广东省2026届生物高三上期末联考试题含解析

广东省2026届生物高三上期末联考试题请考生注意：1．请用2B铅笔将选择题答案涂填在答题纸相应位置上，请用0．5毫米及以上黑色字迹的钢笔或签字笔将主观题的答案写在答题纸相应的答题区内。写在试题卷、草稿纸上均无效。2．答题前，认真阅读答题纸上的《注意事项》，按规定答题。一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)1．下列关于人类“镰刀型细胞贫血症”、“特纳氏综合症”和“葛莱弗德氏综合症”的叙述，正确的是（）A．三种病都是遗传物质改变所引起的B．镰刀型细胞贫血症的直接原因是基因中发生了碱基对的替换C．新生婴儿和儿童中容易表现这三种疾病D．上述变异都使得细胞里面的基因种类和数目发生了改变2．光合作用是生物界最基本的同化作用，下列相关叙述不正确的是A．流经森林生态系统的总能量是该生态系统的生产者固定的太阳能B．净光合速率为零时，蓝藻细胞产生ATP的场所主要有线粒体和叶绿体C．光反应产生的ATP是暗反应中将CO2合成糖类的能源物质D．用H218O培养小球藻，一段时间后可在其产生的糖类和氧气中检测到18O3．某生物兴趣小组观察了几种生物不同分裂时期的细胞，并根据观察结果绘制出如下图形。下列与图形有关的说法正确的是()①甲图所示细胞处于有丝分裂后期，在此时期之前细胞中央出现了赤道板②甲图所示细胞中，着丝点分裂后正常形成的2个子染色体携带遗传信息相同③乙图所示细胞可能处于减数第一次分裂后期，此阶段发生同源染色体的分离④乙图所示细胞中某一极的染色体数目可能为2N⑤丙图结果可能来自于植物的雄蕊和雌蕊以及动物精巢等部位细胞⑥如果丙图表示精巢内的几种细胞，则C组细胞可发生联会并产生四分体A．②③⑤ B．①④⑥ C．②③⑤⑥ D．②③④⑤⑥4．在细胞的生命历程中，会出现增殖、分化、衰老、凋亡等现象。下列叙述正确的是（）A．端粒是位于染色体两端的特殊DNA序列，随着细胞的衰老端粒逐渐延长B．胰岛B细胞中只有与胰岛素合成有关的基因处于活动状态C．细胞的增殖过程既受细胞核的控制，也受温度等条件的影响D．被病原体感染细胞的清除要依靠细胞免疫，与细胞凋亡无关5．如图表示某家族患甲种遗传病（显性基因为A，隐性基因为a）和乙种遗传病（显性基因为B，隐性基因为b）的系谱图。现已查明Ⅱ6不携带致病基因。下列叙述正确的是（）A．甲、乙两病的致病基因分别位于常染色体和X染色体B．就乙病而言，若Ⅱ3和Ⅱ4再生一个健康的孩子，这个孩子是杂合子的概率为1/2C．Ⅱ5的基因型是BbXAXa或者BBXAXaD．Ⅲ9可能只产生基因型为BXa、BY的两种配子6．某蛋白质由m条肽链、n个氨基酸组成。该蛋白质至少有氧原子的个数是（）A．n-m B．n-2mC．n+m D．n+2m7．某科研小组的工作人员通过用不同浓度的秋水仙素对大蒜(二倍体)鳞茎生长点进行不同时间的处理，研究了不同处理对大蒜根尖细胞染色体加倍率(某一分裂组织或细胞群中染色体数目加倍细胞所占的百分数)的影响，其实验结果如图所示，据图判断，下列叙述正确的是A．秋水仙素处理后的根尖细胞均为四倍体细胞B．染色体加倍率与秋水仙素浓度和处理时间长短有关C．当秋水仙素浓度为0.03%时，处理时间越长加倍率越高D．本实验中的自变量为秋水仙素浓度，无关变量为处理时间8．（10分）澳洲某小岛上生活着两种棕榈科植物。研究认为在200万年前，它们的共同祖先迁移到该岛时，一部分生活在pH较高的石灰岩上，开花较早；另一部分生活在pH较低的火山灰上，开花较晚。由于花期不同，不能相互授粉，经过长期演变，最终形成两个不同的物种。下列有关叙述正确的是（）A．这两个物种的形成是定向变异的结果B．最初迁移到该岛时，两个种群的基因库差别较大C．花期不同阻碍了基因交流，最终形成了生殖隔离D．若环境条件保持稳定，种群的基因频率不会发生变化二、非选择题9．（10分）新型冠状病毒和SARS病毒都会造成肺炎。下图是SARS-CoVS蛋白特异性单克隆抗体的制备过程。回答下列问题：（1）若只考虑细胞两两融合，图中甲理论上有________________种。（2）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。鼠的淋巴细胞有上述两种途径，但一般不分裂增殖：鼠的骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。根据该原理，在含甲的混合培养液中添加氨基嘌呤______________（填能或不能）筛选出A，原因是_____________________________。（3）在SARS-CoVS蛋白特异性单克隆抗体的制备过程中，需要用到动物细胞培养和动物细胞融合技术。一般来说，动物细胞培养需要的条件有__________________（至少答出两点）；诱导动物细胞融合的方法有_________________________（至少答出两种）。（4）SARS-CoVS蛋白单克隆抗体______________（填能或不能）对新型冠状病毒发挥作用，理由是__________________________________。10．（14分）近日，中宣部授予甘肃省古浪县八步沙林场“六老汉”三代人治沙造林先进群体“时代楷模”称号。38年来，以“六老汉”为代表的八步沙林场三代职工治沙造林1．7万亩，管护封沙育林草面积2．6万亩，为生态环境治理作出了重要贡献。（1）调查发现，古浪县北部沙区野生植物有白刺、苦豆草、黄沙蒿、赖草等，星块状或团簇状分布，这主要体现了生物群落的__________结构，区分该群落与其他群落的重要特征是________________。（2）苦豆草可入药，常用于治疗急性菌痢和肠炎，这体现了生物多样性的__________价值，为调查该地区苦豆草的种群密度常用的方法是___________，这种调查方法取样的关键是要做到_____________。（3）随着“六老汉”三代人治沙造林，该地区生态系统稳定性不断提高。生态系统稳定性是指________。为此，一方面要控制对生态系统的干扰程度，对生态系统的利用应该适度，不应超过生态系统的______；另一方面，对人类利用强度较大的生态系统应实施相应的____________的投入，保证生态系统内部结构与功能的协调。11．（14分）人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，肝硬化、肝癌多从乙肝发展而来。接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。下图为“乙肝基因工程疫苗”的生产和使用过程。质粒中lacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色。（1）过程①需要用到限制酶和_____________酶。根据质粒和目的基因所在DNA上酶切位点的分布情况，如果过程①用一种限制酶应选_____________，如果用两种限制酶应选_____________。（2）在该项目中青霉素抗性基因作为_____________基因；目的基因的具体功能是_____________。（3）在培养大肠杆菌的通用培养基中还应额外加入青霉素和X-gal，培养一段时间挑选出_____________（蓝色/白色）的菌落进一步培养获得大量目的菌。（4）血源性“乙型肝炎疫苗”是取用乙肝病毒感染者的血液，用高速离心提纯血液中的乙肝病毒，之后再灭活，制成乙肝疫苗，具有一定的感染风险。用基因工程疫苗接种比血源性疫苗更安全，试从疫苗的结构特点解释原因：__________________________。12．有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。科研人员通过人工筛选获得高效的苯磺隆降解菌，将其扩大培养后投入污染土壤中，可将土壤中的苯磺隆降解。请回答下列问题：（1）欲选择性获得能降解苯磺隆的降解菌，可在被有机农药苯磺隆污染的土壤中取样，并在含有_______、________及水和无机盐等的基本培养基上添加_______进行选择培养。（2）若要测定培养液中选定菌种的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用________方法统计活菌数目。（3）将筛选的苯磺隆降解菌固定在一定的空间内定殖于土壤中能提高降解效率，固定苯横隆降解菌的一般方法为包埋法，不使用化学结合法和物理吸附法的原因是__________。（4）研究人员从苯磺隆降解菌中分离出苯磺隆降解酶，分离该降解酶的常用方法有凝胶色谱法和__________。凝胶色谱法分离蛋白质的原理是根据____________进行分离。

参考答案一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)1、A【解析】【分析】基因重组基因突变染色体变异本质基因的重新组合产生新的基因型，使性状重新组合基因的分子结构发生了改变，产生了新的基因，出现了新的性状染色体组成倍增加或减少，或个别染色体增加或减少，或染色体内部结构发生改变发生时期及其原因减Ⅰ四分体时期由于四分体的非姐妹染色单体的交叉互换和减Ⅰ后期非同源染色体的自由组合个体发育的任何时期和任何细胞。DNA碱基对的增添、缺失或改变体细胞在有丝分裂中，染色体不分离，出现多倍体；或减数分裂时，偶然发生染色体不配对不分离，分离延迟等原因产生染色体数加倍的生殖细胞，形成多倍体【详解】A、人类“镰刀型细胞贫血症”、“特纳氏综合症”和“葛莱弗德氏综合症”都是遗传病，三种病都是遗传物质改变所引起的，A正确；B、镰刀型细胞贫血症的直接原因是氨基酸种类的改变，B错误；C、遗传病的表现受基因型控制，新生婴儿和儿童发病率受亲本基因型决定，与幼年老年无关，C错误；D、“特纳氏综合症”和“葛莱弗德氏综合症”属于染色体异常遗传病，细胞里面的基因种类和数目未发生了改变，D错误。故选A。2、B【解析】

1、有氧呼吸的第一、二、三阶段的场所依次是细胞质基质、线粒体基质和线粒体内膜。有氧呼吸第一阶段是葡萄糖分解成丙酮酸和[H]，合成少量ATP；第二阶段是丙酮酸和水反应生成二氧化碳和[H]，合成少量ATP；第三阶段是氧气和[H]反应生成水，合成大量ATP。2、光合作用的光反应阶段（场所是叶绿体的类囊体膜上）：水的光解产生[H]与氧气，以及ATP的形成。光合作用的暗反应阶段（场所是叶绿体的基质中）：CO2被C5固定形成C3，C3在光反应提供的ATP和[H]的作用下还原生成糖类等有机物。【详解】A、生产者固定的太阳能总量是流经该生态系统的总能量，A正确；

B、蓝藻是原核生物，没有线粒体和叶绿体，B错误；

C、光反应产生的ATP和NADPH是碳反应中将二氧化碳还原为糖的能源物质，C正确；

D、用H218O培养小球藻，在叶绿体中进行光合作用，进行水的光解形成氧气和[H]，则最先检测到含有放射性的产物是氧气。氧气可参与有氧呼吸的第二阶段，在CO2中可检测到被标记的O，再通过光合作用的暗反应阶段，转移到糖类等有机物中，D正确。

故选B。【点睛】本题主要考查了光合作用和呼吸作用的过程。考查了学生运用所学知识分析和解决问题的能力。光合作用和呼吸作用过程是考查的重点和难点。光合作用合成有机物，而呼吸作用分解有机物。光合作用为呼吸作用提供有机物和氧气，呼吸作用为光合作用提供二氧化碳和水。3、A【解析】

根据题意和图示分析可知：图甲细胞中含有同源染色体，着丝点分裂，染色体移向细胞两极，处于有丝分裂后期；图乙中染色体、染色单体、DNA之间的比例为1：2：2，并且染色体数为2N，因此可能处于有丝分裂的前期或中期、减数第一次分裂的前期、中期后期。

图丙中，A组细胞中染色体数为N，即染色体数目减半，可以表示减二的前期、中期、末期；B组细胞中染色体数目为2N，可以表示有丝分裂的间期、前、中、末期，减Ⅰ时期和减Ⅱ后期；C组细胞中染色体数目为4N，为体细胞的两倍，只可能表示有丝分裂的后期。【详解】①甲图所示细胞处于有丝分裂后期，在此时期之前，染色体排列在细胞中央的赤道板上，但赤道板并不是真实存在的结构，①错误；②由于DNA的复制是半保留复制，所以正常情况下姐妹染色单体上的遗传信息是相同的，故甲图所示细胞中，着丝点分裂后正常形成的2个子染色体携带遗传信息相同，②正确；③乙图所示细胞中DNA含量为4N，染色体数与体细胞中相同，为2N，可能处于减数第一次分裂后期，此阶段发生同源染色体的分离，③正确；④乙图细胞含有染色单体，可表示减数第一次分裂后期，移向一极的染色体应为体细胞的一半。若细胞中某一极的染色体数目为2N，则只能表示有丝分裂后期，而有丝分裂后期不含姐妹染色单体，④错误；⑤丙图细胞中染色体数最多为4N，可表示有丝分裂后期，染色体数最少为N，说明还可以发生减数分裂，故丙图结果可能来自于植物的雄蕊和雌蕊以及动物精巢等部位细胞，⑤正确；⑥C组细胞染色体数为4N，只能表示有丝分裂后期，不会发生联会并产生四分体，⑥错误。综上分析，A正确，BCD错误。故选A。【点睛】本题考查了有丝分裂和减数分裂的相关知识，要求考生能够识记有丝分裂和减数分裂过程中的DNA、染色体、染色单体等数量变化，能够根据数量确定分裂时期，并能够识记相关时期的细胞特点，进而对选项逐项分析。4、C【解析】

1、细胞分化是指在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态，结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。细胞分化的实质：基因的选择性表达。2、细胞凋亡是由基因决定的细胞编程序死亡的过程。细胞凋亡是生物体正常的生命历程，对生物体是有利的，而且细胞凋亡贯穿于整个生命历程。细胞凋亡是生物体正常发育的基础、能维持组织细胞数目的相对稳定、是机体的一种自我保护机制。在成熟的生物体内，细胞的自然更新、被病原体感染的细胞的清除，是通过细胞凋亡完成的。【详解】端粒是位于染色体两端的特殊DNA序列，随着细胞的衰老端粒逐渐缩短，A错误；胰岛B细胞中除了与胰岛素合成有关的基因处于活动状态外，还有多种基因也处于活动状态，如细胞呼吸酶基因、ATP合成酶基因等，B错误；细胞的增殖过程既受细胞核的控制，也受温度等条件的影响，C正确；被病原体感染细胞的清除要依靠细胞免疫，属于细胞凋亡，D错误。故选C。【点睛】注意：由于基因的选择性表达，只有胰岛B细胞可以表达胰岛素基因，但该细胞还可以表达其他基因，如呼吸酶基因等。5、D【解析】

根据题意和图示分析可知：Ⅱ3号和Ⅱ4号正常，后代女儿Ⅲ8号患乙病，说明乙病是常染色体隐性遗传病；Ⅱ5号和Ⅱ6号正常，Ⅲ9号患甲病，说明甲病属于隐性遗传病，由于Ⅱ6不携带致病基因，儿子患病，因此甲病是伴X隐性遗传病。【详解】A、根据分析可知，甲、乙两病的致病基因分别位于X染色体和常染色体上，A错误；B、就乙病而言，由于Ⅲ8号的基因型为bb，所以Ⅱ3和Ⅱ4的基因型均为Bb，若Ⅱ3和Ⅱ4再生一个健康的孩子，这个孩子是杂合子的概率为2/3，B错误；C、2号基因型为bb，Ⅲ9号基因型为XaY，所以Ⅱ5的基因型是BbXAXa，C错误；D、Ⅱ5的基因型是BbXAXa，Ⅱ6不携带致病基因，基因型为BBXAY，所以Ⅲ9的基因型为BBXaY或BbXaY，当基因型为BBXaY时，只产生基因型为BXa、BY的两种配子，D正确。故选D。【点睛】本题的知识点是人类遗传病的类型和致病基因位置判断，伴X性隐性遗传与常染色体隐性遗传的特点，根据遗传系谱图中的信息写出相关个体的基因型，并推算后代的患病概率．解此类题目的思路是，一判显隐性，二判基因位置，三写出相关基因型，四进行概率计算。6、C【解析】

由氨基酸的结构通式可知一个氨基酸至少有两个O，形成蛋白质缩合过程中要脱掉水，2n-(n-m)=n+m。C正确，ABD错误；7、B【解析】

秋水仙素处理后的根尖细胞只能有少数细胞为四倍体细胞，A错误；从图中可以看出，染色体加倍率与秋水仙素浓度和处理时间长短有关，B正确；当秋水仙素浓度为0.03%时，2d与6d处理时间不同，结果相同，C错误；实验中的自变量为秋水仙素浓度与时间，D错误。【点睛】本题考查实验结果分析的知识。意在考查能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，能用文字、图表以及数学方式等多种表达形式准确地描述生物学方面的内容的能力。8、C【解析】

变异在环境变化之前已经产生，环境只是起选择作用，不是影响变异的因素，不要夸大其作用，通过环境的选择将生物个体中产生的不定向的有利变异选择出来，其余变异遭到淘汰．只要基因频率改变，生物就进化，只要生物进化，基因频率一定改变．物种是自然状态下能够交配并产生可育后代的一群生物，一个物种可能在不同地点和时间形成不同的种群；不同物种之间一般是不能相互交配的，即使交配成功，也不能产生可育的后代。【详解】A、变异是不定向的，A错误；B、最初迁移到该岛时，两个种群的基因库差别不大，B错误；C、花期不同阻碍了基因交流，最终形成了生殖隔离，形成两个不同的物种，C正确；D、环境条件保持稳定时，种群的基因频率也会发生变化，如基因突变等原因，D错误。故选C。二、非选择题9、3能杂交瘤细胞DF途径被氨基嘌呤阻断后不能合成DNA，但可通过S途径合成DNA，不断分裂增殖无菌、无毒环境，营养，温度、PH，气体环境PEG、灭活的病毒、电激不能新型冠状病毒与SARS病毒的抗原不同，SARS-CoVS蛋白单克隆抗体，只能与SARS-CoVS蛋白发生特异性结合【解析】

图示单克隆抗体的制备过程是：对小鼠注射抗原SARS-CoVS蛋白，从小鼠的脾脏中获取经过免疫的B细胞（即效应B细胞），将经过免疫的B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。诱导动物细胞融合的方法有：物理法（离心、振动）、化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活的病毒）；单克隆抗体的两次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）；②筛选出能够产生特异性抗体的细胞群；两次抗体检测：专一抗体检验阳性。【详解】（1）只考虑细胞两两融合，甲理论上有3种融合细胞，包括两个骨髓瘤细胞融合的类型，两个已免疫的B细胞融合的类型，一个骨髓瘤细胞与一个已免疫B细胞融合的类型。（2）在含甲的混合培养液中添加氨基嘌呤后，已免疫的B细胞及其彼此融合的细胞能利用S途径进行DNA合成，但是无法进行分裂增殖，骨髓瘤细胞的D合成途径被阻断，所以骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，只有骨髓瘤细胞与已免疫的B细胞融合形成杂种细胞能利用S途径合成DNA并进行分裂增殖从而存活下来，所以在含甲的混合培养液中添加氨基嘌呤能筛选出杂交瘤细胞A。（3）动物细胞培养的条件包括以下几点：①无毒、无菌的环境；②营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等）；③血清和血浆(提供细胞生长必须的营养成份)；④适宜的温度和pH等；诱导动物细胞融合的方法有物理诱导法、化学试剂诱导法和生物诱导法。（4）抗体具有特异性，针对特定的病毒人体会产生相对应的抗体，故相应的SARS-CoVS蛋白单克隆抗体只会对SARS这种病毒起作用，不能对新型冠状病毒发挥作用。【点睛】解答本题的关键是掌握单克隆抗体的制备过程及其原理，能够利用动物细胞培养和细胞融合技术对相关问题进行解释，并能理解单克隆抗体的特性。10、水平群落的物种组成直接样方法随机取样生态系统所具有的保持或恢复自身结构和功能相对稳定的能力自我调节能力物质和能量【解析】

3．生物群落的结构（3）垂直结构：指群落在垂直方向上的分层现象。原因：植物的分层与对光的利用有关，群落中的光照强度总是随着高度的下降而逐渐减弱，不同植物适于在不同光照强度下生长。如森林中植物由高到低的分布为：乔木层、灌木层、草本层、地被层；动物分层主要是因群落的不同层次提供不同的食物，其次也与不同层次的微环境有关。如森林中动物的分布由高到低为：猫头鹰（森林上层），大山雀（灌木层），鹿、野猪（地面活动），蚯蚓及部分微生物（落叶层和土壤）。（4）水平结构：指群落中的各个种群在水平状态下的格局或片状分布。原因：由于在水平方向上地形的变化、土壤湿度和盐碱度的差异、光照强度的不同、生物自身生长特点的不同，以及人与动物的影响等因素，不同地段往往分布着不同的种群，同一地段上种群密度也有差异，它们常呈镶嵌分布。4．生态系统之所以能维持相对稳定，是由于生态系统具有自我调节能力，生态系统自我调节能力的，基础是负反馈。物种数目越多，营养结构越复杂，自我调节能力越大；生态系统的稳定性具有相对性。当受到大规模干扰或外界压力超过该生态系统自身更新和自我调节能力时，便可能导致生态系统稳定性的破坏、甚至引发系统崩溃。【详解】（3）群落的水平结构是指群落中的各个种群在水平状态下的格局或片状分布。同一个区域，各个种群呈块状或团簇状分布，这主要体现了生物群落的水平结构。区分该群落与其他群落的重要特征是群落的物种组成。（4）药用价值是生物多样性的直接价值，调查植物一般采用样方法，要做到随机取样。（3）生态系统稳定性是指生态系统所具有的保持或恢复自身结构和功能相对稳定的能力。对生态系统的利用应该适度，不应超过生态系统的自我调节能力，否则容易导致生态系统稳定性下降；对人类利用强度较大的生态系统应实施相应的物质和能量的投入，保证生态系统内部结构与功能的协调。【点睛】本题主要考查种群密度的调查方法、群落的空间特征、生态系统的稳定性等知识，要求考生识记生态系统稳定性的概念，掌握提高生态系统稳定性的措施；明确调查种群密度的各种方法，能结合所学的知识准确答题。11、DNA连接BamHIBamHI和EcoRI标记控制病毒蛋白外壳的合成白色该疫苗不含遗传物质，不会出现病毒感染和增殖【解析】

基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因—DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA—分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质—抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。图中表示的是通过基因工程获得疫苗和产生相应抗体的过程图，过程①表示基因表达载体的构建，过程②表示将目的基因导入受体细胞，过程③表示目的基因的表达。【详解】（1）过程①表示基因表达载体的构建，需要用到限制酶和DNA连接酶。根据质粒和目的基因所在DNA上酶切位点的分布情况，有两种选择限制酶的方案，只选择BamHⅠ既能将目的基因切下，也能切割质粒，在获取目的基因和切割质粒时，使目的基因和质粒两端产生相同的黏性末端，而在连接酶作用会出现自身环化、目的基因自身与自身连接、质粒自身与自身连接、目的基因与质粒连接多种情况，需要筛选；用两种限制酶切割，质粒和目的基因两端不会形成相同黏性末端，在连接酶作用下不会发生环化还可以防止反向连接，最终在连接酶作用下只会出现目的基因与质粒成功重组和没有进行重组的质粒，如果过程①用一种限制酶则应选BamHI，如