细胞库和毒种库制备的管理

细胞库和毒种库制备的管理程老师2023.11.24内容提要法规要求及风险评估管理计划安排与各要素梳理细胞库和毒种库的放行管理保存和领用管理12342程老师2023.11.241、法规要求及风险评估管理3细胞库质量管理相关法规4序号标题发布时间1《中国药典》三部

生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制20202疫苗生产用细胞基质的技术审评一般原则20083ICH

Q5A来源于人或动物细胞系的生物技术产品的病毒安全性评价19994ICH

Q5D用于生物技术产品及生物制品生产的细胞基质的来源和鉴定19975WHO_TRS_878

疫苗生产用动物源基质要求-附录11998细胞库相关法规5《中国药典》2020年版三部通则：生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制用于生物制品生产的细胞系/株均须通过全面检定,须具有如下相应资料,并经国家药品监督管理部门批准。细胞库的建立可为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞。细胞建库应在符合中国现行《药品生产质量管理规范》的条件下制备。细胞库相关法规6ICH

Q5A来源于人或动物细胞系的生物技术产品的病毒安全性评价来源于细胞系的生物技术产品的一个共同特点是存在病毒污染的风险，病毒可通过多种途径进入MCB，例如：1）

从受感染动物制备的细胞系；2）

使用病毒建立细胞系；3）

使用受污染的生物试剂如动物血清组分；4）

细胞操作过程中受到的污染这种污染可能产生严重的临床后果。有关这些产品病毒污染的安全性，只有通过实行如下的病毒测试计划并在生产过程中对病毒的去除或灭活作用进行评估，才可能得到确实的保证。细胞库相关法规7ICH

Q5D用于生物技术产品及生物制品生产的细胞基质的来源和鉴定避免被污染的细胞基质(或细胞库)用于生产是十分重要的，否则，由于受污染的细胞库不能使用，必须重新生产细胞库，这将延误产品上市或开发的时机。应该认识到没有哪一种细胞库检测方案能检测出所有可能潜在的污染；因此，只有在细胞建库期间采取预防措施，才是确保细胞不被污染，为生产提供可靠的细胞基质。细胞库的注册要求8序号项目检查内容1原始细胞来源合法性1、原始细胞来源机构、来源历史资料、细胞株培养的历史资料；2、细胞株鉴定报告、质量检测报告、遗传稳定性报告等。3、细胞株的采购、运输、入境等环节。2细胞库制备及检定合规性1、细胞库制备的关键设施和设备2、细胞库制备的关键原辅料？是否可追溯（包括供货协议、发票、检验合格报告书、购入时间、领用记录、使用台账等）3、细胞库制备（过程、规模）、检定和传代稳定性研究，还包括生产终末细胞和高限代次细胞的检定3细胞库的管理合规性1、细胞入库、出库、销毁等环节的记录可追溯性和管理流程合规性细胞库目标概况目标产品概况（QTPPs）无菌试验成活率生长特性同一性鉴别试验成瘤或致瘤性无外源因子稳定性传代稳定性、储存稳定性细菌，真菌、分枝杆菌冻存复苏达80%以上存活率、

形态学、

增殖曲线、倍增时间前、中、后三段细胞管中细胞按生长特性要求检测鉴别细胞株是该细胞株无成瘤或致瘤性无外源因子细胞库质量风险细胞污染（无菌或外源因子）细胞传代不稳定、鉴别试验不合格、成瘤或致瘤、生长特性异常同一性不达标细胞成活率不达标人：资质、培训

机：设备清洁验证料:

QA

放行环：空调净化系统验证、EMP监测法：按SOP操作、按无菌要求操作冻存工艺：冻存工艺验证冻存过程：降温曲线是否一致冻存条件：稳定，有监测混匀均一性收获细胞重悬混匀均一分装可能的失败模式分析操作导致失败操作熟练的人员，培训合格，工艺参数符合工艺要求细胞稳定性不合格10原始细胞系/株、细胞代次、细胞传代过程细胞传代过程、冻存过程、冻存条件、细胞库管理批号问题可能的原因预防和纠偏措施T06-202303XF002细胞复苏时，用培养液吹打混匀细胞过程中，细胞溅出来混匀吹打力度太大，不轻柔检查和调试移液器，轻柔吹打混匀细胞T06-202304XJ003细胞污染开口操作太多，无菌操作经验不足尽可能减少开口操作，无菌操作多训练，关键操作有经验者进行操作T06-202304XJ004准备的器具出现破损准备器具时未仔细检查准备器具时仔细检查核对，增加备件……T06-202305XD005离心后倒上清液时倒掉细胞倒上清液时动作太快，未把握好倾斜度倒上清液的动作轻柔小心T06-202305XD006细胞存活率不达标细胞冻存液不稳定选择稳定的细胞冻存液和做好冻存工艺验证T06-202306XD009收获细胞量不均一分装过程中细胞沉降，混匀不均一分装过程中，细胞混匀工艺验证T06-202306XD0011标签出错标签设计出现错误标签设计未核对确认T06-202306XD0015贴签出错，瓶号和支数不一致手工贴签，最后的签发多了未控制好签的管理做好发签和贴签的管理，控制好数量……11收集先前出现过的问题项目可能的风险拟采取的措施细胞株来源1.选择的细胞株不适合或者是夕阳产品，注册会被淘汰；选择合适的细胞株2.细胞株的来源历史资料不全、来源证明资料不全，无法追溯，注册需要发补或不被通过；检查和及时完善细胞株来源资料3.来源于非国家/国际细胞保藏单位或非发明人，注册不被接受来源于国家/国际细胞保藏单位的细胞系/株12细胞库制备的风险评估项目可能的风险拟采取的措施细胞库制备1.建库的人员操作不可靠、培训不到位，导致建库失败；操作前培训，操作中出现问题或风险及时培训2.建库的原材料质量不可靠，导致建库失败的风险；对建库用到的原材料进行评估管理，对关键原材料按GMP要求管理3.建库的设施设备不可靠，导致建库失败的风险；对建库用的设施设备进行评估管理，对关键设施设备进行验证4.操作环境不能满足要求，导致建库失败的风险；对操作环境进行清洁消毒，并对空调净化系统验证环境监测5.建库的SOP撰写不能有效地指导操作，记录设计数据不完整；相关文件经各相关方审核批准通过6.建库的工艺不稳定，不可靠，会导致建库失败的风险；建库工艺验证，确保出现的问题能找到原因7.建库过程中，可能会发生基因突变、染色体异常，影响细胞的稳定性和可靠性；按照验证的工艺操作，细胞稳定性检测、终末代次超高代次相关检测13细胞库制备的风险评估项目可能的风险拟采取的措施细胞库检定1.检定的项目不全面，导致不合格的细胞库进入后续的应用环节；根据先验知识和法规指南设计检定项目，特有的可通过评估增加2.检定的标准不严格，导致不合格的细胞库进入后续的应用环节；根据先验知识和法规指南设计检定的标准3.检测的方法不可靠，导致检测结果不可靠；检测的方法经过验证和确认的方法4.取样不科学或没有依据，导致检测结果不可靠；取样按照法规或指南的要求进行，按照已有的取样操作规范进行细胞库储存与保管1.细胞库标识不清，保管不到位，无权限限制，导致细胞库质量和数量受影响的风险；细胞库设置双人双锁权限管理，定置、标识清楚2.细胞库领用或进出出差错或混淆，导致风险；细胞库台账严格管理3.细胞库保管温度无监控，保存温度超标，导致细胞库质量和稳定性受影响；细胞库液氮添加管理、温度报警、温度记录14细胞库制备的风险评估毒种库的分类15生物制品用的菌种和毒种，按其在生物制品生产、检定过程中用途的不同，可分为四类：1.生产用的菌种和毒种2.工具菌种和毒种3.检定用的菌种和毒种4.标准菌株/毒株以及参考菌株/毒株毒种库的法规要求16《中国药典》2020年版三部

通则：生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制生产和检定用菌毒种，来源途径应合法，并经国家药品监督管理部门批准。生物制品生产用菌毒种应采用种子批系统，并应尽量减少传代次数，以降低发生遗传变异的风险。原始种子应验明其历史、来源（包括重组工程菌毒种的构建过程）和生物学特性。从原始种子传代和扩增后保存的为主种子批。从主种子批传代和扩增后保存的为工

作种子批，工作种子批用于生产产品。工作种子批的生物学特性应与原始种子一致，每批主种子批和工作种子批均应按各论要求保管、检定和使用。由主种子批或工作种子批移出使用的菌毒种无论开瓶与否，均不得再返回贮存。生产过程中应规定各级种子批允许传代的代次，并经国家药品监督管理部门批准。菌毒种的传代及检定实验室应符合国家生物安全的相关规定。毒种库的法规要求17《中国药典》2020年版三部人用疫苗总论建立种子批系统的目的旨在保证疫苗生产的一致性和连续性。应建立主种子批/主细胞库和工作种子批/工作细胞库并规定使用的限定代次。种子批系统各种子批/细胞库应在符合中国现行《药品生产质量管理规范》的条件下建立和制备，并应有详细的记录。主种子批/主细胞库确定无外源因子污染时，来自该主种子批/主细胞库的工作种子批/工作细胞库只需排除制备工作种子批/工作细胞库所需的材料和过程可能存在的外源因子污染的风险；如因主种子批/主细胞库数量限制而无法进行全面的外源因子检查时，应对工作种子批/工作细胞库进行全面检定。序号项目检查内容1毒株来源合法性1、原始毒株来源机构、来源历史资料、毒株筛选、分离、鉴定和减毒培养等历史资料；2、毒株鉴定报告、质量检测报告、传代稳定性报告等。3、毒株的采购、运输、入境等环节。2种子批制备及检定合规性1、毒种库制备的关键设施和设备2、毒种库制备的关键原辅料？是否可追溯（包括供货协议、发票、检验合格报告书、购入时间、领用记录、使用台账等）3、毒种库制备（过程、规模）、检定和传代稳定性研究（包括质量稳定性和基因稳定性研究资料，应包括疫苗代次和超高代次，确定限传代次）3毒种库的管理合规性1、种子批入库、出库、销毁等环节的记录可追溯性和管理流程合规性毒种库的注册要求18批号问题可能的原因预防和纠偏措施……T06-202303DZ002病毒培养时，出现染菌开口操作太多，无菌操作经验不足尽可能减少开口操作，无菌操作多训练，关键操作有经验者进行操作T06-202304DZ003病毒培养时，设备故障设备长时间使用，配件老化关键设备定期维修保养，及时更换老化配件T06-202304DZ004准备的器具出现破损准备器具时未仔细检查准备器具时仔细检查核对，增加备件T06-202305DC005澄清纯化过程中出现堵塞滤器载量不够对纯化工艺进行工艺研究以及耐受性验证T06-202305DC006病毒滴度未达到要求，回收率低工艺不稳定，检测误差较大采用对比试验，对比检测等方法进行工艺研究，做好方法学验证、病毒培养收获纯化工艺验证T06-202306DF009病毒分装时，手工分装出现少数支污染分装过程中开口较多，时间较长容易操作污染分装过程尽可能设计减少开口和操作时间，进行分装工艺模拟验证T06-202306DF0011标签出错标签设计出现错误标签设计未核对确认T06-202306DF0015贴签出错，瓶号和支数不一致手工贴签，最后的签发多了未控制好签的管理做好发签和贴签的管理，控制好数量……19收集先前出现过的问题毒种库目标概况目标产品概况（QTPPs）鉴别试验病毒滴度外源因子检查无菌试验同一性主要功能基因和遗传标志物测定全基因系列测定鉴别该毒种是该毒种符合毒种库滴度要求无外源病毒因子细菌、真菌、支原体、分枝杆菌前、中、后三段毒种管的种子批按病毒滴度要求检测基因是目标基因与原始株毒种库质量风险种子批污染（无菌或外源因子）毒株来源及毒株筛选或构建风险同一性不达标滴度或效价不达标人：资质、培训

机：设备清洁验证料: QA

放行环：空调净化系统

验证、EMP监测法：按SOP操作、按无菌要求操作毒株筛选和构建：经过检验或确认毒种传代过程：工艺研究经过确认冻存条件：稳定，有监测混匀均一性收获毒种重悬混匀均一分装可能的失败模式分析操作导致失败操作熟练的人

员，培训合格，工艺参数符合

工艺要求稳定性不合格21来源合规性；

毒株筛选或构

建科学合逻辑、记录完整传代过程过程控制基因稳定性检测；储存稳定性试验项目可能的风险拟采取的措施毒株来源1.选择的毒株不适合或者是夕阳产品，注册会被淘汰；选择合适的毒株2.毒株的来源历史资料不全（例如引进的代次、减毒或传代历史等）。、来源证明资料不全（可以委托中介购买，

但需提供中介合同、发货单等），无法追溯，注册需要

发补或不被通过；检查和及时完善毒株来源资料来源于非发明人或国家/国际菌毒种保藏机构。（不能接受菌毒种的民间转让）来源于发明人或国家/国际菌毒种保藏机构。分离菌毒种筛选和鉴定，没有进行系统性筛选，初筛和优选。不同候选株免疫原性的比较，不同代次候选株免疫原性的比较，对不同地区毒株的中和试验（交叉中和试验），选择保护谱广的、保护性抗原序列无改变其他序列改变小的、滴度高的，作为生产用毒株，确定中和试验毒株。重组基因工程株，缺少构建过程和筛选。缺少重组株的检定，包括目的基因序列测定和分析、表达产物的活性分析、表达量分析、质粒拷贝数、生物学特性等。检查其构建、筛选及检定相关资料，确保完整科学符合预期要求。22毒种库制备的风险评估项目可能的风险拟采取的措施毒种库制备1.建库的工艺不稳定，不可靠，会导致建库失败的风险；建库工艺验证，确保出现的问题能找到原因2.建库的原材料质量不可靠，导致建库失败的风险；对建库用到的原材料进行评估管理，对关键原材料按GMP要求管理3.建库的设施设备不可靠，导致建库失败的风险；对建库用的设施设备进行评估管理，对关键设施设备进行验证4.操作环境不能满足要求，导致建库失败的风险；对操作环境进行清洁消毒，并对空调净化系统验证，环境监测4.建库的人员操作不可靠、培训不到位，导致建库失败；操作前培训，操作中出现问题或风险及时培训5.建库的SOP撰写不能有效地指导操作，记录设计数据不完整；相关文件经各相关方审核批准通过6.建库过程中，可能会发生基因突变，影响毒种的稳定性和可靠性；按照验证的工艺操作，毒种基因稳定性检测、毒种代次、终末代次、超高代次相关检测，与原始毒株比较分析23毒种库制备的风险评估项目可能的风险拟采取的措施毒种库检定1.检定的项目不全面，导致不合格的毒种库进入后续的应用环节；根据先验知识和法规指南设计检定项目，特有的可通过评估增加2.检定的标准不严格，导致不合格的毒种库进入后续的应用环节；根据先验知识和法规指南设计检定的标准3.检测的方法不可靠，导致检测结果不可靠；检测的方法经过关键项验证和确认的方法4.取样不科学或没有依据，导致检测结果不可靠；取样按照法规或指南的要求进行，按照已有的取样操作规范进行毒种库储存与保管1.毒种库标识不清，保管不到位，无权限限制，导致毒种库质量和数量受影响的风险；毒种库设置双人双锁权限管理，定置、标识清楚2.毒种库领用或进出出差错或混淆，导致风险；毒种库台账严格管理3.毒种库保管温度无监控，保存温度超标，导致毒种库质量和稳定性受影响；毒种库温度报警、温度记录24毒种库制备的风险评估外源因子病毒污染风险评估25步骤失败模式导致不良严重性检测性可能性风险因子措施：降低风险策略严重性检测性可能性风险因子风险降低动物源性材料选择确定阶段选择的动物源性材料带有外源病毒因子的污染导致细胞库和毒种库被其他病毒因子的污染33218动物源性材料采购前，对动物源性材料供应商进行资质评价，确保供方为合法并有质量保证的供应商；严格对供应商进行审计，要求提供资质合格证明。并与其签订采购协议，明确规定动物源性原材料检疫的完整性和可追溯性；采购过程必须严格执行物料采购的管理要求，应有详细的采购信息记录，并归档保存；严格遵守法规的要求，严禁从疯牛病疫区国家购买动物源性原材料。32161.确认使用的牛血清和猪胰酶的供应商资质合格并且为有质量保证的合法供应商。确认牛血清来源于疯牛病非疫区国家。一系列审计和采购管理措施从源头上保障动物源性材料的质量。动物源性材料来公司到使用前检验放行阶段选择的动物源性材料厂家未进行相关处理，来公司后未进行检验放行，导致有外源病毒因子的污染导致细胞库和毒种库被其他病毒因子的污染33218要求厂家进行外源病毒灭活处理（辐照），并经相关外源因子检测（牛血清的厂家进行牛源性的病毒因子检测，猪胰酶进行了猪源性病毒因子检测，具体的参加厂家COA），并要求厂家提供其检测资质证明文件（COA）；每批动物源性材料按照物料管理要求，经本公司QC抽样检测，检测合格，QA放行才能领用。3216对动物源性材料本身通过辐照去除外源因子污染又加了一道保障；进入公司使用前经QC进行检测，QA放行可以发现和预防不合格的原材料进入到使用阶段外源因子病毒污染风险评估和控制26步骤失败模式导

致

不良严重性检测性可能性风险因子措施：降低风险策略严重性检测性可能性风险因子风险降低细胞库和毒种库制备过程细胞库和毒种库制备过程中导致的外源因子的污染导致细胞库和毒种库被其他病毒因子的污染33218细胞库和毒种库在GMP条件下制备；操作人员均选择有资质且经过培训合格才能进行操作 ；制备的细胞主库、工作库、毒种库的主种子批、工作种子批均进行牛源、猪源及其他等多项外源因子检测。3216细胞库和毒种库的制备在GMP条件下进行，操作人员都是有经验有资质且培训合格的人员，环境都是洁净区净化系统环境监测合格的条件下进行的；制备后的细胞库和毒种库进行全面的检测，多重控制。2、计划安排与各要素梳理27计划安排细胞株和毒株筛选或购买物料、设备、环境、人员、文件准备细胞库和毒种库制备过程细胞库和毒种库检测细胞库和毒种库的保存和管理审查细胞株和毒株来源合规性以及评估注册风险评估工艺可行性、关键物料、设备、环境、人员，进行相应的梳理、检查和控制现场监控；文件、记录及时审查；中间过程控制；问题和风险及时纠偏和预防；取样；送检审核；现场监控；文件、记录及时审核；数据及时汇总分析；问题和风

险及时纠偏和预防； 管理流程及管理规程文件生效；定期监控；问题和风险及时纠偏和预防。建库计划质量计划28细胞库制备计划29各要素梳理-物料30建库用物料是否影响产品质量……风险高低细胞培养基√高碳酸氢钠√高谷氨酰胺√高胰酶√高……建库用耗材是否直接接触产品……细胞工厂√高T瓶√高……接收取样入库留样放行检验发放物流部库管员：初验，合格后入库QC取样人：按照SOP取样，贴取样证物流部库管员：入库，交申验单QC检验员：按照SOP检验，出检验报告QC检验员：原辅料及内包材留样QA：按照物料放行审核内容，对物料进行审核，并填写“物料审核放行单”，由质量保证部经理批准放行。物流部库管员：收到物料审核放行单后方可发放物料采购物料管理流程物料清单设施设备系统影响评估31问题1.

是否与产品（如：空气质量）、产品接触表面或工艺流直接接触（如：溶液、内包材）？2.

是否提供一种辅料，或是否生产（或直接接触）某种与工艺接触的成分、原料或溶剂（如：注射用水）？3.是否用于清洁，消毒或灭菌操作（如：纯蒸汽）？4.

是否维护产品状态（如：氮气吹扫）？5.

是否产生数据，用于判定产品放行（如：电子批记录系统，关键工艺参数图表记录仪，放行实验室仪器）？6.

是否是一个工艺控制系统（如：PLC

DCS）或包含一个可能影响产品质量的工艺控制系统，并且对控制系统的性能没有独立的验证系统？7.

是否用于建立或控制生产环境中的重要或关键工艺参数？8.系统是否支持一个直接影响系统但对产品质量无影响？1～7有1个为“是”：直接影响系统； 1～7为“否”而8为“是”：间接影响系统； 1～8为“否”：无影响系统。建库用设施是否影响产品质量……风险高低XX车间空调净化系统√高XX车间水系统√高XX车间纯蒸汽系统√高……建库用设备是否影响产品质量……脉动高压灭菌柜√高高速离心机√高生物反应器√高……设施设备验证管理流程用户需求说明URS设计说明FS/DS设计确认DQ开发安装确认IQ运行确认OQ性能确认PQ注：梳理出关键设备，首次验证按上述流程进行；再确认通过评估来确认受影响的性能指标满足需求，可允许设施设备投入使用。32各要素梳理-设施设备设施设备清单调试（FAT/SAT）各要素梳理-文件清单建库用文件拟定完成初稿时间负责人各岗位职责说明书2023/04/03XX细胞库制备规程2023/04/03XX细胞库质量标准2023/04/03XX细胞复苏SOP和记录2023/04/03XX细胞传代培养SOP和记录2023/04/03XX细胞冻存SOP和记录2023/04/03XX相关溶液配制SOP和记录2023/04/03XX相关设备操作使用SOP和记录2023/04/03XX检验方法操作SOP和记录2023/04/03XX相关管理规程和小记录2023/04/03XX……文件管理流程起草审核批准**培训生效发放由文件起草人或其主管决定参加会审人员新文件在生效之日前各使用部门负责人必须组织培训并记录修订新版本文件生效同时，旧版本文件同时失效，失效的旧版本文件原件长期保存，复印件收回销毁33细胞库和毒种库的档案管理34细胞库/毒种库应在购买或筛选构建时开始收集、接收、整理相关来源资料，建立档案，并保持对档案的持续更新，档案内容包括但不限于：细胞库/毒种库来源证明资料、历史来源资料（细胞株/毒株筛选构建资料）；历史检测合格资料、基因序列背景资料、遗传稳定性资料；细胞株/毒株的采购、运输、入境等环节的证明资料；传代谱系图；细胞库/毒种库制检规程、操作规程、质量标准；细胞库/毒种库制备记录；细胞库/毒种库检定记录、传代稳定性、遗传稳定性检查资料；保存、领用、销毁台账；3、细胞库和毒种库放行管理35细胞库和毒种库的检验管理2020

年

7

月国家药监局发布的《生物制品注册分类及申报资料要求的通告（2020

年第43

号）》规定，在3.2.S.2.3提供生产用菌（毒）种种子批和生产用细胞基质种子批中检院或相关药品监管机构认可的第三方检定机构复核检定报告；《中华人民共和国药典（2020

版三部）》中的生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制章节、生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制章节、生物制品病毒安全性控制章节等分别对生物制品的检定