《化工产品检验》课件-项目7：维Ｃ银翘片中维生素Ｃ和对乙酰氨基酚的检验

项目七维Ｃ银翘片中维生素Ｃ和对乙酰氨基酚的检验

2引入3维Ｃ银翘片【成份】金银花、连翘、荆芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗、薄荷油、芦根、淡竹叶、甘草、维生素Ｃ、马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚。辅料为硬脂酸镁、淀粉、滑石粉、蔗糖、明胶、柠檬黄。【性状】本品为糖衣片，除去糖衣后显灰褐色，略带有少许白色斑点，或显灰褐色与白色或淡黄色层；气微，味微苦。【功能主治】辛凉解表，清热解毒。用于流行性感冒引起的发热头痛、咳嗽、口干、咽喉疼痛。4思考如何测定维Ｃ银翘片中维Ｃ含量呢？一般我们采用紫外可见分光光度法。那么我们来介绍一下紫外可见分光光度计。5任务1维生素Ｃ含量的测定

1．能力目标：（1）掌握紫外-可见分光光度计法对维生素C含量进行测定；（2）能对仪器进行熟练操作及使用（3）能对仪器进行保养和简单的维护；（4）能分析所测的数据；并给出结果6知识目标1、实验目的；2、实验注意事项；3、紫外-可见分光光度法基本原理以及基本构造；4、紫外-可见分光光度法的实验条件；5、对紫外-可见分光光度的定量分析；６、常见有机化合物的紫外吸收光谱特征；7、测定出维生素C的含量。7认知紫外可见分光光度计8紫外可见分光光度计9紫外可见分光光度计10一、基本组成光源单色器样品室检测器显示1.光源在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。

可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500nm。

紫外区：氢、氘灯。发射185～400nm的连续光谱。11

2.单色器

将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅；

④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；⑤出射狭缝。123.样品室样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。4.检测器利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。5.结果显示记录系统检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理13二、分光光度计的类型1.单光束简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。2.双光束自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。143.双波长

将不同波长的两束单色光(λ1、λ2)快束交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。△

=1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。15有机物分子中外层价电子有三种存在形式：σ电子、π电子、n电子。三

方法原理分子轨道理论：一个成键轨道必定有一个相应的反键轨道。通常外层电子均处于分子轨道的基态，即成键轨道或非键轨道上。1.有机化合物紫外吸收光谱的产生有机分子包括:成键轨道、；反键轨道

*、*非键轨道n

。例如HCHO分子的轨道，有机分子能级跃迁.可能的跃迁类型。16四.几个概念(1)生色团：最有用的紫外—可见光谱是由π→π＊和n→π＊跃迁产生的。这两种跃迁均要求有机物分子中含有不饱和基团。这类含有π键的不饱和基团称为生色团。简单的生色团由双键或叁键体系组成，如乙烯基、羰基、亚硝基、偶氮基—N＝N—、乙炔基、腈基—C㆔N等。17(2)助色团有一些含有n电子的基团(如—OH、—OR、—NH２、—NHR、—X等)，它们本身没有生色功能(不能吸收λ>200nm的光)，但当它们与生色团相连时，就会发生n—π共轭作用，增强生色团的生色能力(吸收波长向长波方向移动，且吸收强度增加)，这样的基团称为助色团。18(3)红移与蓝移有机化合物的吸收谱带常常因引入取代基或改变溶剂使最大吸收波长λmax和吸收强度发生变化:λmax向长波方向移动称为红移，向短波方向移动称为蓝移(或紫移)。

吸收强度即摩尔吸光系数ε增大或减小的现象分别称为增色效应或减色效应。(4)增色效应与减色效应19五、常见有机化合物紫外吸收光谱1.饱和烃：由于C－H只有σ电子，只产生σ－σ*跃迁，而σ－σ*跃迁需要能量大，在200nm以上无吸收，常用作紫外吸收的溶剂。2.含有孤立不饱和键的烃类化合物：都会产生π－π*跃迁，但多数在200nm以上无吸收，如乙烯(165、182)、乙炔(173)、丁烯(178)有吸收。对于含有=C=O、=C=S的不饱和烃类吸收红移至远紫外区甚至可见光区。20

共轭双烯及多烯化合物：对于共轭双烯和多烯化合物π－π*跃迁(K带)，随着取代基的变化及共轭体系延伸，吸收谱带发生一些规律性的变化，其中伍德沃德总结出一个取代共轭双烯的经验规则。3.含有共轭体系的不饱和烃类：共轭体系的化合物中的π－π*跃迁由于能量降低，因此发生明显的红移。大多数出现在200nm以上的区域。如乙烯的π－π*跃迁在182nm，而1，3-丁二烯在217nm。21常见有机化合物紫外吸收光谱表中的环指六员环，若是五环或七员环，则基本值分为228nm和241nm.22练习：求下列几种有机物的λmax：23有色溶液对光选择性吸收，那么一些无色的有机溶液是否对光没有吸收呢？紫外吸收光谱与可见吸收光谱的异同点？紫外吸收光谱有哪些具体的应用，如何指导实践？

紫外吸收曲线的绘制与应用24

紫外光、紫外吸收曲线

紫外光区域的波长范围：10－400nm;

可见分光光度法的波长范围：200nm-400nm紫外吸收曲线绘制：

即用一束具有连续波长的紫外光照射一定浓度的样品溶液，分别测量不同波长下溶液的吸光度，即得到该化合物的紫外吸收曲线。茴香醛紫外吸收曲线

25紫外光谱的特点、原因产生原因特点可用来定性鉴定和结构分析无需加显色剂，测量简单方便灵敏度高，准确度σ→σ*＞n→σ*＞π→π*

＞n→π*分子中价电子的能级跃迁产生。26紫外吸收光谱的应用定性鉴定未知样品采用比较光谱法，标准物对照，或者标准图谱对照。推测结构

推定化合物的共扼关系、部分骨架；区分化合物的构型；互变异构体的鉴别；化合物纯度的检测化合物在紫外区没有明显的吸收峰，而杂质在紫外区有较强的吸收，就可以紫外吸收曲线检测出该化合物所含的杂质。如乙醇中杂质苯测定检查如四氯化碳中二硫化碳测定检查27操作规程(使用方法)注意：仪器面板的测量模式应按要求选择操作开机预热选择光源选择波长调透射比为零调透射比为100%样品测定281仪器与试剂

UV-725紫外分光光度计，VitC对照品及银翘片，硫酸溶液（pH=6）。292实验操作

2.1标准曲线的绘制精密称取VitC对照品0.05g溶于100ml硫酸溶液，再稀释成一系列不同浓度的对照品溶液（0～14μg/ml），分别测出其吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。该曲线是经过原点的一条直线，可求出该曲线的斜率。

30

2.2样品测定取VitC20片，精密称定，研细，精密称出适量（相当于VitC50mg），置于100ml量瓶中，加硫酸溶液溶解并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2ml置于另一100ml量瓶中，加硫酸溶液稀释至刻度，测出其吸光度A样。由标准曲线查出样品的浓度C样品。31子任务1设计用紫外分光光度法测定维生素C含量的方案。并且测试含量配制一定浓度的维生素C溶液------在波长220—320nm内分别测定其吸光度值-----以测定波长为横坐标、吸光度值为纵坐标绘制吸收曲线---确定最大吸收波长32注意：

1、维生素C的还原能力强而易被氧化，特别是在碱性溶液中易被氧化。另外在碱性溶液或强酸性溶液中还能进一步发生水解。因此，选择硫酸溶液使成弱酸性。

2、测定时溶液pH的选择:维生素C的紫外最大吸收波长与溶液的pH值有着密切关系。在pH=2.0时，溶液的最大吸收波长在245nm;在pH=12时，溶液的最大吸收波长在300nm;在pH=5～10范围时，溶液的最大吸收波长在267nm，况且在pH=6.0时吸收度值最大。所以，选择测定溶液的pH=6.0。

33任务2配制标准溶液，分别在测定波长下测定吸光度值34任务2测定银翘片中VC吸光度值，并确定待测样浓度.35思考题目为什么紫外分光光度计定量测定中没有加显色剂

项目七维Ｃ银翘片中维生素Ｃ和对乙酰氨基酚的检验

37思考如何测定维Ｃ银翘片中对乙酰氨基酚呢？

一般我们采用高效液相色谱法。那么我们来介绍一下高效液相色谱。38能力目标（1）能利用高效液相色谱测定对乙酰氨基酚的含量；（2）会使用液相色谱对产品进行定量分析；（3）能熟练对仪器进行操作及使用；（4）能对仪器进行保养和简单的维护；（5）能分析所测的数据，并给出结果。39知识目标（一）液相色谱法测定对乙酰氨基酚的含量；1、实验注意事项；2、液相色谱法的基本原理以及基本构造；3、液相色谱法的实验条件；4、对液相色谱图的定性定量分析；2007-4-10

40液相色谱仪（1）41液相色谱仪（2）42液相色谱仪（3）43

液相色谱仪（4）44一、高效液相色谱法的特点

特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。

45二、流程及主要部件

1.流程

462.主要部件(1)高压输液泵

主要部件之一，压力：150～350×105Pa。

为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀.47(2)梯度淋洗装置外梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度:

一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。484950(3)进样装置

流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：512007-4-10

(4)高效分离柱柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。

52(5)高效液相色谱检测器

紫外光度检测器（UV）：最小检测量10-9g·mL-1，对流量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。最常用的检测器。53光电二极管阵列检测器

光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。

54553、固定相、流动相及分离柱

气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。选择合适的固定相，降低填料粒度可显著提高柱效，但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。选择短柱、细内径提高分析速度.564.流动相及流动相的极性（1）可显著改变组分分离状况的流动相选择在液相色谱中显得特别重要。液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。575、流动相组成

流动相按组成不同可分为单组分和多组分；按极性可分为极性、弱极性、非极性；按使用方式有固定组成淋洗和梯度淋洗。常用溶剂:己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。

586、选择流动相时应注意的几个问题：（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。

（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。

59三、高效液相色谱法的主要分离类型

1.吸附色谱（液-固吸附色谱）以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。2.分配色谱（液-液分配色谱）早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相,现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。

603.离子交换色谱固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。4.凝胶色谱（空间排阻色谱）

以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶；611.1仪器与试剂日本岛津LC-6A高效液相色谱仪,C-R3A数据处理机,SPD-6AV紫外检测器.对乙酰氨基酚对照品为中国生物药品检定所出品,甲醇为色谱纯,高氯酸为分析纯,水为二次蒸馏水.实验部分621.2色谱条件(色谱柱为大连依利特公司Hypersil-C184.6mm×150mm,流动相为甲醇/水30:70,V/V,用高氯酸调至pH4.0,检测波长285nm,流速0.8ml/min.1.3对照品溶液的配制精密称取经105℃干燥恒重的对乙酰氨基酚对照品50mg,置于50ml容量瓶中,用流动相定容,制成浓度为1.0mg/ml的对乙酰氨基酚对照品储备液.63操作步骤1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

64操作步骤5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口