分子生物师面试题及答案

2026年分子生物师面试题及答案一、单选题（共10题，每题2分）1.在PCR反应体系中，引物二聚体形成的最主要原因是？A.引物过长B.引物浓度过高C.引物退火温度不合适D.DNA聚合酶活性不足2.以下哪种方法最适合用于检测基因组DNA中的特定位点突变？A.DNA测序B.溶血性贫血实验C.基因芯片杂交D.原位杂交3.在蛋白质印迹（WesternBlot）实验中，以下哪个步骤最容易导致条带模糊？A.SDS电泳B.转膜C.一抗孵育时间过长D.二抗孵育浓度过高4.CRISPR-Cas9基因编辑技术中，引导RNA（gRNA）的作用是？A.扩增目标DNA片段B.识别并切割目标DNA位点C.调控基因表达D.提供DNA模板5.RNA干扰（RNAi）的核心机制是？A.核酶降解mRNAB.转录激活C.DNA甲基化D.组蛋白修饰6.以下哪种质粒载体最适合用于原核表达系统？A.真核启动子驱动的表达载体B.ColE1复制起始位点C.真核终止子D.细胞凋亡相关基因7.流式细胞术主要用于分析？A.DNA序列B.细胞表面标记物表达C.基因表达调控D.蛋白质结构8.以下哪种方法最适合用于检测微小残留病灶（MRD）？A.环境DNA检测B.基因芯片分析C.数字PCRD.等温扩增9.在基因克隆过程中，限制性内切酶识别的序列通常是？A.密码子B.重复序列C.回文序列D.外显子10.单细胞测序技术的主要优势是？A.高通量B.精确区分细胞异质性C.快速检测D.低成本二、多选题（共5题，每题3分）1.以下哪些因素会影响qPCR实验的扩增效率？A.引物二聚体形成B.荧光探针降解C.DNA模板浓度D.聚合酶活性2.以下哪些方法是基因表达调控的常用手段？A.转录因子调控B.DNA甲基化C.RNA编辑D.细胞周期调控3.WesternBlot实验中，以下哪些步骤需要严格控制？A.蛋白质上样量B.电泳条件C.一抗二抗孵育时间D.化学发光检测条件4.CRISPR-Cas9系统的主要组成成分包括？A.gRNAB.Cas9蛋白C.目标DNAD.反转录酶5.单细胞RNA测序（scRNA-seq）的常见挑战包括？A.数据噪声B.细胞捕获效率C.RNA降解D.成本高昂三、简答题（共5题，每题5分）1.简述PCR反应体系的优化步骤。2.解释什么是“基因敲除”及其应用。3.简述WesternBlot实验的基本流程。4.CRISPR-Cas9技术有哪些潜在脱靶效应？如何减少脱靶风险？5.单细胞测序技术相比传统测序有何优势？四、论述题（共2题，每题10分）1.结合实际应用，论述基因编辑技术在临床诊断中的意义。2.分析高通量测序技术在肿瘤研究中的发展方向。答案及解析一、单选题答案及解析1.B.引物浓度过高解析：PCR反应中，引物浓度过高会导致非特异性扩增，形成引物二聚体，从而降低扩增效率。2.A.DNA测序解析：DNA测序可以直接检测基因组DNA中的碱基变化，是检测点突变的金标准。3.C.一抗孵育时间过长解析：一抗孵育时间过长可能导致非特异性结合，使条带模糊。4.B.识别并切割目标DNA位点解析：gRNA负责识别目标DNA序列，Cas9蛋白在gRNA引导下切割DNA。5.A.核酶降解mRNA解析：RNAi的核心机制是miRNA或siRNA通过核酶降解靶标mRNA，抑制基因表达。6.B.ColE1复制起始位点解析：ColE1复制起始位点有助于质粒在原核细胞中高效复制。7.B.细胞表面标记物表达解析：流式细胞术通过荧光标记检测细胞表面或内部的标记物。8.C.数字PCR解析：数字PCR能精确检测微量残留病灶，灵敏度高。9.C.回文序列解析：限制性内切酶识别对称的回文序列，并在特定位点切割DNA。10.B.精确区分细胞异质性解析：单细胞测序技术能分析单个细胞的基因表达，揭示细胞异质性。二、多选题答案及解析1.A.引物二聚体形成,B.荧光探针降解,C.DNA模板浓度解析：引物二聚体、探针降解和模板浓度都会影响扩增效率。2.A.转录因子调控,B.DNA甲基化,C.RNA编辑解析：转录因子、DNA甲基化和RNA编辑是基因表达调控的主要机制。3.A.蛋白质上样量,B.电泳条件,C.一抗二抗孵育时间解析：这些步骤直接影响蛋白转移和抗体结合的特异性。4.A.gRNA,B.Cas9蛋白解析：gRNA和Cas9是CRISPR-Cas9系统的核心成分。5.A.数据噪声,B.细胞捕获效率,C.RNA降解解析：scRNA-seq面临数据噪声、细胞捕获和RNA降解等挑战。三、简答题答案及解析1.PCR反应体系优化步骤-引物设计：选择特异性高、Tm值适中的引物。-退火温度优化：逐步降低温度，寻找最佳退火温度。-镁离子浓度调整：过高或过低都会影响扩增效率。-模板浓度控制：避免过量模板抑制扩增。-酶浓度优化：确保聚合酶活性充足。2.基因敲除及其应用基因敲除是通过基因工程技术使特定基因失活。应用包括：研究基因功能、治疗遗传病、开发药物靶点。3.WesternBlot基本流程-蛋白质提取与SDS电泳分离。-转膜至PVDF或NC膜。-一抗孵育（封闭非特异性位点）。-二抗孵育（结合荧光或酶标记抗体）。-化学发光或荧光检测成像。4.CRISPR-Cas9脱靶效应及减少方法脱靶效应：Cas9在非目标位点切割DNA。减少方法：优化gRNA设计、筛选脱靶位点、使用高特异性Cas变体（如HiFiCas9）。5.单细胞测序优势-揭示细胞异质性，发现罕见细胞亚群。-精确研究肿瘤微环境。-用于疾病诊断和预后评估。四、论述题答案及解析1.基因编辑技术在临床诊断中的意义基因编辑可用于：-病理诊断：通过基因检测早期发现遗传病。-个性化治疗：针对特定基因突变设计治疗