基因载体构建设备运维技师（中级）考试试卷及答案

基因载体构建设备运维技师（中级）考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.基因载体构建中常用的质粒载体需具备的三个关键元件是复制原点、______和标记基因。2.PCR仪的核心加热模块通常采用______技术实现快速升温降温。3.琼脂糖凝胶电泳中，DNA分子因带______电荷向正极迁移。4.质粒提取时，去除蛋白质的常用试剂是______。5.基因载体构建中，限制酶识别的DNA序列通常具有______结构。6.高速冷冻离心机的转子需定期进行______以确保安全运行。7.连接酶催化DNA片段连接的反应需要______作为能量供体。8.电泳仪的输出电压范围一般在______V之间。9.感受态细胞制备常用的化学试剂是______。10.基因载体构建完成后，需通过______方法验证载体结构正确性。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.以下哪种设备用于质粒DNA的大量提取？A.微量离心机B.大容量高速离心机C.电泳仪D.PCR仪2.限制酶EcoRI的识别序列是：A.GAATTCB.GCGGCCGCC.CTGCAGD.AAGCTT3.以下哪种载体属于病毒载体？A.pUC18B.pET-28aC.腺病毒载体D.噬菌体M134.PCR仪的加热模块温度偏差超过多少需校准？A.±0.1℃B.±0.5℃C.±1℃D.±2℃5.琼脂糖凝胶电泳中，判断DNA片段大小的参照物是：A.MarkerB.溴酚蓝C.SYBRGreenD.EB6.以下哪种试剂用于DNA片段的末端平滑化？A.T4DNA聚合酶B.Taq酶C.逆转录酶D.RNA酶7.高速离心机运行时，转子不平衡会导致：A.转速下降B.噪音增大C.电压升高D.试剂挥发8.转化过程中，将重组载体导入大肠杆菌的常用方法是：A.电穿孔法B.热激法C.脂质体转染D.显微注射9.以下哪种设备用于检测DNA浓度？A.分光光度计B.电泳仪C.PCR仪D.离心机10.基因载体构建中，防止载体自连的常用方法是：A.去磷酸化B.增加载体浓度C.减少插入片段浓度D.提高连接温度三、多项选择题（共10题，每题2分）1.质粒载体的基本元件包括：A.复制原点B.多克隆位点C.标记基因D.启动子2.基因载体构建的主要步骤包括：A.目的基因获取B.载体酶切C.连接反应D.转化鉴定3.电泳仪运维需注意的事项有：A.定期校准电压B.保持电极清洁C.避免过载运行D.及时更换缓冲液4.以下属于限制酶的是：A.EcoRIB.BamHIC.T4DNA连接酶D.HindIII5.基因载体的类型包括：A.质粒载体B.病毒载体C.噬菌体载体D.人工染色体载体6.PCR仪的日常维护包括：A.清洁加热模块B.检查电源连接C.校准温度D.更换反应管架7.感受态细胞制备的影响因素有：A.细菌生长状态B.氯化钙浓度C.处理温度D.培养时间8.以下可用于DNA染色的试剂是：A.EBB.SYBRGreenC.溴酚蓝D.考马斯亮蓝9.高速冷冻离心机的安全操作要点包括：A.对称放置样品B.转子拧紧到位C.运行时远离设备D.定期检查密封圈10.重组载体鉴定的方法包括：A.酶切电泳B.PCR鉴定C.测序D.WesternBlot四、判断题（共10题，每题2分）1.限制酶切割DNA产生的末端只能是黏性末端。（）2.PCR仪的加热模块可通过更换帕尔贴元件维修。（）3.琼脂糖凝胶电泳中，DNA片段越大迁移速度越快。（）4.质粒提取时，RNA酶可去除残留的RNA。（）5.连接酶只能连接平末端的DNA片段。（）6.电泳仪的电极板需定期用酒精擦拭清洁。（）7.高速离心机的转子寿命与使用次数无关。（）8.转化后的大肠杆菌需在含抗生素的培养基上筛选。（）9.分光光度计检测DNA浓度时，OD260/OD280比值为1.8左右表示纯度较好。（）10.基因载体构建中，插入片段与载体的摩尔比通常为1:3~3:1。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述PCR仪的日常运维要点。2.什么是基因载体？其在基因工程中的作用是什么？3.简述质粒提取的主要步骤及注意事项。4.电泳仪在使用过程中常见故障及排查方法有哪些？六、讨论题（共2题，每题5分）1.讨论重组载体自连的原因及解决方法。2.讨论高速冷冻离心机在使用中的安全注意事项及维护策略。---答案部分一、填空题答案1.多克隆位点2.帕尔贴（Peltier）3.负4.酚-氯仿（或苯酚-氯仿）5.回文6.动平衡检测7.ATP8.0-500（或0-600）9.氯化钙（CaCl₂）10.酶切鉴定（或测序、PCR鉴定）二、单项选择题答案1.B2.A3.C4.B5.A6.A7.B8.B9.A10.A三、多项选择题答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABD5.ABCD6.ABCD7.ABCD8.AB9.ABCD10.ABC四、判断题答案1.×2.√3.×4.√5.×6.√7.×8.√9.√10.√五、简答题答案1.PCR仪日常运维要点：①每日清洁：用75%酒精擦拭加热模块及表面，避免试剂残留腐蚀；②定期校准：每季度校准温度（标准温度计检测偏差）、电压；③配件检查：确认反应管架无破损，帕尔贴模块连接牢固；④环境维护：放置干燥通风处，远离电磁干扰；⑤故障排查：温度异常先查电源，勿自行拆解核心模块。2.基因载体及作用：基因载体是携带外源基因进入受体细胞并复制表达的DNA分子。作用：①携带外源基因，解决直接导入细胞难题；②含复制原点，实现外源基因大量复制；③含标记基因，便于筛选含重组载体的细胞；④部分载体含启动子/终止子，调控目的基因表达。3.质粒提取步骤及注意事项：步骤：①细菌培养→②碱裂解（NaOH+SDS）→③中和（醋酸钾）→④离心取上清→⑤酚-氯仿抽提+乙醇沉淀。注意：①裂解时间不宜过长，避免质粒断裂；②中和后立即离心，防止染色体DNA复性；③抽提后去除酚-氯仿残留；④乙醇沉淀后彻底干燥。4.电泳仪常见故障及排查：①无电压：查电源插头、开关；②电压不稳：查电极清洁度、缓冲液新鲜度；③带模糊：查凝胶浓度、电压、样品污染；④不迁移：查电极正负极、缓冲液是否没过凝胶；⑤漏液：查密封圈老化，及时更换。六、讨论题答案1.重组载体自连原因及解决方法：原因：①载体未去磷酸化（5’-P残留）；②载体浓度过高；③酶切不完全。解决：①碱性磷酸酶去磷酸化；②插入片段与载体摩尔比3:1~10:1；③双酶切产生不同黏性末端；④降低载体浓度；⑤验