蛋白纯化层析柱流速调试技师（初级）考试试卷及答案

蛋白纯化层析柱流速调试技师（初级）考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分，共10分）1.蛋白纯化中，通过电荷相互作用分离的层析类型是______。2.层析柱流速常用单位有mL/min和______。3.填料长期保存用______乙醇溶液（体积分数）。4.离子交换柱上样量不超柱体积的______。5.平衡缓冲液需通过______倍柱体积。6.流速调试常用设备是______或恒流泵。7.蛋白浓度比色法包括Bradford和______法。8.流速______会导致柱压升高。9.疏水层析中蛋白在______盐缓冲液中结合。10.凝胶过滤分辨率与柱长呈______关系（一定范围）。二、单项选择题（共10题，每题2分，共20分）1.流速过快直接导致的问题是（）A.分离度升高B.峰宽变宽C.回收率增加D.压力降低2.离子交换柱平衡不包括（）A.电导稳定B.吸光度稳定C.1倍柱体积D.pH稳定3.凝胶过滤最大上样体积不超柱体积（）A.1/3B.1/5C.1/10D.1/204.填料装填后应避免（）A.倒置B.平衡C.冲洗D.保存5.流速调试初始设为（）A.最大流速B.中等流速C.低流速D.任意流速6.回收率低的原因不包括（）A.流速过快B.上样量不足C.结合不充分D.洗杂过度7.疏水层析常用填料（）A.DEAE-SepharoseB.PhenylSepharoseC.SephadexG-75D.Ni-NTA8.1cm直径柱，1cm/h流速对应流量约（）A.0.013mL/minB.0.13mL/minC.1.3mL/minD.13mL/min9.柱效判断指标（）A.理论塔板数NB.流速C.压力D.上样量10.洗杂目的（）A.洗脱目标蛋白B.去未结合杂质C.增流速D.再生填料三、多项选择题（共10题，每题2分，共20分）1.流速调试注意事项（）A.压力不超填料耐受B.平衡充分C.流速稳定后记录D.检测电导2.影响分离的因素（）A.流速B.柱温C.缓冲液pHD.上样量3.常用层析类型（）A.离子交换B.凝胶过滤C.疏水D.亲和4.填料保存方法（）A.20%乙醇B.4℃冷藏C.避免冷冻D.定期换乙醇5.流速过快问题（）A.分离度降B.峰拖尾C.回收率降D.压力升6.亲和层析关键（）A.配体特异性结合B.洗脱温和C.流速越快越好D.无需再生7.凝胶过滤注意（）A.流速恒定B.无气泡C.上样体积大D.柱床稳定8.平衡判断标准（）A.电导一致B.吸光度稳定C.3-5倍柱体积D.pH一致9.蛋白浓度检测方法（）A.BradfordB.BCAC.紫外280nmD.Lowry10.柱压过高解决（）A.降流速B.换过滤膜C.重装柱D.增上样量四、判断题（共10题，每题2分，共20分）1.流速越快分离越好（）2.填料可倒置存放（）3.平衡只需1倍柱体积（）4.上样后立即洗脱（）5.疏水层析低盐上样、高盐洗脱（）6.凝胶过滤分辨率与柱长正相关（）7.离子交换流速不影响结合（）8.填料用50%乙醇保存（）9.空气可测柱压（）10.亲和配体无需再生（）五、简答题（共4题，每题5分，共20分）1.简述流速调试基本步骤。2.离子交换流速过快的影响及解决方法。3.凝胶过滤流速调试注意事项。4.如何判断柱平衡充分？六、讨论题（共2题，每题5分，共20分）1.离子交换柱流速调试后，回收率低、峰拖尾，分析原因及解决思路。2.凝胶过滤流速调试后峰宽异常增宽，分析原因及改进措施。---答案部分一、填空题答案1.离子交换2.cm/h3.20%4.1/35.3-56.蠕动泵7.Lowry（或BCA）8.过快9.高10.正二、单项选择题答案1.B2.C3.B4.A5.C6.B7.B8.A9.A10.B三、多项选择题答案1.ABC2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.AB7.ABD8.ABCD9.ABCD10.ABC四、判断题答案1.×2.×3.×4.×5.√6.√7.×8.×9.×10.×五、简答题答案1.①检查柱床（无气泡、塌陷）；②连恒流泵设低流速（0.5mL/min）；③用平衡液冲洗，测压力（不超耐受）；④逐步调至目标流速，观察电导/吸光度稳定；⑤确认流速稳定后上样。2.影响：结合不充分（回收率降）、分离度降、压力升。解决：①降流速至耐受范围；②重新平衡至电导稳定；③减上样量（≤1/3柱体积）；④检查填料堵塞。3.①流速恒定（恒流泵）；②初始低流速（0.3-0.5mL/min）；③无气泡；④不超填料最大流速；⑤用标准蛋白测柱效。4.①电导与平衡液一致（误差≤5%）；②吸光度稳定（≤0.005AU）；③3-5倍柱体积；④pH一致（离子交换）；⑤柱床稳定。六、讨论题答案1.原因：①流速过快（结合不足）；②平衡不充分（电导/pH未匹配）；③上样量过大；④填料老化。解决：①降流速至0.5-1mL/min；②重新平衡；③减上