一定容积的血液中RBC所占的百分比，RBC增多，故HCT增大[30]。图8AMLZ鼠尾静脉给药对SD大鼠血液中RBC的影响图9AMLZ鼠尾静脉给药对SD大鼠血液中HGB的影响图10AMLZ鼠尾静脉给药对SD大鼠血液中HCT的影响4.3AMLZ鼠尾静脉给药对凝血相关指标的影响凝血相关指标主要包括PT、APTT等。从试验结果数据看来，AMLZ各剂量组雌性大鼠与溶媒对照组相比，有小幅度下降，其他凝血相关指标均未发现异常。PT减少，则凝血时间减少，表明血液中的凝血功能增强。图11AMLZ鼠尾静脉给药对雌性大鼠凝血功能PT的影响4.4展望与不足本次试验为药物非临床安全性评价研究，但由于条件的限制，仅探索了该受试物对血液系统的影响，该受试物属于生物制品类药物，还应探索其对免疫功能的不良反应以及其他毒性进行评价等。单单血液系统是远远不够全面地反应该受试物的不良反应的，可能还会有其他抗癌药可能出现的不良反应等。受试物雌性大鼠PT有轻微下降，但还无从指证两者在凝血功能上有何差别。试验可选用急性淋巴细胞白血病动物模型对该受试物进行安全性评价研究，以更贴近试验研究的准确性。最后，此次试验只是初步探索，还能更深一步进行研究，更进一步认证试验结果推论的正确与否，本次试验可作为参考的依据。结论结合历史背景数据表明该生物制品类抗急性淋巴细胞白血病新药AMLZ对SD大鼠血液系统未见产生毒理学意义的影响。在生物制品一类治疗ALL中，常见的疗法如抗CD52单抗的靶向治疗使大量患者发生骨髓抑制，其不良反应还包括肺炎、菌血症以及巨细胞病毒激活等，而本受试物AMLZ无上述影响。综上所述，表明AMLZ较其他生物制品类具有一定的优势，具有良好的开发前景。参考文献：马晶晶,陈月,于亮.急性淋巴细胞白血病耐药机制的研究进展[J].中国实验血液学杂志,2016,24(01):261-265.丁惠萍.浅谈白血病及其药物治疗[J].中南药学(用药与健康),2018(05):40-41.陈苏宁,王谦.急性淋巴细胞白血病的分子遗传学研究进展[J].临床血液学杂志,2017,30(03):345-349.魏辉.急性淋巴细胞白血病的治疗[J].临床荟萃,2014,29(10):1100-1103.上海儿童医学中心领衔的科研团队在儿童白血病耐药复发机制研究上获得重大突破[J].上海交通大学学报(医学版),2015,35(05):616.丁惠萍.抗肿瘤药物的血液系统毒性及防治[J].医药导报,2001(10):622-623.林文远.急性白血病免疫治疗的研究现状[J].实用肿瘤杂志,2015,30(04):306-310.Gill

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