湖南省临床基因扩增检验技术上岗前培训结业考试题及答案

湖南省临床基因扩增检验技术上岗前培训结业考试题及答案一、单项选择题（每题1分，共40分。每题只有一个最佳答案，请将正确选项字母填入括号内）1.实时荧光PCR中，用于定量计算的关键参数是（）A.Ct值B.Tm值C.扩增效率D.熔解曲线峰面积答案：A解析：Ct值（Cyclethreshold）是荧光信号达到设定阈值所需的循环数，与起始模板量呈负相关，是定量分析的核心指标。2.下列哪种荧光探针在退火阶段即被切割，从而释放荧光信号（）A.分子信标B.TaqMan探针C.FRET探针D.双链DNA结合染料答案：B解析：TaqMan探针依赖Taq酶5'→3'外切酶活性，在延伸阶段被切割，但切割始于退火延伸过渡期，故习惯称“退火即切”。3.湖南省室间质评样本接收后，若不能当日提取，应置于（）A.4℃保存不超过24hB.-20℃保存不超过48hC.-70℃保存不超过7天D.室温保存不超过6h答案：C解析：省临检中心文件规定，核酸长期保存需-70℃，且7天内完成提取，避免降解。4.内标法与绝对定量相比，最主要优势是（）A.无需标准曲线B.可校正样本间抑制差异C.灵敏度更高D.线性范围更宽答案：B解析：内标与靶基因共提取共扩增，可抵消提取效率及PCR抑制带来的偏差。5.下列哪项不是临床PCR实验室“三区两缓”布局要求（）A.试剂准备区正压≥5PaB.标本制备区负压≥-10PaC.扩增区负压≥-5PaD.缓冲区需安装紫外灯与互锁门答案：C解析：扩增区要求负压≥-10Pa，防止扩增子外泄，-5Pa不满足规范。6.某HBVDNA试剂盒检出限为50IU/mL，若某样本复孔检测结果为42IU/mL与58IU/mL，应报告（）A.50IU/mLB.42IU/mLC.58IU/mLD.需重新检测答案：D解析：两结果差异>0.5log，且分别位于检出限两侧，需复检确认。7.下列哪种情况可导致熔解曲线出现双峰（）A.引物二聚体B.探针降解C.野生与突变型共存D.镁离子浓度过高答案：C解析：野生与突变型Tm不同，熔解曲线呈现双峰，提示存在杂合突变。8.关于UNG酶防污染，正确的是（）A.可降解含dU的RNAB.最适作用温度72℃C.需在50℃孵育2min激活D.对天然DNA无影响答案：D解析：UNG仅水解含dU的DNA，对天然dT-DNA无活性，50℃孵育为消化步骤，非激活。9.提取HPV16型DNA时，最适取材部位是（）A.宫颈脱落细胞B.血清C.尿液D.唾液答案：A解析：宫颈脱落细胞病毒载量最高，且含病变细胞，符合指南推荐。10.下列哪项属于一级生物安全危害（）A.结核分枝杆菌B.金黄色葡萄球菌C.新型冠状病毒D.肠道致病性大肠埃希菌答案：B解析：金葡菌为Ⅰ级危害，结核、新冠为Ⅲ级，致病性大肠埃希菌为Ⅱ级。11.实时荧光PCR中，若标准曲线斜率为-3.82，则扩增效率为（）A.92%B.98%C.103%D.83%答案：D解析：效率=10^(-1/斜率)-1=10^(1/3.82)-1≈0.83。12.下列哪种质控品可用于监控提取过程（）A.阴性质控B.弱阳性质控C.内标D.提取空白答案：D解析：提取空白不含样本，可监控提取环节是否引入污染。13.关于假阴性，错误的是（）A.引物突变可导致B.样本运输高温可导致C.内标扩增正常可排除D.探针淬灭基团脱落可导致答案：C解析：内标仅监控提取与扩增抑制，无法排除引物探针失效导致的假阴性。14.下列哪项不是PCR试剂冻干后优势（）A.常温运输B.减少批次差异C.延长有效期D.提高灵敏度答案：D解析：冻干不改变体系灵敏度，仅便于储运。15.数字PCR绝对定量时，分区数10000，阳性微滴850，阴性9150，则浓度为（）A.0.089copies/μLB.0.19copies/μLC.0.092copies/μLD.0.095copies/μL答案：C解析：λ=-ln(1-850/10000)=0.092。16.下列哪项属于湖南省PCR上岗证吊销情形（）A.漏报室间质评结果B.私自更改阳性报告C.未按时参加继续教育D.实验室湿度超标答案：B解析：篡改报告属重大违规，直接吊销证书。17.关于LAMP技术，正确的是（）A.需温度循环B.使用Bst酶C.需荧光探针D.产物为单链答案：B解析：LAMP为等温扩增，依赖BstDNA聚合酶链置换活性。18.下列哪种染料可抑制PCR（）A.SYBRGreenI1×B.酚红0.5×C.伊红0.1×D.结晶紫0.01×答案：D解析：结晶紫可嵌入DNA，抑制Taq酶活性。19.若阳性对照Ct值较往期提前0.8个循环，应首先排查（）A.试剂批号B.扩增仪校准C.人员操作D.标准曲线答案：B解析：Ct系统性偏移常因仪器温度或荧光校准漂移。20.下列哪项不是RNA提取关键（）A.低温操作B.快速裂解C.高盐洗涤D.紫外照射答案：D解析：紫外对RNA无保护作用，反而可能产生嘧啶二聚体。21.关于质粒标准品，错误的是（）A.需测序确认B.需线性化C.需TE缓冲液保存D.可直接用于RNA试剂盒答案：D解析：质粒为DNA，不可直接作为RNA试剂标准品。22.下列哪项可导致引物二聚体（）A.3'端互补>4bpB.退火温度高C.模板浓度过高D.延伸时间短答案：A解析：3'端互补易形成二聚体，需软件评估避免。23.关于CNV检测，最佳内参基因为（）A.GAPDHB.RNasePC.β-actinD.端粒酶基因答案：B解析：RNaseP为单拷贝，稳定性高，适合CNV校正。24.下列哪项属于湖南省PCR实验室备案必备文件（）A.仪器说明书B.人员学历证明C.生物安全承诺书D.试剂发票答案：C解析：备案需提交生物安全承诺书及实验活动风险评估表。25.若样本Ct=38，内标Ct=32，应判断（）A.扩增抑制B.低浓度阳性C.无抑制D.需稀释再测答案：C解析：内标Ct在预期范围，提示无抑制，Ct38需结合试剂盒cut-off判断。26.下列哪项可降低气溶胶污染（）A.敞开操作B.正压通风C.使用dUTP+UNGD.减少预混液答案：C解析：UNG可降解既往扩增产物，降低气溶胶污染风险。27.关于PCR仪校准，错误的是（）A.每年至少一次B.需多点温度校准C.荧光通道需校准D.可由实验室自行完成答案：D解析：温度与荧光校准需有资质机构出具报告，不可自行完成。28.下列哪项不是qPCR数据拒绝标准（）A.扩增曲线无指数期B.熔解曲线多峰C.复孔Ct差异>0.5D.标准曲线R²=0.995答案：D解析：R²≥0.99为可接受标准，0.995无需拒绝。29.关于HPV分型，正确的是（）A.16型属低危B.18型与腺癌相关C.6型与宫颈癌相关D.52型不致癌答案：B解析：18型为高危型，与宫颈腺癌高度相关。30.下列哪项可导致假阳性（）A.引物污染B.模板降解C.探针淬灭D.退火温度高答案：A解析：引物污染可形成非特异扩增，导致假阳性。31.关于室间质评，错误的是（）A.一年两次B.可补测一次C.不合格需整改D.可委托第三方检测答案：D解析：室间质评样本必须由本实验室检测，禁止外送。32.下列哪项属于PCR后处理区设备（）A.离心机B.电泳仪C.移液器D.生物安全柜答案：B解析：电泳用于产物分析，属后处理区。33.关于RNA病毒，正确的是（）A.需逆转录B.可用Taq酶直接扩增C.无需防污染D.可室温长期保存答案：A解析：RNA需逆转录为cDNA后方可PCR。34.下列哪项可降低非特异扩增（）A.降低引物浓度B.增加循环数C.降低退火温度D.减少模板量答案：A解析：降低引物浓度可减少引物二聚体及非特异结合。35.关于PCR报告，错误的是（）A.需双人审核B.可手写修改C.需注明方法学D.需附参考范围答案：B解析：报告一经生成，禁止手写修改，需电子留痕。36.下列哪项属于定量结果单位（）A.CtB.copies/mLC.阳性/阴性D.+++答案：B解析：copies/mL为定量单位，Ct为原始数据。37.关于防污染U型管，正确的是（）A.需高压后丢弃B.可敞口放置C.含0.5%次氯酸钠D.用于保存阳性产物答案：C解析：U型管含0.5%次氯酸钠，可降解DNA，防止污染。38.下列哪项可导致熔解曲线Tm升高（）A.引物短B.GC含量增加C.模板降解D.染料浓度低答案：B解析：GC含量高，氢键多，Tm升高。39.关于CNV计算，正确的是（）A.2^-ΔΔCtB.ΔCt=靶基因-内参C.需标准曲线D.仅适用于RNA答案：B解析：CNV用ΔΔCt法，ΔCt=靶基因-内参。40.下列哪项属于实验室安全标识（）A.生物危害B.保质期C.批号D.注册证号答案：A解析：生物危害标识为黄色三角形，含黑色生物符号。二、多项选择题（每题2分，共20分。每题有两个或两个以上正确答案，多选少选均不得分）41.可导致Ct值偏高的因素有（）A.模板降解B.扩增仪温度偏低C.引物浓度低D.探针淬灭答案：A、B、C解析：模板降解、温度偏低、引物不足均导致扩增延迟；探针淬灭使荧光降低，但不影响Ct。42.关于RNA提取，正确的是（）A.需DEPC处理耗材B.可加入RNase抑制剂C.需75%乙醇洗涤D.可-20℃长期保存答案：A、B、C解析：RNA需-70℃保存，-20℃易降解。43.下列属于PCR实验室个人防护装备（）A.护目镜B.乳胶手套C.N95口罩D.拖鞋答案：A、B、C解析：拖鞋非强制，需专用鞋即可。44.关于内标，正确的是（）A.可监控提取B.可监控扩增抑制C.需与靶基因相同长度D.需相同引物答案：A、B解析：内标无需相同长度或引物，仅需共扩增。45.下列哪些情况需重新提取（）A.提取空白阳性B.内标无扩增C.样本浓度过高D.阴性质控阳性答案：A、B、D解析：空白及阴性质控阳性提示污染；内标无扩增提示抑制或失败；浓度过高可稀释再测。46.关于PCR防污染，正确的是）A.分区操作B.使用dUTP+UNGC.定期紫外照射D.正压通风答案：A、B、C解析：扩增区需负压，非正压。47.下列哪些属于定量PCR软件分析参数（）A.基线设置B.阈值设定C.熔解曲线D.标准曲线答案：A、B、D解析：熔解曲线为定性分析，非定量参数。48.关于室间质评样本，正确的是（）A.需盲样检测B.需随常规样本一起C.可多次检测D.需记录环境条件答案：A、B、D解析：室间质评样本仅可检测一次，禁止重复。49.下列哪些属于PCR试剂盒验收内容（）A.外观检查B.阴性/阳性对照检测C.灵敏度验证D.运输温度记录答案：A、B、C、D解析：四项均为验收必查。50.关于CNV检测，正确的是（）A.需双通道B.需内参基因C.需标准曲线D.可用外周血答案：B、D解析：CNV可用ΔΔCt法，无需标准曲线；单通道即可；外周血为常用样本。三、判断题（每题1分，共10分。正确打“√”，错误打“×”）51.PCR产物可长期室温保存。（×）52.实时荧光PCR无需电泳确认。（√）53.内标扩增失败可报告阴性。（×）54.实验室可共用移液器，只要更换吸头。（×）55.阳性报告需双人签字。（√）56.室间质评不合格可补测一次。（√）57.提取RNA可室温放置2h。（×）58.标准曲线R²需≥0.99。（√）59.探针降解可导致假阴性。（√）60.实验室可储存食品。（×）四、填空题（每空1分，共20分）61.实时荧光PCR定量公式为：样本浓度=10^[(Ct-b)/m]×稀释倍数，其中m代表________，b代表________。答案：斜率，截距62.湖南省PCR实验室备案有效期为________年，到期前________个月提交延续申请。答案：5，663.提取RNA时，常用________试剂裂解细胞，________方法去除蛋白质。答案：TRIzol，酚氯仿64.数字PCR将样本分割为________个微反应，通过________原理实现绝对定量。答案：20000，泊松分布65.引物设计时，3'端最后5个碱基需避免________，以减少________。答案：连续G或C，非特异扩增66.熔解曲线分析中，Tm值指________对应的温度，其高低与________含量正相关。答案：荧光下降50%，GC67.室间质评评分公式为：S1=________，S2=________，总评分=(S1+S2)/2。答案：|你室结果-靶值|/允许偏差，你室log值-靶值log值68.临床PCR报告需包含：样本信息、________、________、参考范围、检测限。答案：方法学、结果与单位69.生物安全柜高效过滤器对________μm颗粒过滤效率≥________%。答案：0.3，99.9770.核酸浓度测定A260/A280比值理想范围为________，A260/A230应大于________。答案：1.8-2.0，2.0五、简答题（每题10分，共30分）71.简述实时荧光PCR假阴性常见原因及纠正措施。答案：（1）样本因素：采集不当、运输高温、保存超时。纠正：规范采样，冷链运输，-70℃保存。（2）提取失败：裂解不足、抑制物残留。纠正：增加裂解时间，使用内标监控，稀释样本。（3）试剂失效：探针降解、酶失活。纠正：更换试剂，验证阴阳对照。（4）扩增异常：仪器温度漂移、程序错误。纠正：定期校准，比对多台仪器。（5）引物探针突变：病毒变异导致不匹配。纠正：更新引物探针，设计简并碱基。（6）操作错误：加样遗漏、标签错误。纠正：双人复核，使用条码系统。72.叙述PCR实验室“三区两缓”压差设置原则及日常监测方法。答案：压差设置：试剂准备区正压≥5Pa→缓冲区正压≥2Pa→标本制备区负压≥-10Pa→缓冲区负压≥-5Pa→扩增区负压≥-10Pa。原则：单向流，防止扩增子回流。监测：每日开工前用微压差计测量，记录于《压差日志》；若压差<设定值50%，立即停机，通知工程部检查风机、过滤器；每月由第三方校准一次，出具报告；压差异常时，用烟雾法检查气流方向，确保无逆流。73.说明数字PCR与实时荧光PCR在HBVDNA定量中的差异及应用场景。答案：差异：（1）原理：数字PCR为终点法，绝对定量无需标准曲线；实时PCR需标准曲线，相对定量。（2）灵敏度：数字PCR可检测≤5copies/反应，实时PCR一般≥50copies/mL。（3）抗抑制：数字PCR对抑制剂耐受高，适合复杂样本；实时PCR易受抑制。（4）成本：数字PCR试剂耗材贵，通量低；实时PCR高通量，成本低。（5）时间：数字PCR需分区、成像，耗时4h；实时PCR2h完成。应用场景：数字PCR用于标准品定值、极低载量监测、基因治疗随访；实时PCR用于常规临床诊断、疗效评估、大规模筛查。两者可互补，如实时PCR检测>100IU/mL，数字PCR用于<100IU/mL或标品溯源。六、案例分析题（每题20分，共20分）74.某实验室HBVDN