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文档简介
ICS13.020
CCSZ10
21
辽宁省地方标准
DB21/T4134—2025
水质喹诺酮类、磺胺类、β-内酰胺类和
氯霉素类抗生素的测定
直接进样/液相色谱-质谱法
Waterquality—DeterminationofQuinolones,Sulfonamides,
Beta-lactamandChloramphenicolAntibiotics—
Directinjection/LiquidChromatography-MassSpectrometry
2025-04-30发布2025-05-30实施
辽宁省市场监督管理局发布
DB21/T4134—2025
目次
前言..................................................................................II
1适用范围.............................................................................1
2规范性引用文件.......................................................................1
3术语和定义...........................................................................1
4方法原理.............................................................................1
5干扰与消除...........................................................................1
6试剂和材料...........................................................................2
7仪器和设备...........................................................................2
8样品.................................................................................3
9分析步骤.............................................................................3
10结果计算与表示......................................................................6
11准确度..............................................................................7
12质量保证和质量控制..................................................................8
13废物处置............................................................................8
附录A(规范性)方法的检出限和测定下限..................................................9
附录B(资料性)方法的准确度...........................................................10
I
DB21/T4134—2025
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件为首次发布。
本文件由辽宁省生态环境厅提出并归口。
本文件起草单位:辽宁省大连生态环境监测中心。
本文件主要起草人:付晓燕、李振国、张旭鸿、包艳英、刘畅、张哲、刘莲莲、苑芷茜、杨硕、刘
顺、张帆、郑冬、高冬婧、杨惠、彭晓、刘雅、徐洁、孙震、曹姗姗、陈建宇。
本文件发布实施后,任何单位和个人如有问题和意见建议,均可以通过来电和来函等方式进行反馈,
我们将及时答复并认真处理,根据实际情况依法进行评估及复审。
归口管理部门通讯地址:辽宁省生态环境厅(沈阳市浑南区双园路30甲),联系电话
文件起草单位通讯地址:辽宁省大连生态环境监测中心(辽宁省大连市沙河口区连山街58号),联
系电话
II
DB21/T4134—2025
水质喹诺酮类、磺胺类、β-内酰胺类和
氯霉素类抗生素的测定直接进样/液相色谱-质谱法
警告:实验中所使用的标准物质和有机溶剂为有毒有害物质,内标物具有放射性,实验操作时应按
要求佩戴防护器具,避免吸入呼吸道或接触皮肤和衣物,溶液配制过程应在通风橱内进行。
1适用范围
本文件规定了测定水中喹诺酮类、磺胺类、β-内酰胺类和氯霉素类4大类13种抗生素的直接进样
/液相色谱-质谱法。
本文件适用于地表水、地下水和生活饮用水中诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、培氟沙
星、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、阿莫西林、氯霉素和氟
苯尼考13种抗生素的测定。
当进样体积为50.0μl时,4大类13种目标化合物的方法检出限为0.005μg/L~0.009μg/L,
测定下限为0.020μg/L~0.036μg/L。
2规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用标准,仅注日期的版本适用于本标准。
凡是未注日期的引用标准,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。其他文件被新文件废止、
修改、修订的,新文件适用于本标准。
GB/T5750.2生活饮用水标准检验方法第2部分:水样的采集与保存
GB/T14581水质湖泊和水库采样技术指导
HJ91.2地表水环境质量监测技术规范
HJ164地下水环境监测技术规范
HJ493水质样品的保存和管理技术规定
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4方法原理
水样经滤膜过滤后,用液相色谱分离,串联质谱多反应监测(MRM)模式下测定。根据保留时间和
特征离子定性,内标法定量。
5干扰与消除
5.1为消除样品中的金属离子干扰,采集和保存时加入EDTA-2Na。
5.2样品颜色较深等基体干扰较强时,可通过适当减少取样量、增加稀释倍数等方式降低干扰。
5.3为消除样品中的余氯等氧化性物质干扰,可加入抗坏血酸予以消除。
1
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6试剂和材料
6.1除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂,实验用水为不含目标化合物的纯水。
6.2乙腈(CH3CN):色谱纯。
6.3抗坏血酸(C6H8O6)。
6.4甲酸(HCOOH):色谱纯。
6.5甲酸水溶液:1+1000(V/V)。
移取1.0ml甲酸(6.4)加入1L实验用水中,混匀。
6.6乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na):优级纯。
6.7目标化合物标准物质
阿莫西林、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、诺氟沙星、氧氟沙星、磺胺二甲嘧啶、环丙沙星、培氟沙星、
恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶、氟苯尼考、磺胺甲恶唑、氯霉素标准物质:纯度≥99%。
6.8标准溶液
6.8.1目标化合物标准贮备液:ρ=100mg/L
准确称取适量的每种目标化合物标准物质(6.7),用乙腈(6.2)配成100.0mg/L的标准贮备液,
贮备液在4℃冷藏、密封、避光保存。阿莫西林标准贮备液的保存期限为5d,环丙沙星、培氟沙星、
恩诺沙星、氟苯尼考、氯霉素标准贮备液的保存期限为10d,诺氟沙星、氧氟沙星标准贮备液的保存期
限为15d,磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑标准贮备液的保存
期限为20d。或直接购买有证标准溶液,其保存条件参照产品说明。
6.8.2目标化合物标准使用液:ρ=1.00mg/L
将目标化合物标准贮备溶液(6.8.1)用甲酸水溶液(6.5)稀释至1.00mg/L,现用现配。
6.9内标物质
13
6.9.1磺胺甲基嘧啶-C6(磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑的
内标物)、环丙沙星-D8(诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、恩诺沙星的内标物)、阿莫西
林-D4(阿莫西林的内标物)、氯霉素-D5(氟苯尼考、氯霉素的内标物):纯度≥99%。
6.9.2内标贮备液:ρ=100mg/L
准确称取适量的内标物质(6.9),用乙腈(6.2)配成100.0mg/L的标准贮备液,贮备液在4℃冷
藏、密封、避光保存。或直接购买有证标准溶液,其保存条件参照产品说明。
6.9.3内标使用液:ρ=10.0μg/L
将内标贮备溶液(6.9.1)用甲酸水溶液(6.5)稀释至10.0μg/L,现用现配。
6.10针式过滤器:1~5ml,滤膜孔径0.22μm,亲水性聚四氟乙烯(PTFE)、玻璃纤维或其他等效
材质。
6.11氮气:纯度≥99.99%。
7仪器和设备
7.1高效液相色谱/三重四极杆质谱仪:高效液相色谱仪具备大体积进样器,具备梯度洗脱功能;三重
四极杆质谱仪配有电喷雾离子化源(ESI),具备多反应监测(MRM)功能。
2
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7.2色谱柱:固定相填料为五氟苯基F5,粒径3.0μm,柱长100mm,内径2.6mm,或其他等效色谱柱。
7.3进样瓶:棕色玻璃瓶,2ml。
7.4采样瓶:500ml棕色玻璃瓶,螺旋盖(具聚四氟乙烯涂层的密封垫)。
7.5微量注射器:10μl、50μl、100μl、1ml。
7.6一般实验室常用仪器和设备。
8样品
8.1样品采集、运输与保存
按照GB/T5750.2、GB/T14581、HJ91.2、HJ164和HJ493的相关规定进行样品的采集和运输。
采集样品时,向采样瓶(7.4)中加入250mgEDTA-2Na(6.6),500μl甲酸(6.4),50mg抗坏
血酸(6.3),然后采集样品至满瓶,拧紧螺旋盖密封,摇匀。水样4℃以下冷藏、密封、避光保存,
48h内完成分析。
采集样品时应同时采集全程序空白样品,随实际样品一起保存并运输至实验室。
8.2试样制备
样品恢复至室温,混匀,取适量样品经针式过滤器(6.10)过滤,弃去至少1ml初滤液后,取1.0ml
置于棕色样品瓶(7.3)中,加入10.0μl内标使用液(6.9.2),混匀待测。
8.3空白试样的制备
以实验用水代替样品,按照与试样的制备(8.2)相同的步骤制备实验室空白试样。
9分析步骤
9.1仪器参考条件
9.1.1液相色谱仪参考条件
流动相:流动相A为乙腈(6.2),流动相B为甲酸水溶液(6.5),线性梯度洗脱程序见表1;
柱温:40℃;
进样体积:50μl;
流速:0.4ml/min。
表1液相色谱流动相梯度洗脱程序
时间(min)流动相A(%)流动相B(%)
010.090.0
0.510.090.0
5.095.05.0
6.095.05.0
6.110.090.0
7.510.090.0
9.1.2质谱仪参考条件
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正/负离子模式(ESI+/ESI-);
离子喷雾电压:5500/-4500V;
离子源温度:550℃;
检测方式:多反应监测(MRM);
气帘气(CUR)压力:35.0kPa(5psi);
喷雾气(GS1)压力:55.0kPa(8psi);
辅助加热气(GS2)压力:35.0kPa(5psi),多反应监测条件见表2。
表2目标化合物的多反应监测条件
类别化合物母离子子离子去簇电压DP/V碰撞能量CE/V
诺氟沙星320.1302.0*/276.18031/26
环丙沙星332.1245.1*/288.18033/25
喹诺酮类
环丙沙星-D8340.2296.18025
氧氟沙星362.2318.1*/261.18026/38
表2目标化合物的多反应监测条件(续)
类别化合物母离子子离子去簇电压DP/V碰撞能量CE/V
恩诺沙星360.0316.1*/245.18025/35
喹诺酮类
培氟沙星334.1316.1*/290.28027/25
磺胺嘧啶251.1156.0*/92.08022/38
磺胺甲基嘧啶265.2156.1*/172.18023/23
磺胺甲基嘧啶-13C271.0162.08025
磺胺类6
磺胺二甲嘧啶279.1186.1*/156.08023/27
磺胺间甲氧嘧啶281.1156.0*/92.14025/46
磺胺甲恶唑254.1156.0*/108.04023/31
阿莫西林366.2208.0*/349.07017/11
β-内酰胺类
阿莫西林-D4370.2113.97024
氯霉素320.9152.0*/257.060-24/-15
氯霉素类氯霉素-D5325.9157.060-22
氟苯尼考356.0185.0*/336.075-26/-13
注:*为定量离子
9.1.3仪器调谐
按照仪器使用说明书在规定时间和频次内校正液相色谱/三重四极杆质谱仪的质量数和分辨率,以
确保仪器处于最佳测试状态。
9.2校准
9.2.1标准曲线的建立
取一定量目标化合物标准使用液(6.8.2)于甲酸水溶液(6.5)中,制备至少5个浓度点的标准系
列,诺氟沙星和环丙沙星的质量浓度分别为0.040μg/L、0.100μg/L、0.200μg/L、0.500μg/L、
1.00μg/L,其他11种目标化合物的质量浓度分别为0.020μg/L、0.050μg/L、0.100μg/L、0.200
μg/L、0.500μg/L、1.00μg/L。每毫升标准系列溶液中加入10.0μl内标使用液(6.9.2),贮存
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在棕色样品瓶(7.3)中。
将标准系列溶液按浓度由低到高的顺序依次进样,以标准系列溶液中目标化合物的质量浓度为横坐
标,目标化合物的峰面积与内标物的峰面积比值和内标物浓度的乘积为纵坐标,绘制标准曲线。或者按
照公式(1)和(2)计算目标化合物的平均相对响应因子RRF。
Airis
RRFi=´..................................................................................(1)
Aisri
n
åRRFi
i=1
RRF=.................................................................................(2)
n
式中:
RRFi——标准系列中第i点目标化合物的相对响应因子,无量纲;
Ai——标准系列中第i点目标化合物定量离子的峰面积;
Ais——标准系列中第i点目标化合物相对应内标定量离子的峰面积;
ρis——标准系列中目标化合物对应内标的质量浓度,μg/L;
ρi——标准系列中第i点目标化合物的质量浓度,μg/L;
RRF——目标物的平均相对响应因子,无量纲;
n——标准系列点数。
9.2.2标准参考谱图
在本文件推荐的仪器参考条件下,阳离子模式目标化合物的总离子色谱图见图1,阴离子模式目标
化合物的总离子色谱图见图2。目标物的质量浓度为1.0μg/L,内标物的质量浓度为0.1μg/L。
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1——阿莫西林;2——阿莫西林-D4;3——磺胺嘧啶;4——磺胺甲基嘧啶;5——磺胺甲基嘧啶-C6;
6——诺氟沙星;7——氧氟沙星;8——磺胺二甲嘧啶;9——环丙沙星-D8;10——环丙沙星;11——培氟沙星;
12——恩诺沙星;13——磺胺间甲氧嘧啶;14——磺胺甲恶唑。
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图1正离子模式11种目标化合物和3种内标物的总离子色谱图
1——氟苯尼考;2——氯霉素-D5;3——氯霉素。
图2负离子模式2种目标化合物和1种内标物的总离子色谱图
9.3测定
9.3.1试样测定
按照与标准曲线的建立(9.2.1)相同的仪器测定条件进行试样(8.2)的测定。
注:若样品中目标化合物浓度过高,超出标准曲线范围,应采用甲酸水溶液(6.5)稀释后再进行测定。
9.3.2空白试验
按照与试样测定(9.3.1)相同的仪器测定条件进行空白试样(8.3)及全程序空白试样的测定。
10结果计算与表示
10.1定性分析
按照表2中确定的目标化合物的母离子和子离子进行检测,在相同实验条件下,试样中目标化合物
的保留时间与标准样品中目标化合物的保留时间相对偏差的绝对值应小于2.5%;且待测样品中定性离子
的相对丰度(Ksam)与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子相对丰度(Kstd)进行比较,所得偏差在表3
规定的最大允许偏差范围内,则可判定为样品中存在相应种类的目标化合物。
A2
Ksam=×100%...................................................................................(.3)
A1
式中:
Ksam——样品中目标化合物定性离子的相对丰度;
A2——样品中目标化合物定性离子的峰面积;
A1——样品中目标化合物定量离子的峰面积。
Astd2
Kstd=×100%...................................................................................(.4)
Astd1
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式中:
Kstd——标准样品中目标化合物定性离子的相对丰度;
Astd2——标准样品中目标化合物定性离子的峰面积;
Astd1——标准样品中目标化合物定量离子的峰面积。
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
Kstd(%)Ksam相对于Kstd的最大允许偏差(%)
Kstd>5020
20<Kstd≤5025
10<Kstd≤2030
Kstd≤1050
10.2结果计算´f
10.2.1标准曲线法
当采用标准曲线法进行定量时,样品中目标化合物的质量浓度ρx按公式(5)计算:
rx=ri´f...................................................................................(.5)
式中:
ρx——样品中目标化合物的质量浓度,μg/L;
ρi——计算目标化合物的峰面积与对应内标物的峰面积比值和对应内标物浓度的乘积后,由标准
曲线(9.2.1)所得试样中目标化合物的质量浓度,μg/L;
f——稀释倍数。
10.2.2平均相对响应因子法
当采用平均相对响应因子法进行定量时,样品中目标化合物的质量浓度ρx按公式(6)计算。
Ax´ris
rx=...................................................................(.6)
Ais´RRF
式中:
ρx——样品中目标化合物的质量浓度,μg/L;
Ax——样品中目标化合物的峰面积;
ρis——样品中目标化合物对应内标物的质量浓度,μg/L;
Ais——样品中目标化合物对应内标物的峰面积;
f——稀释倍数;
RRF——由公式(2)所得目标化合物的平均相对响应因子,无量纲。
10.3结果表示
当测定结果小于1.00μg/L时,测定结果小数位数与方法检出限保持一致;当测定结果大于1.00μg/L
时,保留3位有效数字。
检出限详见附录A中表A.1。
11准确度
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11.1精密度
3家有资质的实验室分别对4类目标化合物的加标浓度除诺氟沙星、环丙沙星为0.040μg/L、0.100
μg/L和0.500μg/L外,其他均为0.020μg/L、0.100μg/L和0.500μg/L的地表水和地下水进行了6
次重复测定,实验室内相对标准偏差为3.0%~11%,实验室间相对标准偏差为0.58%~14%,重复性限为
0.003μg/L~0.121μg/L,再现性限为0.003μg/L~0.121μg/L。
具体见附录B中表B.1。
11.2正确度
3家有资质的实验室分别对4类目标化合物的加标浓度除诺氟沙星、环丙沙星为0.040μg/L、0.100
μg/L和0.500μg/L外,其他均为0.020μg/L、0.100μg/L和0.500μg/L的地表水和地下水进行了6
次重复测定,加标回收率范围为83.0%~117%。
具体见附录B中表B.2。
12质量保证和质量控制
12.1空白试验
每20个样品或每批次样品(少于20个)至少做1个实验室空白、1个全程序空白,空白试样值不得超
过方法的检出限。
12.2校准
标准曲线的相关系数r≥0.995,或相对响应因子(RRF)的相对标准偏差应≤20%,否则应重新绘制
标准曲线;每批样品(≤20个)应测定1个曲线中间校核点,其测定结果与标准曲线相应点浓度的相对
误差应在±20%以内。
12.3精密度控制
每20个样品或每批次样品(少于20个)应至少测定1个平行样,平行样的相对偏差应≤40%。
12.4正确度控制
每20个样品或每批次样品(大于20个)应至少测定5%的基体加标样品,样品数量少于20个时,应至
少测定1个基体加标样品,加标回收率应为60%~140%。
13废物处置
实验过程中产生的废液和废物应分类收集、集中保管,并做好相应标识,依法委托有资质的单位进
行处置。
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附录A
(规范性)
方法的检出限和测定下限
方法的检出限和测定下限见表A.1。
表A.1方法的检出限和测定下限
检出限测定下限
序号目标物类别目标物名称英文名称CASNo.
(μg/L)(μg/L)
1诺氟沙星Norfloxacin70458-96-70.0080.032
2环丙沙星Ciprofloxacin85721-33-10.0090.036
3喹诺酮类氧氟沙星Ofloxacin82419-36-10.0050.020
4恩诺沙星Enrofloxacin93106-60-60.0050.020
5培氟沙星Pefloxacin70458-92-30.0050.020
6磺胺嘧啶Sulfadiazine68-35-90.0050.020
7磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine127-79-70.0050.020
8磺胺类磺胺二甲嘧啶Sulfamethazine57-68-10.0050.020
9磺胺间甲氧嘧啶Sulfamonomethoxine1220-83-30.0050.020
10磺胺甲恶唑Sulfamethoxazole723-46-60.0050.020
β-内酰胺
11阿莫西林Amoxicillin26787-78-00.0050.020
类
12氯霉素Chloramphenicol56-75-70.0050.020
氯霉素类
13氟苯尼考Florfenicol73231-34-20.0050.020
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附录B
(资料性)
方法的准确度
三家有资质的实验室分别对3种不同浓度的地表水和地下水样品进行了测定。精密度和正确度结果见
表B.1和表B.2。
表B.1方法的精密度
样精密度统计结果
品目标物
加标浓度实验室内实验室间重复性限再现性限
类类别目标物名称
型(μg/L)相对标准偏差(%)相对标准偏差(%)(μg/L)(μg/L)
0.0405.0~7.51.50.0070.007
诺氟沙星0.1006.0~6.10.580.0170.017
0.5008.0~8.90.890.1190.119
0.0404.8~7.74.30.0080.008
环丙沙星0.1005.2~8.63.80.0190.019
0.5005.7~6.41.10.0840.084
0.0205.0~8.78.20.0040.004
喹诺酮
氧氟沙星0.1004.2~7.43.10.0150.015
类
0.5006.3~7.72.80.0960.096
0.0205.0~9.52.80.0050.005
恩诺沙星0.1005.1~6.54.30.0160.016
0.5005.8~6.61.50.0880.088
0.0204.8~5.02.80.0030.003
地
培氟沙星0.1003.1~4.12.20.0090.009
表
0.5005.1~5.72.00.0780.078
水
0.0205.3~9.52.70.0050.005
磺胺嘧啶0.1006.7~9.97.10.0230.023
0.5005.1~6.71.80.0850.085
0.0205.0~5.32.90.0030.003
磺胺甲基嘧啶0.1007.9~9.71.10.0250.025
0.5004.9~5.74.10.0790.079
磺胺类0.0204.3~9.57.20.0340.034
磺胺二甲嘧啶0.1008.5~9.23.90.0250.025
0.5004.5~4.92.60.0690.069
0.0204.3~8.32.50.0040.004
磺胺间甲氧嘧
0.1005.9~9.81.70.0240.024
啶
0.5004.5~5.14.10.0660.066
磺胺甲恶唑0.0205.6~10.08.30.0040.004
2
DB21/T4134—2025
表B.1方法的精密度(续)
样精密度统计结果
品目标物
类类别加标浓度实验室内实验室间重复性限再现性限
目标物名称
型(μg/L)相对标准偏差(%)相对标准偏差(%)(μg/L)(μg/L)
0.1004.8~8.21.20.0170.017
磺胺类磺胺甲恶唑
0.5003.6~6.04.10.0590.059
0.0204.8~9.5120.0040.004
β-内酰
阿莫西林0.1005.7~5.91.50.0170.017
胺类
地0.5006.5~7.82.20.0940.094
表0.0205.3~9.57.90.0040.004
水氯霉素0.1006.3~8.22.80.0200.020
氯霉素0.5006.6~8.22.60.0970.097
类0.0204.3~10.0140.0060.006
氟苯尼考0.1004.8~7.42.90.0170.017
0.5008.2~8.63.10.1210.121
0.0402.5~7.71.50.0060.006
诺氟沙星0.1007.4~8.82.50.0210.021
0.5007.9~9.32.60.1170.117
0.0402.4~7.94.40.0050.005
环丙沙星0.1007.5~9.36.10.0230.023
0.5003.0~4.61.00.0590.059
0.0204.8~5.02.80.0030.003
喹诺酮
氧氟沙星0.1007.9~9.53.10.0240.024
类
0.5003.9~5.01.80.0640.064
0.0205.3~10.03.00.0040.004
恩诺沙星0.1007.8~8.44.20.0220.022
地
0.5004.9~7.42.30.0840.084
下
0.0205.0~5.33.00.0030.003
水
培氟沙星0.1004.6~9.94.00.0190.019
0.5007.0~8.63.90.0960.096
0.0205.6~10.07.80.0050.005
磺胺嘧啶0.1004.9~8.55.30.0180.018
0.5005.1~9.63.90.1110.111
0.0205.6~10.0100.0050.005
磺胺类磺胺甲基嘧啶0.1004.8~8.16.60.0180.018
0.5003.7~8.65.60.0850.085
0.0204.5~10.0100.0040.004
磺胺二甲嘧啶0.1005.9~9.64.80.0200.020
0.5005.0~6.12.90.0800.080
3
DB21/T4134—2025
表B.1方法的精密度(续)
样精密度统计结果
品目标物
加标浓度实验室内实验室间重复性限再现性限
类类别目标物名称
型(μg/L)相对标准偏差(%)相对标准偏差(%)(μg/L)(μg/L)
0.0204.8~10.04.80.0050.005
磺胺间甲氧嘧
0.1005.9~8.58.50.0190.019
啶
0.5005.7~8.01.20.0920.092
磺胺类
0.0205.6~11.13.30.0050.005
磺胺甲恶唑0.1004.8~8.02.00.0150.015
0.5004.3~6.84.60.0690.069
地0.0204.8~10.0110.0040.004
β-内酰
下阿莫西林0.1
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