DB13∕T 6044-2025 小麦抗茎基腐病鉴定技术规程

ICS65.020

CCSB16

13

河北省地方标准

DB13/T6044—2025

小麦抗茎基腐病鉴定技术规程

2025-04-03发布2025-05-03实施

河北省市场监督管理局发布

DB13/T6044—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

本文件由河北省农业农村厅提出。

本文件起草单位：河北农业大学植物保护学院、中国农业大学农学院、河北省农林科学院谷子

研究所、河北省农林科学院植物保护研究所、河北省植保植检总站。

本文件起草人：齐永志、马骏、董志平、王永芳、王烨、甄文超、王逍冬、吴玉星、耿立格、郄

彦敏、赵立强、勾建军、李娜、崔彦、刘娜、班胜聪。

I

DB13/T6044—2025

小麦抗茎基腐病鉴定技术规程

1范围

本文件规定了小麦抗茎基腐病室内苗期和田间成株期鉴定的接种体制备、抗病性鉴定方法、病

情调查分级标准和抗病性评价的技术要求。

本文件适用于小麦对茎基腐病的室内苗期和田间成株期抗病性鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用

文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）

适用于本文件。

DB13/T5888保护性耕作条件下小麦茎基腐病绿色防控技术规程。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

白穗whitehead

由假禾谷镰刀菌侵染引起的茎基部褐变腐烂造成的小麦枯死穗，呈整茎干枯状，且拔起不带根。

4接种体的制备

病原物获取

选择有代表性、致病力强的假禾谷镰刀菌菌株。病菌分离鉴定、致病性及周年侵染循环见附录A。

分生孢子悬浮液接种体的制备

将病菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂（Potatodextroseagar，PDA；见附录B.1）固体平板培养基

上活化（9cm培养皿），25℃条件下，黑暗培养5～7d；用无菌打孔器打成直径为0.5cm的菌饼，

取10～15枚菌饼放入含有150mL羧甲基纤维素钠液体培养基（CarboxymethylCellulose，CMC；见

附录B.2）的三角瓶内，25℃黑暗振荡（180r/min）培养3～5d后，4层纱布过滤，于显微镜下观察，

用无菌水或去离子水调节孢子悬浮液浓度至1.0×106个孢子/mL，然后加入0.5%的吐温20，混匀，

4℃保存，备用。

麦粒接种体的制备

将小麦籽粒用水浸泡10～12h，取吸胀水的麦粒300g，放入聚乙烯塑料袋（长×宽×高=36cm×10

cm×8cm）或500mL三角瓶中，置于灭菌锅中121℃灭菌30min，冷却后备用。

接种时，将装有无菌冷却麦粒的聚乙烯塑料袋或三角瓶置于超净工作台中，表面喷洒75%酒精，

打开紫外灯表面消毒20min。将在PDA平板上（9cm培养皿）黑暗、25℃条件下培养7d的菌株，用

无菌打孔器打成直径为0.5cm的菌饼，接入灭菌好的麦粒上，每个聚乙烯塑料袋或三角瓶接入20枚

菌饼。黑暗、25℃条件下培养，每天轻轻摇晃聚乙烯塑料袋或三角瓶，以保证菌丝长势均匀。培养

20d后待菌丝长满麦粒表面即可，放在4℃冰箱中冷藏备用。田间使用前，将长满菌丝的麦粒倒出，

在通风背光处晾干，用小型粉碎机粉碎成直径为2mm左右的颗粒。

5抗病性鉴定

室内苗期抗病性鉴定

1

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选取籽粒饱满、大小一致的小麦种子，75%酒精消毒2min，无菌水冲洗3遍。消毒后的小麦种子

在培养皿中25℃催芽2～3d，待种子出芽5mm后，将种子在以上备好的1.0×106个孢子/mL的孢子

悬浮液接种体中浸泡1min，播种至规格为5×10的穴盘中，每穴2粒，每个品种播种10粒，每盘可以

播种10个品种。重复3次。温室自然光照，昼夜温度分别设定为25±2℃和20±2℃。采用底部灌水方式

浇水。以‘Sunco’和‘新麦26’分别为抗病、感病对照，播种5周以后，当感病对照严重发病时进行

调查。

田间成株期抗病性鉴定

在小麦茎基腐病常发区，选择地势平坦、土壤肥沃程度居中的地块建立田间鉴定病圃，周围留2

m以上的保护行。利用人工接种方法，将已粉碎的麦粒接种体按15g/m接种量与细沙或细土（不能攥

成团）按照体积比1∶1比例混合均匀成菌土。每个品种种植4行，每行1m，播种100粒种子。重复3

次。先开沟，然后撒播种子，再均匀覆盖菌土，最后埋土3～4cm。以‘Sunco’和‘新麦26’分别为

抗病、感病对照，每20个品种设1组对照。在乳熟末期进行调查。

田间管理：均匀施足底肥，做好土地平整；播种时间与当地大田生产一致，或适当早播；足墒

播种，及时灌溉过冬水和拔节孕穗水，足量灌溉，保持均匀，扬花期后不再浇水；鉴定圃不使用任

何杀菌剂。

6病情调查

室内苗期病情调查

室内种植5周后，待感病对照充分发病时，调查记录待鉴品种单株发病程度。每个品种调查10株。

发病严重度级值分级标准见表1，按照附录C.1记录调查结果。按照如下公式（1）计算病情指数。

表1小麦茎基腐病苗期发病严重度分级标准

严重度级值病害发生程度严重度级值病害发生程度

第1叶鞘褐枯占叶鞘长度

0级无症状3级

1/2以上

胚芽鞘发生褐枯或第1叶鞘褐枯小于叶鞘1/4长

1级4级第2叶鞘有明显褐枯

度

第3叶鞘有明显褐枯或全株

2级第1叶鞘褐枯占叶鞘长度1/4～1/25级

枯死

DI=100×∑（Si×Fi）/（S×N）…………（1）

式中：

DI——病情指数；

Si——各严重度级值；

Fi——各严重度的病株数；

S——严重度最高级值；

N——调查总株数。

田间成株期病情调查

在小麦乳熟末期，调查每个品种中间2行的白穗率，重复3次。要求待鉴品种1d内全部完成调查。

按照附录C.2记录调查结果，按照如下公式（2）计算相对白穗率。

RWEP=WEPic/WEPcc………………（2）

2

DB13/T6044—2025

式中：

RWEP——相对白穗率；

WEPic——待鉴品种的白穗率；

WEPcc——感病对照品种的白穗率。

若鉴定圃发病整体较轻，利用白穗率难以区分抗病材料时，可利用白穗率淘汰部分白穗率高的

感病材料，其余的再按照成株期发生程度进行调查。小麦茎基腐病成株期发病严重度级值分级标准

见表2。从中间2行随机取样，每行调查20个茎，共调查40个茎。调查时拨去叶鞘记录各茎病级，要

求1d内调查完毕，或所有待鉴定品种一起取样，当天调查不完放在冷库。按照附录C.3记录调查结

果。按照如上公式（1）计算病情指数，按照如下公式（3）计算相对病情指数。

表2小麦茎基腐病成株期严重度分级标准

严重度级值病害发生程度严重度级值病害发生程度

0级健康植株，茎基部无坏死病斑或褐变3级第二茎节局部褐变或全部褐变，无白穗

第一茎节褐变面积小于1/2，植株正

1级4级茎秆基部变色至第三节或以上，但无白穗

常生长

第一茎节褐变面积大于1/2，植株正

2级5级茎秆枯死，无穗或出现白穗

常生长

RDI=DIic/DIcc…………………（3）

式中：

RDI——相对病情指数；

DIic——待鉴品种的病情指数；

DIcc——感病对照品种的病情指数。

7抗病性评价

鉴定有效性判断

当感病对照品种达到感病级别时鉴定有效。室内苗期鉴定感病对照品种病情指数≥40.0，田间成

株期鉴定感病对照品种病情指数≥30.0，该批次鉴定有效。

抗病性评价标准

7.2.1室内苗期抗病性评价标准

按照病情指数，将小麦茎基腐病抗病性类型划分为5个级别（见表3）。淘汰高感品种，感病及

以上级别的待鉴品种继续进行田间成株期鉴定。

表3室内苗期小麦对茎基腐病抗病性评价标准

病情指数抗病性评价

DI=0免疫Immune（I）

0＜DI≤10高抗Highlyresistant（HR）

10＜DI≤30中抗Moderatelyresistant（MR）

30＜DI≤40中感Moderatelysusceptible（MS）

DI＞40高感Highlysusceptible（HS）

3

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7.2.2田间成株期抗病性评价标准

当田间感病对照品种白穗率达到3%及以上时，按照公式（2）计算相对白穗率。根据相对白穗率

将小麦茎基腐病抗病性类型划分为5个级别（见表4）。若鉴定圃发病普遍较轻，则利用白穗率淘汰

部分感病材料，其余的按照成株期发病严重度分级标准调查的数据计算病情指数，进一步按照公式

（3）计算相对病情指数，按照相对病情指数进行分级（见表4）。

表4田间成株期小麦茎基腐病抗病性评价标准

相对白穗率

抗病性评价

（或相对病情指数）

RDI=0免疫Immune（I）

0＜RDI≤0.40高抗Highlyresistant（HR）

0.40＜RDI≤0.80中抗Moderatelyresistant（MR）

0.80＜RDI≤1.20中感Moderatelysusceptible（MS）

RDI＞1.20高感Highlysusceptible（HS）

重复鉴定

田间成株期初次鉴定中表现为中抗及以上的小麦，次年用相同的方法进行重复鉴定。

抗病性评价结论

根据2年抗病性鉴定结果对鉴定材料进行抗病性评价。室内苗期鉴定和田间成株期鉴定结果应分

别记录，以成株期鉴定结果为主要参考依据。抗病性级别以统计的最高相对病情指数为准。

4

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A

A

附录A

（资料性）

假禾谷镰刀菌的分离鉴定、致病性及周年侵染循环

A.1病菌的分离培养

从待鉴定区域有代表性的田间采集小麦茎基腐病发病的样品，剪去上下部位，留下发病的茎基

部，用自来水冲洗干净，放在滤纸上，从病健结合部位剪下0.5cm的小段，在超净工作台无菌条件

下进行消毒。首先浸泡于75%乙醇中10s，3%的次氯酸钠中1min进行表面消毒，然后用无菌水清洗3

次，最后将病组织放入提前准备好的含有100mg/mL氨苄青霉素的PDA平板上。将培养皿倒置，于25℃

条件下进行黑暗培养，2～3d后挑取由分离组织上长出的菌落边缘的病菌菌丝，转接至新的PDA平板

上，待菌落长出后依此方法转接3次得到纯培养物。

A.2形态学鉴定

将以上得到的纯培养物，转接到新的PDA培养基上，于25℃恒温培养箱中黑暗培养5d，观察并

记录菌落的形态特征与菌丝颜色，同时打取5～8枚菌饼放入含有50mL的CMC培养基中，放置于25℃、

180r/min条件下摇培3d，吸取10μL孢悬液制成玻片，在显微镜下观察分生孢子形态。假禾谷镰

刀菌菌丝一般前期为白色，中后期为粉红色或紫红色绒状，常沿培养皿边缘长满整皿。其分生孢子

呈镰刀形，有隔膜3～7个，顶端钝圆，基部足细胞明显，单个无色，大小为22～60.5μm×2.5～5.5

μm。

A.3分子生物学鉴定

挑取菌丝（约0.5g）放入含有3颗直径2mm钢珠的2mL无酶无菌离心管中，置于液氮中迅速冷冻，

并用组织研磨仪研磨成粉状物；利用十六烷基三甲基溴化铵（Cetyl-trimethylammoniumBromide，

CTAB）法提取菌丝DNA，琼脂糖电泳及吸光值质检合格后，稀释至50ng/μL备用。用假禾谷镰刀菌

特异性引物（Fp1-1：CGGGGTAGTTTCACATTTCCG；Fp1-2：GAGAATGTGATGACGACAATA）进行PCR扩增。PCR

反应体系包含2×TaqPCRMasterMix12.5μL，DNA模板1μL，10μmoL/L的正反向引物各1μ

L，双蒸水补足到25μL。反应程序：94℃3min;94℃30s,56℃1min,72℃90s，35个循

环;72℃终延伸10min,12℃保存。扩增产物用1.0%琼脂糖凝胶在110V恒压下电泳分离，紫外灯下

观察，在523bp附近有清晰目标条带的，可确定为假禾谷镰刀菌。

A.4致病性检测

按照以上技术方案获得待鉴定区域有代表性的假禾谷镰刀菌菌株，在小麦抗感不同品种上进行

接种，选择致病性强的单一菌株或者混合菌株用来进行抗茎基腐病鉴定。

A.5周年侵染循环

小麦茎基腐病是长期推行秸秆还田、免耕播种等保护性耕作条件下引发的重要病害，在小麦-玉

米一年两熟区表现更加突出（如图A.1）。该病以田间小麦根茬携带病原菌越夏；小麦收获后，贴茬

播种玉米，田间小麦根茬上的病原菌在潮湿的玉米田间可以继续存活并繁衍积累；玉米收获后，田

间小麦病残体随玉米秸秆一起粉碎并浅旋耕，均匀分散至有效侵染的小麦播种层。小麦播种后，病

原菌侵染小麦根茎结合处或地中茎，严重的造成烂芽、死苗；感病较轻的麦苗则继续生长，病原菌

向上、向内扩展，造成茎基部褐变，或向上扩展侵染至1～2节，严重的可达3～4节，引起枯秆或白

穗，在田间呈零散分布。白穗病茎拔出时基部折断不带根，严重影响产量。小麦收获后，病原菌再

次随小麦根茬越夏。该病周年循环、逐年积累和扩散，成为田间发病率很高，产量损失很大的重要

病害。假禾谷镰刀菌在小麦抽穗扬花期也能侵染麦穗引起赤霉病，病菌在麦穗上扩展，携带假禾谷

镰刀菌的小麦种子可以进行远距离传播，并在新的地块继续周年侵染、积累、扩散并为害，使该病

在黄淮海小麦-玉米一年两熟区快速扩散，并普遍发生，目前已经成为该区域普遍关注，影响小麦生

产安全的重要病害，2022年被中国科学列入我国十大产业技术难题之一。

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图A.1保护性耕作条件下小麦-玉米一年两熟区小麦茎基腐病扩散及周年侵染循环规律

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B

B

附录B

（资料性）

培养基制备

B.1马铃薯葡萄糖琼脂（Potatodextroseagar，PDA）固体培养基的制备

B.1.1称量去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g。

B.1.2将马铃薯切成小块放入锅中，加蒸馏水或去离子水1000mL，煮沸20～30min。用纱布滤去

马铃薯残渣。

B.1.3将马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化。在琼脂熔化过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，

并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。

B.1.4加入葡萄糖，溶解后，加入适量蒸馏水或去离子水以补充加热过程中损失的水分，定容至10

00mL。

B.1.5将配制的培养基分装于三角瓶内。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积的三分之一为宜。

B.1.6加塞、包扎后将上述培养基以121℃、高压蒸气灭菌25min，备用。

B.2羧甲基纤维素钠（CarboxymethylCellulose，CMC）液体培养基的制备

羧甲基纤维素钠（CMC）液体培养基是以CMC-Na为唯一碳源的培养基。该培养基制备方法有以下

两种。

B.2.1利用羧甲基纤维素液体培养基粉制备

称取羧甲基纤维素液体培养基粉42g（或按照购买商品标准称取），用蒸馏水或去离子水充分

溶解后定容至1000mL，调节pH值7.2±0.2，121℃高压蒸气灭菌25min，备用。

B.2.2利用化学试剂制备

分别称取羧甲基纤维素钠15.0g，硝酸铵1g，磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁·7H2O0.5g、酵母粉

1g，溶解后混合溶液；用蒸馏水或去离子水定容至1000mL，调节pH值7.2±0.2，121℃高压蒸气灭

菌25min，备用。

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C

C

附录C

（资料性）

调查记录表

C.1小麦茎基腐病室内苗期严重度分级调查记录

严重度级值

品种平均病情

编号重复病情指数抗性水平

（系）0级1级2级3级4级5级指数

Ⅰ

1Ⅱ

Ⅲ

Ⅰ

2Ⅱ

Ⅲ

Ⅰ

3Ⅱ

Ⅲ

………

注：1.催芽日期：2.接种日期：3.接种体病原物编号：4.调查日期：

C.2小麦茎基腐病田间成株期白穗调查记录

品种健康穗数白穗数总穗数白穗率平均白穗率

编号重复

（系）（个）（个）（个）（%）（%）

Ⅰ

1Ⅱ

Ⅲ

Ⅰ

2Ⅱ

Ⅲ

Ⅰ

3Ⅱ

Ⅲ

……