DB15∕T 4111-2025 洋葱、大蒜病毒RT-PCR检测技术规程

ICS65.020.01

CCSB04

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T4111—2025

洋葱、大蒜病毒RT-PCR检测技术规程

CodeofpracticeforRT-PCRdetectionofvirusesinonionandgarlic

2025-07-10发布2025-08-10实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T4111—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC25）归口。

本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古中天现代农牧业开

发有限责任公司、呼和浩特市农牧技术推广中心、乌拉特前旗农牧和科技局。

本文件主要起草人：李正男、张磊、孙平平、张称心、郑莎、徐文俊、苏敏、韩静宇、曹海、云梅、

赵栓、郭孟泽。

I

DB15/T4111—2025

洋葱、大蒜病毒鉴定技术规程

1范围

本文件规定了洋葱、大蒜病毒检测中的术语和定义、检测对象、抽样、取样、检测方法和判定规则

等内容。

本文件适用于洋葱、大蒜的病毒检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T34265Sanger法测序技术指南

GB/T40974核酸样本质量评价方法

SN/T2497.21进出口危险化学品安全试验方法第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

RNA病毒RNAviruses

核糖核酸病毒，其遗传物质为RNA。

反转录Reversetranscription（RT）

以RNA为模板，逆转录酶催化合成DNA的过程。

互补DNAComplementaryDNA（cDNA）

由逆转录酶催化合成的、与RNA模板互补的DNA。

聚合酶链式反应Polymerasechainreaction（PCR）

利用DNA聚合酶，对DNA或cDNA模板的特定区域进行体外扩增的技术。反应混合物通常由DNA聚合酶、

脱氧核苷三磷酸、引物和缓冲液组成，反应过程主要包括变性、退火和延伸三个步骤。

1

DB15/T4111—2025

引物primers

人工合成的具有一定长度的单链DNA分子，与DNA模板链的特定区域互补，其3’末端在PCR过程中作

为复制延伸的起始位点。

4检测对象

主要洋葱RNA病毒

黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）。

韭葱黄条病毒（Leekyellowstripevirus，LYSV）。

洋葱黄矮病毒（Onionyellowdwarfvirus，OYDV）。

胡葱黄条病毒（Shallotyellowstripevirus，SYSV）。

主要大蒜RNA病毒

黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）。

大蒜病毒A（GarlicvirusA，GarV-A）。

大蒜病毒B（GarlicvirusB，GarV-B）。

大蒜病毒D（GarlicvirusD，GarV-D）。

大蒜病毒E（GarlicvirusE，GarV-E）。

大蒜病毒X（GarlicvirusX，GarV-X）。

大蒜潜隐病毒（Garliclatentvirus，GLV）。

韭葱黄条病毒（Leekyellowstripevirus，LYSV）。

洋葱黄矮病毒（Onionyellowdwarfvirus，OYDV）。

5取样

取样方法

采用5点法抽样。

种植面积小于667m2（含667m2），抽检100株。种植面积为667m2到6670m2（含6670m2），首个

667m2抽100株，之后每增加667m2增检50株。超过6670m2，前6670m2按上述方法抽样，之后每增加667

m2增检20株。

6取样方法

对样方内的所有洋葱、大蒜进行采样。折取地上部的叶、花苔等作为检测样品，折取的样品应立即

检测或液氮速冻后置于-80℃超低温保存箱保存。采样点距离检测点较远时，应将洋葱、大蒜整株挖出，

运到检测点。

7检测方法

样品核酸提取

2

DB15/T4111—2025

选择市售的用于提取含有多糖多酚材料RNA的试剂盒，按照试剂盒自带的说明书进行操作。核酸质

量评价按照GB/T40974执行。

反转录

以提取的质量合格的总RNA为模板，选择市售的具有基因组DNA去除功能的反转录试剂盒进行反转

录，合成cDNA。反应体系和反应程序按照试剂盒自带的说明书进行设置。

PCR扩增

7.3.1PCR反应体系

市售产品通常为预混液或单品，根据所选产品提供的说明书，进行PCR反应混合物配制，并按说明

书指示加入cDNA或DNA模板以及病毒检测引物。各种病毒的特异性检测引物见表1。

表1洋葱、大蒜病毒的特异性检测引物

目标DNA片段大小

病毒名称引物名称引物序列/（5’→3’方向）寄主植物

/（bp）

CMVCMV-FaGTTTATTTACAAGAGCGTACGG650洋葱、大蒜

CMVCMV-RbGGTTCGAARRWATAACCGGG650洋葱、大蒜

GarV-AGarV-A-FCCATATGAACAATCCTGTTGATCC756大蒜

GarV-AGarV-A-RGGGATCCTTAGAACGTGATCATTGGAG756大蒜

GarV-BGarV-B-FCCATATGGGAGACAGGTCACAAGG735大蒜

GarV-BGarV-B-RGGGATCCCTAAAATGTGAGCATGAGCGG735大蒜

GarV-DGarV-D-FCCATATGAATGAACAAGGAAACAC753大蒜

GarV-DGarV-D-RGGGATCCTCAGAATGTGATCATTGGAGG753大蒜

GarV-EGarV-E-FCCATATGAACGACCCCACGAAC759大蒜

GarV-EGarV-E-RCGGATCCTTAGAATGTTATCATTGGGGG759大蒜

GarV-XGarV-X-FATGGGYGATCGGAACCAAGGA732大蒜

GarV-XGarV-X-RTYAGAATGTGAGCATAAGGGG732大蒜

GLVGLV-FGTGGTNTGGAATTAC308大蒜

GLVGLV-RCAACATCGATTYTCTC308大蒜

LYSVLYSV-FTCACTGCATATGCGCACCAT1020洋葱、大蒜

LYSVLYSV-RGCACCATACAGTGAATTGAG1020洋葱、大蒜

OYDVOYDV-FGTTACCATCCAGGCCAAACA225洋葱、大蒜

OYDVOYDV-RAGTGATGCAGCTGAAGCATA225洋葱、大蒜

SYSVSYSV-FCACCNTAYATAGCRGARACAGCTCT605洋葱、大蒜

SYSVSYSV-RACTGAAATGCGCCATTATYTGYCTA605洋葱、大蒜

aF表示上游引物。

bR表示下游引物。

7.3.2PCR反应程序

95℃预变性2min。35个反应循环：95℃变性20s；退火20s，退火温度按引物合成报告设置，

两个引物退火温度不一致时，取较低温度；72℃延伸，延伸时间根据所选产品说明书提供的参数进行

计算。最后，72℃终延伸5min。

3

DB15/T4111—2025

琼脂糖凝胶电泳检测

7.4.1琼脂糖凝胶制备

用Tris-乙酸缓冲液溶解琼脂糖，制备质量体积比为1%的琼脂糖凝胶。琼脂糖凝胶的制备按照SN/T

2497.21执行。

7.4.2电泳检测

用Tris-乙酸缓冲液，在水平板电泳槽中进行电泳。上样、电泳按照SN/T2497.21执行。电泳结束

时，凝胶置于紫外灯或凝胶成像系统进行观测和拍照，获取的图片用于结果判定。

8结果判定

异常结果

根据琼脂糖凝胶电泳图，与图中DNA相对分子质量标准品相比，从阴性对照样品扩增到了预期大小

的DNA片段，或从阴性对