临床微生物检验流程及操作标准化培训班赋能行动检验科考试试题及答案

临床微生物检验流程及操作标准化培训班赋能行动检验科考试试题及答案一、单项选择题（每题1分，共30分。每题只有一个正确答案，请将正确选项字母填入括号内）1.血培养瓶在自动化血培养系统中报阳后，最优先的处理步骤是（）A.立即转种血琼脂平板B.记录报阳时间并立即涂片革兰染色C.放置4℃冰箱等待次日处理D.直接做药敏试验答案：B2.对疑似结核分枝杆菌的痰标本进行前处理时，首选的消化-去污染试剂组合是（）A.2%NaOH+2%HClB.4%NaOH+N-乙酰-L-半胱氨酸C.1%胰酶+75%乙醇D.5%草酸+10%酚答案：B3.在厌氧菌培养中，下列哪种指示剂最适合用于监测厌氧环境是否达标（）A.酚红B.刃天青C.溴甲酚紫D.甲基红答案：B4.对大肠埃希菌进行ESBLs表型确证试验时，CLSI推荐的底物抗生素组合为（）A.头孢他啶30μg±克拉维酸10μgB.头孢曲松30μg±克拉维酸10μgC.头孢吡肟30μg±克拉维酸10μgD.头孢噻肟30μg±克拉维酸10μg答案：A5.对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行快速筛查时，最适用于普通实验室开展的分子靶点是（）A.mecAB.mecCC.femAD.nuc答案：A6.下列哪项不是真菌血培养瓶与普通细菌血培养瓶的关键差异（）A.培养基pHB.树脂吸附剂种类C.振荡频率D.报阳算法阈值答案：C7.对脑脊液进行革兰染色时，正确的离心参数是（）A.500×g，5minB.1000×g，10minC.3000×g，15minD.15000×g，2min答案：C8.当K-B法药敏平板中抗生素纸片周围出现“双环”现象时，最可能的耐药机制是（）A.产生AmpC酶B.产生碳青霉烯酶C.产生ESBLsD.产生PBP2a答案：B9.对淋病奈瑟菌进行初分离培养时，最适培养环境为（）A.35℃，5%CO₂，湿润B.30℃，微需氧C.42℃，厌氧D.25℃，普通大气答案：A10.自动化鉴定系统中，对API20E反应板进行结果判读时，若ONPG反应孔呈黄色，应记为（）A.阴性B.阳性C.可疑D.无效答案：B11.对艰难梭菌毒素检测采用PCR方法时，靶基因应选择（）A.tcdA+tcdBB.tcdCC.tcdRD.tcdE答案：A12.在分枝杆菌培养中，Middlebrook7H9液体培养基中添加的抑菌剂是（）A.多粘菌素BB.两性霉素BC.萘啶酸D.甲氧苄啶答案：B13.对血培养报阳标本进行直接药敏试验时，菌液浓度应调至（）A.0.5McFarlandB.1.0McFarlandC.2.0McFarlandD.0.25McFarland答案：A14.对CRE菌株进行改良碳青霉烯酶抑制试验（mCIM）时，阳性结果为（）A.抑菌圈直径≥16mmB.抑菌圈直径≤19mmC.抑菌圈直径≥22mmD.抑菌圈直径≤16mm答案：D15.对曲霉菌进行形态学鉴定时，最适合的乳酸酚棉蓝染色温度是（）A.4℃B.25℃C.37℃D.56℃答案：B16.对VRE进行表型确证时，若含万古霉素琼脂筛查法菌落数≥1，则万古霉素浓度为（）A.2μg/mLB.4μg/mLC.6μg/mLD.8μg/mL答案：C17.对流感嗜血杆菌进行药敏试验时，必须补充的因子是（）A.X因子B.V因子C.X+V因子D.血红蛋白答案：C18.对厌氧菌进行MIC测定时，推荐使用的培养基是（）A.MH琼脂B.布鲁氏血琼脂C.沙氏葡萄糖琼脂D.营养琼脂答案：B19.对丝状真菌进行分子鉴定时，首选的DNA条形码片段是（）A.ITSB.D1/D2C.TEF1-αD.β-tubulin答案：A20.对血培养瓶进行无菌采血时，皮肤消毒的正确顺序是（）A.70%乙醇→碘伏→70%乙醇B.碘伏→70%乙醇C.氯己定→碘伏D.碘酊→氯己定答案：A21.对CRE菌株进行CarbaNP试验时，若A管颜色由红色变为黄色，提示（）A.产金属酶B.产丝氨酸碳青霉烯酶C.不产碳青霉烯酶D.试剂失效答案：B22.对支原体进行培养时，需添加的胆固醇浓度为（）A.0.01%B.0.1%C.1%D.5%答案：B23.对白色念珠菌进行科玛嘉显色培养时，菌落呈（）A.绿色B.蓝色C.粉色D.紫色答案：A24.对脑膜炎奈瑟菌进行乳胶凝集试验时，应使用的阳性对照抗原是（）A.A群多糖B.B群多糖C.C群多糖D.外膜蛋白答案：A25.对标本进行16SrDNA测序时，通用引物27F对应的区域是（）A.V1B.V3C.V6D.V9答案：A26.对KPC酶进行基因型检测时，推荐引物序列为（）A.blaKPC-F:CGTCTAGTTCTGCTGTCTTGB.blaKPC-F:ATGTCACTGTATCGCCGTCTC.blaKPC-F:TCTGGTTCTGGCAGCAGCAGD.blaKPC-F:GCTACACTCCGGCAGCAGCA答案：A27.对曲霉半乳甘露聚糖检测（GM试验）阳性阈值是（）A.OD≥0.3B.OD≥0.5C.OD≥1.0D.OD≥2.0答案：B28.对艰难梭菌进行厌氧培养时，推荐的气体条件是（）A.80%N₂,10%CO₂,10%H₂B.90%N₂,5%CO₂,5%O₂C.70%N₂,15%CO₂,15%O₂D.100%CO₂答案：A29.对MRSA进行头孢西丁纸片法筛查时，抑菌圈直径≤多少mm判定为耐药（）A.19B.21C.24D.27答案：B30.对标本进行宏基因组测序时，去除宿主DNA常用的方法是（）A.酶解法B.物理剪切法C.甲基化亲和层析D.16S富集法答案：C二、配伍题（每题1分，共20分。每组选项可重复选用，也可不选用）A.0.5McFarlandB.2%NaOH+2%柠檬酸C.35℃，5%CO₂D.刃天青指示剂E.头孢他啶/克拉维酸F.布鲁氏血琼脂G.1μg/mL奥沙西林H.7H9液体培养基I.0.1%Tween-80J.0.01%胆固醇31.结核分枝杆菌培养基（）32.厌氧环境指示剂（）33.真菌药敏菌悬液浓度（）34.痰标本去污染（）35.流感嗜血杆菌培养（）36.ESBLs确证试验（）37.厌氧菌药敏培养基（）38.支原体培养添加物（）39.MRSA筛查平板（）40.曲霉孢子悬液分散剂（）答案：31.H32.D33.A34.B35.C36.E37.F38.J39.G40.I三、判断题（每题1分，共20分。正确打“√”，错误打“×”）41.血培养瓶报阳后，若涂片未见细菌，可暂不转种，继续培养24h再观察。（）答案：×42.对白色念珠菌进行药敏试验时，可用MH琼脂替代RPMI1640。（）答案：×43.对CRE菌株进行mCIM试验时，需使用麦氏0.5菌悬液。（）答案：√44.对曲霉进行形态学鉴定时，必须观察到顶囊结构方可报告种名。（）答案：√45.对艰难梭菌毒素检测，若PCR阳性但酶免毒素阴性，可报告为产毒株。（）答案：×46.对脑脊液进行革兰染色时，离心后上清液可直接丢弃。（）答案：×47.对支原体进行培养时，若液体培养基颜色由红变黄，即可报告阳性。（）答案：×48.对VRE进行表型确证时，若vanA阳性，则对万古霉素MIC≥256μg/mL。（）答案：√49.对丝状真菌进行药敏试验时，必须使用M38-A2方案。（）答案：√50.对血培养瓶进行无菌采血时，若皮肤消毒后触碰穿刺点，需重新消毒。（）答案：√51.对结核分枝杆菌进行比例法药敏时，若耐药比例≥1%，即可判定耐药。（）答案：√52.对厌氧菌进行鉴定时，可用MALDI-TOFMS直接点靶。（）答案：√53.对大肠埃希菌进行ESBLs筛查时，若头孢曲松抑菌圈≥25mm，可排除ESBLs。（）答案：×54.对真菌进行DNA提取时，需使用玻璃珠破碎法。（）答案：√55.对血培养瓶进行厌氧培养时，无需振荡。（）答案：√56.对脑膜炎奈瑟菌进行乳胶凝集试验时，若出现交叉凝集，需用生理盐水稀释后再测。（）答案：√57.对曲霉进行药敏试验时，需使用孢子悬液而非菌丝片段。（）答案：√58.对支原体进行PCR检测时，可使用16SrRNA通用引物。（）答案：√59.对KPC酶进行基因型检测时，若blaKPC阴性即可排除碳青霉烯酶。（）答案：×60.对标本进行宏基因组测序时，需建库片段长度≥10kb方可获得良好组装。（）答案：×四、填空题（每空1分，共30分）61.对血培养瓶进行无菌采血时，成人每瓶推荐采血量为________mL，儿童为________mL。答案：8–10，1–362.对结核分枝杆菌进行比例法药敏时，临界浓度为异烟肼________μg/mL，利福平________μg/mL。答案：0.2，1.063.对白色念珠菌进行药敏试验时，培养基为________，培养时间为________h。答案：RPMI1640，2464.对曲霉进行形态学鉴定时，顶囊上产生的结构称为________，其顶端延伸的称为________。答案：瓶梗，分生孢子链65.对艰难梭菌进行厌氧培养时，推荐使用的选择性培养基为________，添加的抗生素为________。答案：CCFA，环丝氨酸-头孢西丁66.对MRSA进行头孢西丁纸片法筛查时，抑菌圈直径≤________mm判定为耐药，对应mecA基因________。答案：21，阳性67.对CRE菌株进行CarbaNP试验时，A管底物为________，B管添加________作为抑制剂。答案：亚胺培南，EDTA68.对脑脊液进行革兰染色时，若查到革兰阴性双球菌，需立即报告并同时进行________试验以确认________。答案：乳胶凝集，脑膜炎奈瑟菌69.对支原体进行培养时，若液体培养基颜色由________变为________，且澄清度下降，提示阳性。答案：红，黄70.对丝状真菌进行DNA提取时，需使用________破碎细胞壁，再用________法提取总DNA。答案：玻璃珠，酚-氯仿71.对VRE进行基因型检测时，vanA对万古霉素MIC≥________μg/mL，vanB对万古霉素MIC范围为________μg/mL。答案：256，4–6472.对厌氧菌进行MALDI-TOFMS鉴定时，需使用________基质，激光频率为________Hz。答案：HCCA，6073.对血培养报阳标本进行直接药敏试验时，若菌液浓度超过________McFarland，需用________稀释。答案：0.5，生理盐水74.对曲霉进行GM试验时，若连续两次血清OD≥________，或单次OD≥________，可判定阳性。答案：0.5，1.075.对标本进行16SrDNA测序时，通用引物27F序列为________，1492R序列为________。答案：AGAGTTTGATCMTGGCTCAG，TACGGYTACCTTGTTACGACTT五、简答题（每题10分，共30分）76.简述血培养瓶报阳后实验室标准化处理流程。答案：（1）立即记录报阳时间，观察瓶内有无溶血、气体、絮状物；（2）无菌抽取培养物进行革兰染色，镜检并初步报告；（3）根据染色结果选择培养基：需氧/厌氧血琼脂、巧克力琼脂、麦康凯等；（4）转种后放置于35℃，5%CO₂孵育18–24h；（5）同时进行直接药敏试验，菌液调至0.5McFarland；（6）若镜检见真菌，加种沙氏琼脂；若见分枝杆菌样菌体，加种L-J培养基；（7）将涂片、培养、药敏结果于24h内录入LIS系统并报告临床；（8）剩余培养物放置4℃保存48h，以备复查。77.简述CRE实验室检测策略及确认流程。答案：（1）筛查：对肠杆菌目细菌，采用厄他培南、美罗培南纸片法，抑菌圈直径≤19mm或MIC≥1μg/mL进入确认流程；（2）表型确证：采用mCIM试验，亚胺培南纸片孵育过夜后，若抑菌圈≤16mm为阳性；（3）酶型区分：CarbaNP试验，A管变黄提示丝氨酸酶，B管变黄提示金属酶；（4）基因型检测：采用多重PCR，覆盖blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48；（5）测序验证：对阳性产物进行Sanger测序，与数据库比对确认亚型；（6）报告：在LIS标注“CRE”，并备注酶型，通知感染控制科。78.简述真菌血培养标准化操作流程及注意事项。答案：（1）采血：成人每瓶8–10mL，儿童1–3mL，立即注入真菌专用树脂瓶；（2）运输：室温2h内送达实验室，切勿冷藏；（3）上机：使用BacT/ALERTFA或BDBACTECMyco/F瓶，设定35℃持续监测；（4）报阳处理：立即涂片行革兰染色及荧光白染色，转种沙氏琼脂、土豆葡萄糖琼脂，分别置25℃与35℃；（5）鉴定：采用MALDI-TOFMS，分值≥2.0报告种名；若分值低，加做ITS测序；（6）药敏：对念珠菌采用CLSIM27-A3微量稀释法，对曲霉采用M38-A2；（7）注意事项：①避免过度振荡防止菌丝断裂；②转种后立即用Parafilm封口防干燥；③若48h未报阳，需盲传一次；④污染率控制在≤3%。六、案例分析题（每题20分，共40分）79.病例：65岁男性，因肺炎入院，入院第3天高热39.5℃，WBC18×10⁹/L，PCT5.2ng/mL，抽取双侧双瓶血培养，12h左侧厌氧瓶报阳，涂片见革兰阳性球菌，呈葡萄串样排列。次日转种血琼脂，35℃，5%CO₂培养24h后，出现白色凸起、β溶血菌落，直径1mm，凝固酶阳性。问题：（1）写出该菌最可能的种名及鉴定路径；（2）给出药敏试验方案及耐药表型判断标准；（3）若该菌对头孢西丁抑菌圈直径为18mm，下一步如何确认MRSA；（4）简述感染控制措施。答案：（1）种名：金黄色葡萄球菌；路径：MALDI-TOFMS分值≥2.0，或采用Vitek2GP卡，凝固酶试管法确证。（2）方案：采用CLSIM100标准，头孢西丁30μg纸