CN110680847A 一种提取及纯化大麻黄酮的方法 （云南绿新生物药业有限公司）

(10)申请公布号CN110680847A(21)申请号201911116607.5(71)申请人云南绿新生物药业有限公司地址655000云南省曲靖市沾益区城西工业园区(72)发明人王钲霖刘胜贵蒋永昌付彬彬李智高孔令羽A61K36/60(2006.01)(54)发明名称一种提取及纯化大麻黄酮的方法(57)摘要本发明公开了一种提取及纯化大麻黄酮的方法。其包括以下步骤：花叶处理后投入到提取罐中用甲醇水提取2次，得到的提取液浓缩至一定量体积；冷却后加入一定比例的甲醇，放置沉丁醇萃取；水相加入铅盐和碳酸氢钠搅匀沉降；过滤，得到的滤液加酸调节PH值，再加入正丁醇萃取三次；得到的萃取液浓缩后用凝胶吸附过滤，待吸附完全后用不同PH的水洗涤；收集黄酮21.一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤3,浓缩：收集提取液浓缩至1/5体积；步骤4,醇沉：得到的浓缩液加入一定量的乙醇溶液，放置一定时间沉淀；步骤6,萃取：分离得到的滤液用正己烷萃取，萃取后的水相再用正丁醇萃取；步骤7,沉降：萃取后的水相加入铅盐，搅拌一段时间后，再加入一定量的碳酸氢钠，搅步骤9,吸附：得到的正丁醇相用凝胶吸附过滤；步骤11,柱层析：得到的洗涤液加入一定量碳酸氢钠，浓缩至1/6体积；得到的浓缩液上柱层析进行分离。2.根据权利要求1所述的一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤1中的大麻花叶晾晒后含水量应控制15%左右，粗碎后颗粒控制在30目左右。3.根据权利要求1所述的一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤2中用于提取的甲醇水溶液为20-50%,提取次数为2-5次。4.根据权利要求1所述的一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤4中加入的乙醇溶液酒精度不低于80%,加入量为浓缩液体积的3-5倍，放置沉降时间为6-5.根据权利要求1所述的一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤6中分离得到滤液用正己烷萃取3-5次，正己烷萃取后的水相用正丁醇萃取1-2次。6.根据权利要求1所述的一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤7中萃取后的水相按体积量加入3-5%的醋酸铅，搅拌0.5-1h,再按水相体积量加入2-4%的碳酸氢钠。7.根据权利要求1所述的一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤8中得到的滤液加入盐酸调节PH值至5-6,用正丁醇萃取2-3次。8.根据权利要求1所述的一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤9中所用的吸附凝胶为硅胶。9.根据权利要求1所述的一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤1010.根据权利要求1所述的一种提取及纯化大麻黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤11中所用的分离树脂型号为LSA—33。3一种提取及纯化大麻黄酮的方法技术领域[0001]本发明属于中药提取工艺技术领域，具体涉及一种提取及纯化大麻黄酮的方法。背景技术[0002]工业大麻(SteviarebaudianaBertoni)为大麻科大麻属一年生雌雄异株的草本植物，广泛分布于世界各地。世界上大麻属植物主要有野生大麻(CannabisruderalisJanisch)、印度大麻(CannabisindicaLam)和栽培大麻(CannabissativaL)3个种，在长期的生物进化过程中又产生了许多大麻变种和亚种。由于大麻中含有一种致幻成瘾的次生代谢产物一四氢大麻酚tetrahydrocannabinol,THC),因而成为公众熟知的毒品原植物之一。为了方便监管和合理使用，国际上将大麻中THC含量<0.3%的大麻品种定义不具备毒品利用价值的工业大麻。目前世界上种植工业大麻的国家已达27个，培育出的符合THC含量<0.3%的工业大麻品种26个。[0003]工业大麻又称汉麻，汉麻全身都是宝主要有纺织、食用和药用三大功能。汉麻皮富含纤维，可用于服装及各种饰品加工；汉麻杆芯是极佳的木材替代品，还可用来生产超微粉；汉麻籽富含优质蛋白以及人体必需脂肪酸，可应用于食品、保健品等领域。汉麻叶中疾病、降血压等作用，具有较高的药用价值。目前总黄酮提取主要以银杏叶为原料，前期初步分析表明，从大麻的叶、花及花粉中分离得到的已知黄酮类化合物有20多种，它们可以被糖基化、异戊烯基化或甲基化。2002年，McPartland等分素(apigenin)、木犀草素(luteolin)、槲皮素(quercetin)和山奈酚(kaempferol);同年，Vanhoenacker等分离得到了C-糖苷化合物：荭草苷(orientin)、紫杉醇(vitexin)、木犀草素-7-0-葡萄糖苷(luteolin-7-0-glucoside)和芹菜素-7-0-葡糖苷(apigenin-7-0-glucoside)。此外，大麻中特有的化合物大麻黄素A、大取总黄酮既可拓展植物黄酮的来源，也可提升汉麻加工品的附加值，完善汉麻产业链并有利于汉麻资源的综合利用。目前，黄酮类化合物的提取方法主要有溶剂提取法、微波辅助提微波辅助提取法要考虑微波穿透物质内部时衰减的问题；溶剂萃取法选择性高，产品收率高，但其提取时间较长，提取效率不高。目前从汉麻叶和汉麻果胶中提取总黄酮工艺已见报道，但实现工业化提取的并不多见。本发明采用甲醇水溶液提取配合柱层析分离纯化，对汉麻叶总黄酮的提取工艺进行优化，以探寻汉麻叶总黄酮的最适提取条件，目的在于研发一个适合工业化大规模生产的工艺，旨在为充分利用汉麻叶中的生物活性成分，实现汉麻资源的综合利用和效益最大化提供指导。4发明内容[0004]为了使大麻花叶中有效成分被完全提取出来并得到充分利用，本发明采用了常规提取技术。本提取工艺具有溶剂消耗小、提取简单、提取量大和提取收率高等特点，经过纯化后的大麻黄酮含量高，有效成分齐全，且不含有四氢大麻酚。[0005]为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：1、前处理：花叶晾晒至含水量15-20%,用脱叶机脱去叶柄，脱去叶柄的碎叶用40目筛网粉碎。[0006]2、提取：取一定量的花叶颗粒加入5-7倍量甲醇水溶液，升温至70-85℃,提取2-3h,提取2-3次。[0007]3、浓缩：合并提取液，减压浓缩至1/5体积。[0008]4、醇沉：得到的浓缩液加入3-5倍量的乙醇溶液，放置6-18h沉淀。[0009]5、过滤：待沉淀完全后，取上清液用200目滤网过滤。[0010]6、萃取：分离得到的滤液用正己烷萃取，萃取2-3次，合并萃取液浓缩抽干；萃取后的水相再用正丁醇萃取1-2次，合并正丁醇萃取液浓缩抽干。[0011]7、沉降：萃取后的水相按体积量加入3-5%的醋酸铅，搅拌0.5-1h,再按水相体积量加入2-4%的碳酸氢钠，搅拌0.5-1h,静置1-2h,搅拌1-2min,用200目滤网过滤。[0012]8、萃取：得到的滤液加入盐酸调节PH值至5-6,用正丁醇萃取2-3次，合并萃取液浓缩至1/4体积。[0013]9、吸附：得到的正丁醇浓缩液，缓慢通过硅胶吸附柱，流速控制在每小时0.2-0.5个柱体积，吸附比控制在1:20(大麻酮有效量：硅胶)。[0014]10、水洗：吸附完全后，用PH值5-6的水溶液洗涤，再用PH值6.5-7.5的水溶液洗涤，最后用PH值7-8的水溶液洗涤，收集PH值7-8的水溶液浓缩至体积的1/6,加入一定量的碳酸氢钠，搅拌均匀。[0015]11、柱层析：得到的浓缩液通过柱层析分离，收集浓缩大麻黄酮段。[0016]本发明的优点：本发明不仅保护了大麻黄酮中的活性成分，同时还具有提取完全、产物易分离、投料量大、运行成本低等特点；制备得的大麻黄酮成分齐全，且制备工艺简单易控制。具体实施方式[0017]为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。[0018]本具体实施方式采用以下技术方案：1、前处理：取一定量的大麻花叶晾晒至含水量15-20%,用脱叶机脱去叶柄，脱去叶柄的碎叶用40目筛网粉碎。[0019]2、提取：取2kg的花叶颗粒加入5倍量40%的甲醇水溶液，升温至85℃,提取3h,提取2次。[0021]4、醇沉：得到的浓缩液加入15L的工业乙醇，放置8h沉淀。[0022]5、过滤：待沉淀完全后，取上清液用200目滤网过滤。5[0023]6、萃取：分离得到的滤液浓缩至3L左右，加入2倍量的正己烷萃取，萃取3次，合并萃取液浓缩抽干；萃取后的水相再加入2倍量正丁醇萃取1次，合并正丁醇萃取液浓缩抽干。[0024]7、沉降：萃取后的水相加入100g醋酸铅，搅拌0.5-1h,再加入80g的碳酸氢钠，搅拌0.5-1h,静置2h;搅拌1min,用200目滤网过滤。[0025]8、萃取：得到的滤液加入5%的盐酸调节PH值至5-6,加入2倍量的正丁醇萃取2次，合并萃取液浓缩至500ml。[0026]9、吸附：得到的正丁醇浓缩液，缓慢通过2L柱体积的硅胶吸附柱，流速控制在每小时400ml。[0027]10、水洗：吸附完全后，用5LPH值5-6的水溶液洗涤，再用4LPH值6.5-7.5的水溶液洗涤，最后用6LPH值7-8的水溶液洗涤，收集PH值7-8的水溶液浓缩至1L,加入50g碳酸氢钠，搅拌均匀。[0028]11、柱层析：得到的浓缩液通过柱层析分离，收集浓缩大麻黄酮段。大麻黄酮成分含量(mg/g)大麻黄素A大麻黄素B大麻黄素C木犀草素荭草苷芹菜素槲皮素牡荆素、异牡荆素芹菜素-7-0-β-D-葡萄糖苷酸木犀草素-7-