DB32／T+5303-2025+草莓拟盘根腐病抗性鉴定评价技术规程

草莓拟盘根腐病抗性鉴定评价技术规程TechnicalcodeofpracticeforresistanceidentificationofNeopes2025-12-30发布江苏省市场监督管理局发布Ⅰ前言 Ⅲ 2规范性引用文件 3术语和定义 4室内鉴定 5田间鉴定 6抗性结果 7档案记录 附录A（资料性）草莓拟盘根腐病病情调查记录表 附录B（资料性）草莓拟盘根腐病的田间症状及发病规律 Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省农业农村厅提出并组织实施。本文件由江苏省园艺标准化技术委员会归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院。1草莓拟盘根腐病抗性鉴定评价技术规程本文件规定了草莓拟盘根腐病抗性鉴定中的室内鉴定、田间鉴定、抗性结果、档案记录的技术要求。本文件适用于草莓种质资源拟盘根腐病抗性的鉴定与评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性的引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T2931草莓种质资源描述规范NY/T4519热带作物种质资源抗病虫鉴定技术规程咖啡炭疽病3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。草莓拟盘根腐病strawberryNeopestalotiopsiscrownrot由新拟盘多毛孢属（Neopestalotiopsisspp.）病原真菌侵染所致，主要危害草莓根颈部、叶片及萼片等部位，受害植株矮化瘦弱、新叶失绿不对称、叶片现褐色或红褐色病斑等症状的病害。4室内鉴定4.1病原菌分离与纯化田间采集典型发病植株，记录采集地点、品种、时间及病害症状。采用常规组织分离法从发病植株的根颈部、叶片等病健交界处分离病原菌，对分离物进行单孢分离纯化和致病性测定，经形态学和分子鉴定，确认为草莓拟盘根腐病菌。4.2病原菌回接将纯化培养7d~10d且经镜检后的病原菌制成浓度为1×106个/mL孢子悬浮液，回接到草莓离体叶片上，开展致病性测定与科赫氏法则验证，叶片和接种体的制备分别按照NY/T2931和NY/T4519的规定进行。4.3病原菌保存纯化后的病原菌采用滤纸片干燥法于-40℃低温冰箱中长期保存。4.4病原菌活化将保存的病原菌接种至PDA培养基中，26℃恒温避光培养7d，待菌落长至培养皿面积的80%时，2用无菌打孔器在菌落边缘制取直径5mm的菌饼，将菌饼(菌丝面朝下)接种于PDA培养基中央，培养，备用。取大小、叶龄(约2周)一致的新鲜健康草莓叶片，置于含1%琼脂培养基的培养皿，每皿放2片(叶背朝上),用昆虫针在叶背刺一直径约0.5mm的孔。从活化7d的菌落边缘取直径5mm菌饼，倒置接种于伤孔处，每处理3皿(共6片叶),以无菌PDA菌饼为对照。于温度26℃、相对湿度95%、光16h/暗8h条件下培养48h后将叶片翻为正面，用刻度尺采用十字交叉法测量病斑与叶片面积。基于病斑面积占叶片面积的百分比，将离体叶片拟盘根腐病抗性水平划分为6个等级，如图1和表表1离体叶片拟盘根腐病抗性评价免疫(I)叶片无病斑高抗(HR)抗病(R)10%<病斑面积占叶片面积≤25%中抗(MR)感病(S)50%<病斑面积占叶片面积≤75%高感(HS)免疫高抗抗病中抗感病高感图1草莓拟盘根腐病离体叶片抗性评价从草莓定植2周后开始至结果后期结束，每2周调查一次。选择当地曾有该病发生的典型田块1个~3个，定为系统调查点。自首次发现该病发生后，至结果后期结束，可进行2次～3次调查，每个调查田块所在区域至少调查20个小区(面积≥10m²,草莓植株30株以上)。35.1.3调查方法每田块依据田块形状选择“梅花形”或“S形”法进行五点取样，每垄单行种植时，每点顺垄逐株调查20株，每垄双行种植时，每点每行调查10株，共20株，统计其抗性等级，计算病株率，结果记录至草莓拟盘根腐病病情调查记录表（见附录A中的A.1）。5.2严重度分级严重度分级基于叶片或根颈部病变症状分为6级，具体分级标准见表2。草莓拟盘根腐病症状识别及发病规律见附录B。表2草莓拟盘根腐病严重度病级植株叶片症状根颈部症状0健康植株，无症状，X=0根颈部无病变，S=01草莓植株叶片现典型症状，新叶失去光泽、失绿、老叶主脉一侧呈水渍状褐色斑点，X≤10%根颈部横切面有轻度零星变色点状斑，S≤10%3草莓植株叶片现典型症状，新叶失绿、变黄，老叶呈红褐色网纹斑，10<X≤25%根颈部横切面有零星变色点状斑，10<S≤25%5草莓植株叶片现典型症状外，植株略有矮化，主脉一侧现椭圆形或不规则病斑，25<X≤50%根颈部横切面现变色，颜色较浅，现红棕色片状斑，25<S≤50%7草莓植株叶片现典型症状，植株明显矮小，不伸展，老叶呈红褐色或紫红色萎蔫，50<X≤75%根颈部横切面变色，颜色中度，现红褐色至深褐色病斑，50<S≤75%9草莓植株现枯死症状，叶片干枯下垂，不结果，甚至整株现急性凋萎死亡，X>75%植株地上部基本枯死，根颈部横切面现深褐色病斑，S>75%注：X表示发病叶片数占叶片总数的百分比；S表示变色面积占剖面的百分比。5.3发病程度分级病（7级）、高感（9级以当地病害流行盛期调查的平均病情指数为分级指标，具体见表3。表3草莓拟盘根腐病发病程度分级抗性等级病情指数（DI）DI=00<DI≤55<DI≤1010<DI≤3030<DI≤5050<DI≤100DI=∑（Si×Xi）/（Smax×N）×100…………（1）4式中：DI——病情指数；Si——病级数；Xi——对应病级（Si）的病株数或病叶数；max——病级数最大值；N——调查总株数或总叶数。6抗性结果根据5.2和5.3确定抗性水平，可判定草莓拟盘根腐病抗性等级。当室内鉴定与田间鉴定结果不一致时，优先采用田间鉴定结果作为最终依据。7档案记录记录技术实施过程中参与人员、时间、地点、品种资源、样本来源、病原菌分离、抗病性鉴定结果及病害发生情况等，相关记录保留2年以上。5（资料性）草莓拟盘根腐病病情调查记录表草莓拟盘根腐病病情调查记录表见表A.1。表A.1草莓拟盘根腐病病情调查记录表调查人员调查时间调查地点寄主品种连作年限生育期总株数病株数抗性等级备注IHRRMRSHS6(资料性)草莓拟盘根腐病的田间症状及发病规律草莓拟盘根腐病主要危害根颈部、叶片和萼片等，在草莓的整个生长期均可发生，以春秋季发病较重。典型症状是在发病初期病株表现为新叶失绿，底层叶外边缘焦枯，主叶脉一侧呈较深红色或红褐色点状斑(图B.1),随后扩展为椭圆形或不规则形病斑，边缘呈红褐色，中央呈灰白色，病斑周围褪绿，具有状，严重时叶片干枯死亡，剖开根颈部位可见红褐色及棕褐色变色(图B.2),最终导致整个植株枯萎死亡。图B.1草莓拟盘根腐病在叶片上的症状图B.2草莓拟盘根腐病根颈部危害状目前已知引起草莓拟盘根腐病的病原菌是黑盘孢科(Amphisphaeriaceae)中的新拟盘多毛孢属7图B.3草莓拟盘根腐病菌菌落及孢子形态特征B.3病害流行草莓拟盘根腐病的发生流行与种植品种、田间菌源量、温湿度以及栽培管理措施等有