JJF(京) 171-2025 便携式恒温扩增核酸分析仪校准规范

北 京 市 地 方 计 量 技 术 规 范JJF（京）171—2025便携式恒温扩增核酸分析仪校准规范CalibrationSpecificationforPortableIsothermalAmplificationNucleicAcidAnalyzers2025-06-13发布 2025-07-01实施北京市市场监督管理局 发布JJF(京)171—2025JJF(京)171—JJF(京)171—2025CalibrationSpecificationforPortableIsothermalAmplificationNucleicAcidAnalyzers归口单位：北京市市场监督管理局主要起草单位：北京市计量检测科学研究院本规范委托北京市计量检测科学研究院负责解释JJF(京)171—2025本规范主要起草人：赵雨佳（北京市计量检测科学研究院）宋丽萍（北京市食品检验研究院）张 越北京大兴计量测所）参加起草人：梁亮（北京市计量检测科学研究院）李冉（北京市计量检测科学研究院）刘然（北京市计量检测科学研究院）范培蕾（北京市计量检测科学研究院）IIJJG171—2025目 录引言 （II）1范围 （2）2引用文件 （2）3术语 （2）4概述 （2）计量特性 （1）校准条件 （2）环境条件 （2）测量标准及其他设备 （2）校准项目和校准方法 （2）温度示值误差 （3）温度均匀度 （4）温度波动度 （4）荧光强度重复性或浊度重复性 （4）荧光强度线性或浊度线性 （5）样本检测重复性 （5）校准结果表达 （5）复校时间间隔 （6）附录A核酸标准物质、荧光溶液以及浊度标准物质配制及使用示例 （7）附录B示值误差的不确定度评定示例 （8）附录C校准记录格（推荐） （10）附录D校准证书内页格（推荐） （12）IIIIJJF(京)171—2025引 言JJF1071《国家计量校准规范编写规则》、JJF1001《通用计量术语及定义》、JJF1059.1《测量不确定度评定与表示》共同构成支撑本规范制修订工作的基础性系列规范。参考了JJF1527-2015《聚合酶链式反应分析仪校准规范》和GB/T41407-2022《微流控芯片核酸恒温扩增仪技术要求》的相关内容。本规范为首次发布。PAGEPAGE2便携式恒温扩增核酸分析仪校准规范范围本规范适用于便携式恒温扩增核酸分析仪的校准。引用文件JJF1527聚合酶链式反应分析仪校准规范GB/T41407微流控芯片核酸恒温扩增仪技术要求凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用本规程；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规程。术语GB/T41407界定的以及下列术语和定义适用于本规范。nucleicacidisothermalamplification由常温升温至特定温度后，在该温度下进行核酸体外扩增的过程。[来源：GB/T41407-2022,3.1]timeofexponentamplificationcrossingpoint在实时监测核酸样本扩增过程中，扩增产物产生的荧光信号（或浊度信号）达到指数级扩增阈值经过的时间。[来源：GB/T41407-2022,3.7]概述便携式恒温扩增核酸分析仪（）是基于核酸恒温扩增原理，在模板（待测样品、聚合酶、引物等存在的条件下，在特定的扩增温度下，进行核酸序列的特（荧光强度或浊度引起的变化便携式恒温扩增核酸分析仪主要由控制系统、电源系统、温控系统和检测系统等组成。计量特性计量特性指标见表1。表1 便携式恒温扩增核酸分析仪计量特性计量特性技术指标温度示值误差±0.5℃温度均匀度≤1.0℃温度波动度±0.5℃荧光强度重复性或浊度重复性≤10%荧光强度线性或浊度线性푟≥0.990样本检测重复性*≤10%注：1、以上技术指标不适用于合格判别，仅供参考。*2、对于只检测RNA的仪器，该项目可选做。校准条件环境条件6.1.1（15～30）℃。6.1.2（20～85）RH。测量标准及其他设备温度测量仪：由若干个（35个、7个）（012）℃，分辨力≥0.1℃，扩展不确定度≤0.1℃（k2。核酸标准物质：校准时应采用经计量行政部门批准发布的核酸标准物质，其特性量值≥102opis/L，相对扩展不确定度≤10（k2。浊度标准物质：校准时应采用经计量行政部门批准发布的浊度标准物质，浊度测量5（k2。荧光标准溶液：根据仪器的荧光通道类型，选择具有合适发射和激发波长的荧光物A。0.01mg，I级。秒表：最小分度值≤0.01s，最大允许误差为±0.5s/d。10μL、100μL、1000。6.2.8超纯水：电阻率≥18.2Ω·（25℃。校准项目和校准方法PAGEPAGE3JJF(京)171—2025温度示值误差489678485个测温点；当仪2832个，应选择1个孔位，进行5次重复测量。温度传感器排布位置可参考图1。1E）48F）96设定分析仪的温度（应与常用的恒温扩增温度一致，运行仪器，待被校分析仪的温度稳定后，读取温度传感器的温度测量值，按公式（1）计算温度示值误差。式中：

d=푇s−

（1）∆푇푑——温度示值误差，℃；푇s——温度设定值，℃；푐——温度均匀度7.1要求进行温度传感器布置和仪器温度设置，待被校分析仪温度达到设定温度，且温度稳定后，读取所有温度传感器的温度测量值，按公式（2）计算温度均匀度，选最∆푇u=푇max−푇min （2）式中：∆푇푢——温度均匀度，℃；푇max——所有测温传感器测量值的最大值，℃；푇min——所有测温传感器测量值的最小值，℃。温度波动度7.1要求进行温度传感器布置和仪器温度设置，待被校仪器温度达到设定温度，且10min1min记录一次所有温度传感器的平均值，作为本次记录的温度测量值，共记录10次，按公式（3）计算温度波动度。式中：∆푇푤——

w

=±2

（3）x——10n——10荧光强度重复性或浊度重复性配制合适浓度的荧光标准溶液或合适浊度的浊度标准溶液，使得仪器测量值处于仪器测量范围的中间值附近，重复测量6次，记录仪器的测量值，按公式（4）计算仪器测量值的相对标准偏差作为重复性。푅푆퐷퐼=

1×100% （4）푛푛1 푖 푛−1（퐼×̅式中：푅푆퐷퐼——仪器测量值的相对标准偏差，%；퐼푖——第푖次仪器的测量值，单位采用仪器自身物理量单位；퐼̅——6次仪器测量值的平均值，单位采用仪器自身物理量单位。PAGEPAGE5JJF(京)171—2025荧光强度线性或浊度线性将稀释的系列荧光标准溶液或浊度标准溶液（至少5个梯度使得测量值均匀覆盖仪器测量范围）进行测量，每个梯度重复测量3次，将标准溶液的标准值与仪器的测量值进行线性回归，按公式（5）计算其线性回归系数푟。푛 푋푖−푖푛1푋푖푛1푋푖2푛 푖1

（5）式中：푟——线性相关系数；푖——第n/g；——标准值的平均值，nggU；푖——第푖——样本检测重复性将核酸标准物质稀释到（100~1000）copies/μL6次，记录其指数级扩增拐点时间，按公式（6）计算其相对标准偏差作为样本检测重复性。푅푆퐷푡=

1×100% （6）푛푛1 푖 푛−1（푡×̅式中：푅푆퐷푡——푖——第次样本指数级扩增拐点时间的平均值，min。n——校准结果表达校准结果应在校准证书上反映。校准证书应至少包括以下信息：；复校时间间隔建议复校时间间隔一般不超过一年。复校时间间隔的长短是由仪器的使用情况、使用者、仪器本身质量等因素决定，送校单位也可根据实际使用情况自主决定复校时间间隔。如果仪器经维修、更换重要部件或对仪器性能有怀疑时，应重新校准。PAGEPAGE7附录A

JJF(京)171—2025核酸标准物质、荧光溶液以及浊度标准物质配制及使用示例核酸标准物质的配制TE（10mmol/LTris-HCl，1mmol/LEDTA，pH=8.0）作为稀释液将核酸标准物质稀释至（100~1000）copies/μL荧光标准溶液的配制1.0mg5-5M琥珀酰亚胺酯1gDMSO1mg/g的荧光标准溶液母液。然后将荧光标准溶液母液梯度100mg1mg/g900mg中充分混匀将溶液稀释至0.1然后称取100mg 0.1mg/g的荧光溶液加入到900mgDMSO中充分混匀将溶液稀释至0.01mg/g作为工作标准溶液待用使用时取适量0.01mg/g的工作标准溶液用Tris-HCl缓冲溶（10mmol/L作为稀释液，分别稀释至100ng/g、80ng/g、60ng/g、40ng/g和20ng/g作为荧光标准溶液。在用于重复性检测及线性检测时，浓度应根据仪器测定范围进行调整。浊度标准溶液的配制0.2μm（或电渗析水、离子交换水2次以上，所获得的滤液即为零浊度水。其次，用零浊度水将浊比如2000NTU1000NTU500NTU、250NTU4000NTU、2000NTU、1000NTU、500NTU、250NTU系列梯度的浊度溶液用于线性检测。附录B温度示值误差的不确定度评定示例概述合紧密。设定仪器的温度（一般应与仪器常用的恒温扩增温度一致，运行仪器，待分析测量模型式中：

∆푇d=s−

（1）∆푇푑——温度示值误差，℃；푇s——温度速设定值，℃；푐——不确定度来源测量重复性引入的不确定度푢1(푖；标准温度传感器引入的不确定度标准不确定度评定B.4.1重复性引入的标准不确定度푢1(푖)

。푠。在温度测量期间，读取测温探头的数据，见表B.1，计算其极差푠푇。表B.1重复性引入不确定数据设定温度/℃123456060.260.260.160.160.1根据测量结果计算，푠푇=푇max−푇min=60.2℃−60.1℃=0.04℃，重复性引入的不确定度푢1

s)푛=푠s)푛

Cn5℃=0.02°C5

2.33标准温度传感器引入的标准不确定度

。푠。标准温度传感器校准不确定度由标准温度传感器校准证书得到。푢 =푢푐=.1℃=0.05°C2 푠 푘 2PAGEPAGE9JJF(京)171—2025标准不确定度一览表B.2。表B.2标准不确定度分量一览表不确定度分量不确定度来源标准不确定度푢1푖测量重复性引入的不确定度0.02℃푢2푠标准温度传感器引入的不确定度0.005℃合成标准不确定度푢c푇=

푢12푖푢12푖+푠0.022+0.0052扩展不确定度k=2，푈=푘푢c푇0.04푈=0.04k=2。附录C校准记录格式（推荐）记录编号:委托单位:仪器名称:型号:制造厂:出厂编号:环境温度：相对湿度：校准日期:校准依据：校准使用的标准器：名称不确定度/准确度等级/最大允许误差设备编号检定/校准证书编号有效期至一、温度示值误差和温度均匀度设定值（℃）温度测量值（℃）（℃）示值误差（℃）扩展不确定