DB22-T 3386-2022 小球藻发酵培养技术规范

ICS65.150CCSB5222ThetechnicalspecificationforfermentationcultureoffreshwaterchlorellavulgarisIDB22/T3386—2022本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。本文件起草主要单位：吉林农业大学，吉林省水产技术推广总站、通化师范学院。本文件主要起草人：张东鸣、陈玉珂、蔺丽丽、王秋举、郭志欣、刘洪建、赵云龙、高永生。DB22/T3386—20221小球藻发酵培养技术规范本文件规定了小球藻（Chlorellavulgaris）发酵培养的仪器设备与耗材，培养基，培养，测定生物量和采收。本文件适用于淡水小球藻设施发酵培养。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB11607渔业水质标准3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1扩大培养expandculture培养基中接种少量的藻种，在适宜环境条件（温度、盐度、光照、pH值等）下，藻液达到一定的浓度后，一次性采收或作进一步扩大培养的过程。3.2发酵培养fermentationculture小球藻通过生物氧化反应获得能量以维持藻细胞生长的过程。4仪器设备与耗材4.1仪器设备小球藻发酵培养仪器设备应满足下列要求：a)发酵罐,容量不低于50L；b)恒温干燥箱，不低于2000W；c)高压灭菌器,灭菌体积不低于50L；d)高速离心机，转速不低于5000r/min，离心体积不小于500mL；e)充气泵，功率大于200W。4.2耗材玻璃三角烧瓶，培养皿，离心管。2DB22/T3386—20225培养基5.1扩大培养用BG-11培养基，主要成分见表1。表1BG-11培养基组成KHPOONaCO23O24MgSOO25HBO1MnClOONaMoOOOO5.2发酵培养的培养基主要成分见表2。表2发酵培养基组成123KHPO4MgSOO5NaHPOO678DB22/T3386—202236培养6.2扩大培养6.2.1藻种小球藻纯度≥99.99%。6.2.2接种无菌环境下，将已无菌的600mLBG-11培养基装入1L已灭菌处理的玻璃三角烧瓶中，然后将200mL密度达到106ind/mL的小球藻接种于BG-11培养基中。6.2.3培养条件pH6.5，培养温度28℃,充气量1.5L/min,培养时间为96h。6.3发酵培养6.3.1接种在50L发酵罐中进行发酵培养，接种量为10%，将3L扩大培养的小球藻藻种接入27L发酵培养基中。6.3.2培养条件装料体积30L，温度28℃,搅拌速度150r/min~300r/min，发酵时间96h。6.3.3补料在发酵培养达36h时向发酵罐内补充30g/L葡萄糖；在发酵培养达60h时向发酵罐内补充10g/L尿素，培养至满96h结束。7测定生物量取8mL藻液装入10mL离心管中以8000r/min离心10min，弃上清，再用蒸馏水混悬藻泥，离心弃上清，重复三遍。将藻泥用少量蒸馏水洗入预先称重的培养皿中敞口置于80℃烘