2025年大学生物（基因工程实验）试题及答案

2025年大学生物（基因工程实验）试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题共30分）（总共10题，每题3分，每题只有一个选项符合题意，请将正确答案填写在括号内）w1.基因工程中常用的工具酶不包括以下哪种？（）A.限制性核酸内切酶B.DNA连接酶C.反转录酶D.解旋酶w2.以下关于载体的说法，错误的是（）A.能在宿主细胞中自主复制B.有多个限制酶切割位点C.必须是环状DNA分子D.带有筛选标记基因w3.提取基因组DNA时，常用的方法是（）A.酚氯仿抽提法B.离子交换法C.亲和层析法D.凝胶过滤法w4.基因克隆的基本步骤不包括（）A.目的基因的获取B.载体的选择与构建C.细胞的分化诱导D.重组DNA的导入与筛选w5.以下哪种技术可用于检测基因表达水平？（）A.PCRB.WesternblotC.SouthernblotD.原位杂交w6.基因工程中，转化是指（）A.将重组DNA导入受体细胞B.使受体细胞获得新的遗传特性C.对目的基因进行修饰D.筛选阳性克隆w7.常用于构建基因文库的载体是（）A.质粒载体B.噬菌体载体C.人工染色体载体D.以上都是w8.以下关于限制性核酸内切酶的识别序列，正确的是（）A.都是回文序列B.都有特定的长度C.都能产生粘性末端D.以上都对w9.基因工程中，用于连接目的基因和载体的酶是（）A.DNA聚合酶B.DNA连接酶C.核酸酶D.磷酸酶wl0.在PCR反应中，不需要的物质是（）A.模板DNAB.引物C.核糖核苷酸D.TaqDNA聚合酶第II卷（非选择题共70分）w11.（10分）简述基因工程的基本定义和主要操作步骤。w12.（15分）请详细说明如何选择合适的载体用于基因克隆实验。w13.（15分）在提取基因组DNA过程中，可能会遇到哪些问题？如何解决？（一）材料：某实验室欲克隆一段特定的基因，以研究其功能。他们首先从细胞中提取了总RNA，然后通过反转录得到了cDNA。接下来，他们计划使用PCR技术扩增目的基因。w14.（15分）（1）请说明反转录的原理和过程。（2）设计PCR引物时，需要考虑哪些因素？（3）如何验证PCR扩增产物是否为目的基因？（二）材料：研究人员成功构建了一个重组质粒，将其导入大肠杆菌细胞中，试图筛选出含有目的基因的阳性克隆。w15.（15分）（1）简述筛选阳性克隆的常用方法及原理。（2）如果筛选结果不理想，可能的原因有哪些？（3）如何进一步优化筛选策略？答案：w1.Dw2.Cw3.Aw4.Cw5.Bw6.Aw7.Dw8.Aw9.Bw10.Cw11.基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。主要操作步骤包括：目的基因的获取、载体的选择与构建、目的基因与载体的连接、重组DNA导入受体细胞、重组体的筛选与鉴定。w12.选择合适载体需考虑：能在宿主细胞中自主复制，提供稳定遗传；有多个限制酶切割位点，便于目的基因插入；具有筛选标记基因，如抗生素抗性基因，利于筛选阳性克隆；分子量大小合适，便于操作；根据实验目的选择不同类型载体，如克隆基因选质粒载体，构建大片段基因文库选噬菌体或人工染色体载体等。w13.提取基因组DNA可能遇到的问题及解决方法：DNA降解，可在低温下操作，加入蛋白酶抑制剂等；杂质污染，可通过多次洗涤、离心等方法去除；产量低，可增加样本量或优化提取方法。w14.（1）反转录原理是以RNA为模板，在反转录酶作用下合成cDNA。过程为：先将RNA与反转录引物结合，反转录酶以dNTP为原料合成与RNA互补的DNA链，形成RNA-DNA杂交分子，再去除RNA，以单链DNA为模板合成双链cDNA。（2）设计PCR引物需考虑：与目的基因两端序列互补，长度合适，避免引物间形成二聚体，Tm值合适等。（3）可通过测序、酶切鉴定、与已知基因比对等验证PCR扩增产物是否为目的基因。w15.（1）常用方法及原理：蓝白斑筛选，重组质粒使lacZ基因失活，含重组质粒的菌落呈白色，未重组的呈蓝色；抗生素筛选，载体携带抗生素抗性基因，导入重组质粒的细胞能在含相应抗生素培养基上生