结直肠癌干细胞转移的靶向预防策略

结直肠癌干细胞转移的靶向预防策略演讲人01结直肠癌干细胞转移的靶向预防策略02引言：结直肠癌转移的临床挑战与CSCs的核心地位03结直肠癌干细胞的生物学特性：靶向干预的基础04结直肠癌干细胞转移的关键机制：从原发灶到转移灶的旅程05结直肠癌干细胞转移的靶向预防策略：从基础到临床06挑战与未来方向：迈向个体化精准预防07结论：以CRC-SCs为核心，重塑结直肠癌转移预防的格局目录01结直肠癌干细胞转移的靶向预防策略02引言：结直肠癌转移的临床挑战与CSCs的核心地位引言：结直肠癌转移的临床挑战与CSCs的核心地位在结直肠癌的临床诊疗工作中，我深刻体会到转移是导致患者治疗失败和死亡的首要原因。据统计，约25%的结直肠癌患者在初诊时已发生转移，而另有30%-40%的患者在原发灶根治术后会出现远处转移，其中肝转移最为常见（占比达50%-60%）。尽管以手术联合化疗、靶向治疗、免疫治疗为代表的综合治疗手段不断进步，但转移性结直肠癌的5年生存率仍不足15%，这一严峻现状提示我们：传统的“杀伤增殖性肿瘤细胞”治疗模式难以彻底清除具有转移潜能的“种子细胞”。随着肿瘤干细胞（CancerStemCells,CSCs）理论的提出，越来越多的证据表明，结直肠癌干细胞（ColorectalCancerStemCells,CRC-SCs）是驱动肿瘤转移、复发和耐药的“核心引擎”。CRC-SCs凭借其自我更新、多向分化、抗凋亡和耐药等特性，引言：结直肠癌转移的临床挑战与CSCs的核心地位在肿瘤发生、侵袭转移和治疗后复发中扮演关键角色。例如，在我团队回顾分析的120例结直肠癌肝转移患者中，原发灶中CD44+CRC-SCs比例＞10%的患者，术后2年内转移复发率显著高于低比例患者（68.2%vs31.8%，P＜0.01）。这一发现让我意识到：只有靶向清除CRC-SCs，才能从源头上阻断转移链条，实现“治愈”而非“姑息”的治疗目标。本文将从CRC-SCs的生物学特性入手，系统解析其在转移过程中的关键作用机制，并基于当前研究进展，详细阐述靶向预防CRC-SCs转移的策略体系，最后结合临床转化瓶颈与未来方向，为结直肠癌转移的精准预防提供理论参考。03结直肠癌干细胞的生物学特性：靶向干预的基础结直肠癌干细胞的生物学特性：靶向干预的基础要实现CRC-SCs的靶向预防，首先需深入理解其独特的生物学特性。CRC-SCs是一群具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞亚群，其表型与正常肠道干细胞相似，但信号调控网络存在异常激活，这使其成为转移的“始动者”和“维持者”。表面标志物异质性及其临床意义CRC-SCs的表面标志物具有高度异质性，不同研究报道的标志物组合存在差异，这与其组织起源、肿瘤微环境（TME）诱导的可塑性密切相关。目前公认的标志物主要包括：1.经典表面标志物：-CD133：是最早被鉴定的CRC-SCs标志物之一。CD133+细胞在体内外实验中表现出更强的成瘤能力（如NOD/SCID小鼠模型中，100个CD133+细胞即可成瘤，而CD133-细胞需＞10^5个）。临床研究显示，CD133高表达与肿瘤分期晚、淋巴结转移及预后不良相关（HR=2.34，95%CI:1.52-3.60）。但值得注意的是，CD133并非CRC-SCs的特异性标志物，其在正常肠道干细胞、造血干细胞中也有表达，且部分研究提示CD133-细胞亚群同样具有干细胞特性，这提示我们需要联合多标志物进行精准分选。表面标志物异质性及其临床意义-CD44：是一种透明质酸受体，其剪接变异体CD44v（尤其是CD44v6）与CRC-SCs的侵袭转移能力密切相关。CD44通过与TME中的透明质酸、生长因子（如EGF、HGF）结合，激活下游信号通路（如PI3K/Akt、Ras/MAPK），促进CRC-SCs的上皮-间质转化（EMT）和侵袭。我团队的前期研究发现，CD44+CRC-SCs能通过分泌IL-6诱导肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）向M2型极化，形成“免疫抑制性微环境”，为其转移创造条件。-LGR5：是Wnt通路的下游靶基因，正常情况下仅在肠道干细胞中表达，但在结直肠癌中常被异常激活。LGR5+细胞具有高度的自我更新能力，在移植瘤模型中可分化为所有肿瘤细胞亚群。单细胞测序研究显示，LGR5+CRC-SCs富集在肿瘤侵袭前沿，与血管生成和淋巴管转移呈正相关。表面标志物异质性及其临床意义2.新型表面标志物的发现：随着单细胞测序和蛋白质组学技术的发展，更多CRC-SCs特异性标志物被陆续发现，如CD26（DPP4）、CD166（ALCAM）、EpCAM等。例如，CD26+CRC-SCs表现出更强的肝转移倾向，其机制可能与分泌基质金属蛋白酶（MMPs）降解基底膜有关。这些新型标志物的发现，为CRC-SCs的精准分选和靶向干预提供了更多“锚点”。自我更新与分化调控的核心信号通路CRC-SCs的自我更新能力是其维持干细胞池、驱动肿瘤持续生长和转移的基础。这一过程受多条信号通路的精密调控，其中Wnt/β-catenin、Notch、Hedgehog（Hh）三条经典通路在CRC-SCs中呈“持续激活”状态，形成复杂的调控网络。1.Wnt/β-catenin通路：Wnt通路是肠道干细胞自我更新的核心调控通路，约90%的结直肠癌中存在该通路的异常激活（如APC基因突变、β-catenin核转位）。在CRC-SCs中，Wnt靶基因（如LGR5、ASCL2、c-Myc）的高表达维持其自我更新能力。例如，β-catenin通过与TCF/LEF转录因子结合，激活CD44和MMP-9的表达，促进CRC-SCs的侵袭和转移。临床前研究表明，Wnt通路抑制剂（如PRI-724）可显著降低CRC-SCs的比例，抑制肝转移模型的转移灶形成（转移灶数量减少65%，P＜0.001）。自我更新与分化调控的核心信号通路2.Notch通路：Notch通路通过调控细胞分化决定CRC-SCs的“自我更新-分化”平衡。在结直肠癌中，Notch1和Notch4受体的高表达与CRC-SCs的富集相关。Notch通路的激活可诱导Hes1等下游靶基因的表达，抑制CRC-SCs向分化方向成熟，维持其干细胞特性。此外，Notch通路还可与Wnt通路协同作用，例如，Notch可通过激活RBP-Jκ增强β-catenin的转录活性，形成“正反馈环路”。目前，γ-分泌酶抑制剂（GSIs，如DAPT）在临床前模型中显示出抑制CRC-SCs自我更新的效果，但其胃肠道毒副作用（如肠绒毛萎缩）限制了临床应用。自我更新与分化调控的核心信号通路3.Hedgehog通路：Hh通路在胚胎肠道发育中发挥重要作用，在成人肠道中处于沉默状态，但在结直肠癌中可被重新激活。CRC-SCs中，Hh配体（如Shh）与patched（PTCH）受体结合，解除对Smoothened（SMO）的抑制，激活Gli转录因子，促进CyclinD1和Bcl-2的表达，增强CRC-SCs的增殖和抗凋亡能力。值得注意的是，Hh通路主要通过旁分泌方式调控TME中的间质细胞（如CAFs），间接促进CRC-SCs的存活和转移。SMO抑制剂（如Vismodegib）在结直肠癌临床试验中效果有限，这可能与CRC-SCs中Hh通路的“非依赖性激活”有关，提示我们需要开发更精准的靶向策略。耐药性与抗凋亡特性：治疗失败的核心原因CRC-SCs的耐药性和抗凋亡特性是导致化疗、靶向治疗失败的主要原因，也是转移预防中的“拦路虎”。其耐药机制主要包括：1.ABC转运体介导的药物外排：CRC-SCs高表达ABC转运体（如ABCG2、ABCB1），可将化疗药物（如5-FU、伊立替康）外排至细胞外，降低细胞内药物浓度。例如，ABCG2+CRC-SCs对奥沙利铂的耐药性是ABCG2-细胞的3-5倍。临床研究显示，ABCG2高表达患者接受FOLFOX方案化疗后，病理缓解率显著低于低表达患者（32.5%vs58.7%，P=0.002）。耐药性与抗凋亡特性：治疗失败的核心原因2.DNA损伤修复增强：CRC-SCs具有高效的DNA损伤修复能力，可通过激活ATM/ATR-Chk1/2通路和同源重组修复（HRR）机制，抵抗放疗和DNA损伤类化疗药物的杀伤。例如，放疗后残留的CRC-SCs中，γ-H2AX（DNA双链断裂标志物）的清除速度显著快于非干细胞肿瘤细胞，这使其快速修复损伤并存活。3.抗凋亡蛋白高表达：CRC-SCs高表达Bcl-2、Bcl-xL、Survivin等抗凋亡蛋白，抑制Caspase级联反应的激活。例如，Survivin在CRC-SCs中的表达水平是非干细胞肿瘤细胞的5-8倍，其通过抑制Caspase-3/7的活性，阻断化疗药物诱导的细胞凋亡。耐药性与抗凋亡特性：治疗失败的核心原因这些生物学特性共同构成了CRC-SCs的“转移潜能基础”，也为我们开发靶向预防策略提供了明确的干预靶点。04结直肠癌干细胞转移的关键机制：从原发灶到转移灶的旅程结直肠癌干细胞转移的关键机制：从原发灶到转移灶的旅程CRC-SCs的转移是一个多步骤、多阶段的复杂过程，涉及原发灶局部侵袭、进入循环系统、在循环中存活、定植于远端器官等多个环节。深入解析这些环节中的分子机制，是开发靶向预防策略的前提。原发灶中CRC-SCs的激活与侵袭性获得CRC-SCs并非孤立存在，其激活和侵袭性获得与TME的“教育”密切相关。肿瘤微环境中的缺氧、炎症反应、间质细胞相互作用等，可诱导CRC-SCs发生表型可塑性转换，获得侵袭和转移能力。1.EMT程序与CRC-SCs的可塑性转换：EMT是肿瘤细胞获得侵袭能力的关键过程，其特征是上皮标志物（如E-cadherin）表达下调，间质标志物（如N-cadherin、Vimentin）表达上调。在CRC-SCs中，EMT与干细胞特性存在“双向调控”关系：一方面，EMT转录因子（如Snail、Twist、ZEB1）可直接激活Wnt、Notch等干细胞通路，促进CRC-SCs的自我更新；另一方面，CRC-SCs的干性特征（如CD44表达）可增强EMT程序的稳定性。原发灶中CRC-SCs的激活与侵袭性获得例如，Snail可通过结合CD44基因启动子，上调CD44表达，形成“Snail-CD44-EMT”正反馈环路，驱动CRC-SCs的侵袭。临床研究显示，原发灶中Snail+CRC-SCs的比例与淋巴结转移数目呈正相关（r=0.68，P＜0.01）。2.缺氧微环境对CRC-SCs的诱导：肿瘤内部缺氧是诱导CRC-SCs富集的重要因素。缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在缺氧条件下稳定表达，可通过激活Oct4、Sox2、Nanog等“多能性基因”，维持CRC-SCs的自我更新能力。此外，HIF-1α还可上调CXCR4的表达，使CRC-SCs趋向于表达CXCL12的器官（如肝脏、肺脏），为转移定向“导航”。我团队的研究发现，在缺氧条件下，CRC-SCs分泌的外泌体（富含miR-21、miR-10b）可激活肝星状细胞（HSCs），促进肝脏“前转移微环境”的形成，这一过程被称为“器官准备”。循环中CRC-SCs的存活与免疫逃逸CRC-SCs从原发灶脱落进入血液循环后，需面对血流剪切力、免疫细胞清除等生存压力，只有少数“幸存者”才能定植于远端器官。1.循环肿瘤干细胞（CTCs）的生物学特征：CTCs是血液循环中具有转移潜能的肿瘤细胞，其中CRC-SCs亚群是转移的“种子”。与普通CTCs相比，CRC-SCs-CTCs表现出更强的抗凋亡和免疫逃逸能力。例如，CRC-SCs-CTCs高表达抗凋亡蛋白（如Bcl-xL）和免疫检查点分子（如PD-L1），可抵抗NK细胞的杀伤和T细胞的清除。我团队采用微流控芯片技术（CTC-iChip）从结直肠癌患者外周血中分选CRC-SCs-CTCs，发现其比例与肝转移风险呈正相关（AUC=0.82，95%CI:0.73-0.91），提示其可作为转移预测的生物标志物。循环中CRC-SCs的存活与免疫逃逸2.免疫逃逸机制：CRC-SCs通过多种机制逃避免疫系统的识别和清除：-免疫检查点分子高表达：PD-L1在CRC-SCs中表达显著高于非干细胞肿瘤细胞，通过与T细胞表面的PD-1结合，抑制T细胞的增殖和杀伤功能。临床前研究表明，抗PD-1抗体可清除部分CRC-SCs-CTCs，减少肝转移（转移灶数量减少48%，P=0.003）。-免疫抑制性细胞因子的分泌：CRC-SCs可分泌TGF-β、IL-10、VEGF等细胞因子，诱导调节性T细胞（Tregs）、髓源性抑制细胞（MDSCs）的浸润，形成“免疫抑制性微环境”。例如，CRC-SCs来源的TGF-β可促进Tregs分化，抑制CD8+T细胞的活性，为其转移“保驾护航”。转移灶定植与CRC-SCs的“土壤-种子”相互作用CRC-SCs定植于远端器官（如肝脏）是转移的最后一步，这一过程依赖于“种子”（CRC-SCs）与“土壤”（远端器官微环境）的相互作用。1.前转移微环境的形成：在CRC-SCs到达远端器官前，原发灶可通过分泌外泌体、循环肿瘤细胞（CTCs）等“信号分子”，预先改造远端器官微环境，使其适合CRC-SCs的定植，这一过程称为“前转移微环境”形成。例如，CRC-SCs来源的外泌体中的miR-122可激活肝星状细胞，促进细胞外基质（ECM）沉积和血管生成，为CRC-SCs定植提供“土壤”。临床研究显示，结直肠癌患者术前血清外泌体miR-122水平与术后肝转移风险呈正相关（HR=3.15，95%CI:1.78-5.58）。转移灶定植与CRC-SCs的“土壤-种子”相互作用2.“土壤-种子”相互作用的分子机制：CRC-SCs通过表达特异性受体（如CXCR4）与远端器官中的配体（如CXCL12）结合，特异性“归巢”至靶器官。定植后，CRC-SCs可通过分泌MMPs降解ECM，激活成纤维细胞，诱导血管生成，形成转移灶。例如，在肝转移中，CRC-SCs可表达肝细胞生长因子受体（c-Met），与肝细胞分泌的HGF结合，激活PI3K/Akt通路，促进其增殖和存活。此外，CRC-SCs还可通过“分化-再干化”动态平衡维持转移灶的生长：部分细胞分化为增殖性肿瘤细胞，形成转移灶“主体”；另一部分细胞保持干细胞特性，成为转移复发的“根源”。05结直肠癌干细胞转移的靶向预防策略：从基础到临床结直肠癌干细胞转移的靶向预防策略：从基础到临床基于对CRC-SCs生物学特性和转移机制的深入理解，靶向预防CRC-SCs转移的策略应围绕“清除种子细胞”“阻断转移链条”“改造微环境”三大核心展开。目前，这些策略已从基础研究逐步走向临床前和临床探索，部分方案显示出良好的应用前景。靶向CRC-SCs表面标志物的干预策略表面标志物是CRC-SCs最直接的“识别标志”，通过靶向这些标志物，可实现CRC-SCs的特异性清除，减少转移风险。1.单克隆抗体与抗体药物偶联物（ADC）：针对CRC-SCs表面标志物的单克隆抗体可通过抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC）、补体依赖细胞毒性（CDC）等机制杀伤CRC-SCs。例如，抗CD44抗体（如RG7356）在临床前模型中可显著抑制CRC-SCs的自我更新和肝转移（转移灶体积减少72%，P＜0.01）。ADC是将单克隆抗体与细胞毒性药物偶联，通过抗体靶向性将药物递送至CRC-SCs，提高杀伤特异性。例如，抗CD133-DM1ADC在结直肠癌异种移植模型中，可选择性杀伤CD133+CRC-SCs，降低转移发生率（转移发生率从60%降至20%，P=0.002）。目前，抗CD44v6ADC（如RO6958688）已进入I期临床试验，初步结果显示其在晚期结直肠癌患者中可稳定疾病（SD率35%）。靶向CRC-SCs表面标志物的干预策略CAR-T细胞疗法：CSCs特异性免疫清除嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞是通过基因工程改造T细胞，使其表达能特异性识别CRC-SCs表面标志物的CAR分子，从而发挥杀伤作用。针对CRC-SCs的CAR-T细胞研发主要集中在CD133、CD44、EpCAM等靶点。例如，CD133-CAR-T细胞在体外可高效杀伤CD133+CRC-SCs，在体内可抑制肝转移模型的转移灶生长（无进展生存期延长2.3倍，P=0.001）。然而，CRC-SCs表面标志物的异质性和免疫抑制性微环境限制了CAR-T细胞的疗效。为解决这一问题，研究者开发了“双靶点CAR-T”（如CD133/CD44-CAR-T），可同时识别多个标志物，降低逃逸风险；或通过联合免疫检查点抑制剂（如抗PD-1抗体），逆转TME的免疫抑制状态。目前，CD44-CAR-T细胞已进入I期临床试验，初步显示出良好的安全性和一定的抗肿瘤活性。阻断自我更新信号通路的靶向治疗针对CRC-SCs自我更新调控的核心信号通路，开发特异性抑制剂，可抑制其干细胞特性，预防转移。1.Wnt通路抑制剂：Wnt通路是CRC-SCs自我更新的核心通路，其抑制剂主要包括：-Porcupine抑制剂：如LGK974，可抑制Wnt配体的分泌和修饰，阻断Wnt通路的激活。临床前研究表明，LGK974可降低CRC-SCs的比例，抑制肝转移（转移灶数量减少58%，P＜0.01）。目前，LGK974联合帕博利珠单抗在晚期结直肠癌患者中的I期临床试验显示，疾病控制率（DCR）达45%，且安全性可控。阻断自我更新信号通路的靶向治疗-β-catenin/TCF抑制剂：如PRI-724，可阻断β-catenin与TCF/LEF的结合，抑制下游靶基因的转录。在结直肠癌原位移植模型中，PRI-724可显著减少肝转移灶数目（P=0.003），且不影响正常肠干细胞的增殖。2.Notch与Hedgehog通路抑制剂：-Notch通路抑制剂：γ-分泌酶抑制剂（GSIs）如MRK003，可抑制Notch受体活化，降低CRC-SCs的自我更新能力。然而，GSIs的胃肠道毒副作用限制了其临床应用。为提高靶向性，研究者开发了“Notch受体抗体”（如抗DLL4抗体），可特异性阻断Notch配体与受体的结合，减少肠道干细胞毒性。临床前研究显示，抗DLL4抗体联合化疗可显著抑制CRC-SCs的肝转移（P=0.002）。阻断自我更新信号通路的靶向治疗-Hedgehog通路抑制剂：SMO抑制剂如Vismodegib，在结直肠癌临床试验中效果有限，这可能与CRC-SCs中Hh通路的“非依赖性激活”有关。因此，研究者转向靶向下游Gli转录因子的抑制剂（如GANT61），可同时抑制Gli1和Gli2，阻断Hh通路的下游信号。临床前研究表明，GANT61可显著抑制CRC-SCs的自我更新和转移（P＜0.01）。逆转CRC-SCs耐药性：联合治疗的新思路CRC-SCs的耐药性是转移预防中的关键障碍，通过联合治疗可逆转耐药，提高治疗效果。1.ABC转运体抑制剂与化疗的协同作用：ABC转运体介导的药物外排是CRC-SCs耐药的主要机制之一。将ABC转运体抑制剂（如维拉帕米、tariquidar）与化疗药物联合，可增加细胞内药物浓度，逆转耐药性。例如，维拉帕米联合5-FU可显著提高CRC-SCs对5-FU的敏感性（IC50降低4.2倍，P＜0.01）。然而，ABC转运体抑制剂在临床应用中可能因非特异性抑制而增加毒性，因此开发高选择性ABC转运体抑制剂（如靶向ABCG2的Ko143）是未来的研究方向。逆转CRC-SCs耐药性：联合治疗的新思路2.表观遗传调控药物的应用：表观遗传异常（如DNA甲基化、组蛋白修饰）在CRC-SCs的耐药中发挥重要作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACis）如伏立诺他，可通过恢复抑癌基因（如p16）的表达，增强CRC-SCs对化疗药物的敏感性。临床前研究表明，伏立诺他联合奥沙利铂可显著抑制CRC-SCs的增殖和转移（P＜0.01）。DNA甲基转移酶抑制剂（DNMTis）如阿扎胞苷，可通过去甲基化激活沉默的抑癌基因，逆转CRC-SCs的耐药表型。目前，HDACis联合化疗在结直肠癌中的临床试验已显示出一定的疗效（DCR达40%）。调控肿瘤微环境：打破CRC-SCs的“保护伞”TME是CRC-SCs存活和转移的“土壤”，通过调控TME，可破坏CRC-SCs的生存条件，预防转移。1.靶向肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的极化：TAMs是TME中主要的免疫抑制细胞，其M2型极化可促进CRC-SCs的存活和转移。通过抑制CSF-1/CSF-1R信号通路，可减少M2型TAMs的浸润，逆转免疫抑制状态。例如，CSF-1R抑制剂（如PLX3397）可显著降低CRC-SCs的比例，抑制肝转移（转移灶体积减少63%，P＜0.01）。联合抗PD-1抗体可进一步增强疗效，通过激活CD8+T细胞的抗肿瘤活性。调控肿瘤微环境：打破CRC-SCs的“保护伞”2.抑制癌症相关成纤维细胞（CAFs）的活化：CAFs是TME中主要的间质细胞，可通过分泌生长因子（如HGF、FGF）、ECM成分，促进CRC-SCs的侵袭和转移。靶向CAFs的活化标志物（如α-SMA、FAP）或其分泌的因子，可破坏转移微环境。例如，FAP-CAR-T细胞可特异性杀伤CAFs，减少ECM沉积，抑制CRC-SCs的肝转移（P=0.002）。此外，HGF/c-Met抑制剂（如卡博替尼）可阻断CAFs与CRC-SCs的旁分泌信号，抑制转移灶形成。免疫预防策略：激发针对CRC-SCs的免疫应答通过激活宿主免疫系统，特异性识别和清除CRC-SCs，可实现长期转移预防。1.CSCs疫苗的研发与临床前验证：CRC-SCs疫苗是通过分离CRC-SCs相关抗原（如WT1、MUC1），或负载DC细胞，激活机体特异性T细胞免疫反应，杀伤CRC-SCs。例如，负载CRC-SCs裂解物的DC疫苗在临床前模型中可诱导强效的CD8+T细胞反应，抑制肝转移（转移灶数量减少75%，P＜0.01）。目前，基于CD133肽的疫苗已在I期临床试验中显示出良好的安全性，部分患者产生了特异性抗体和T细胞反应。免疫预防策略：激发针对CRC-SCs的免疫应答2.检查点抑制剂联合CSCs靶向治疗的协同效应：免疫检查点抑制剂（如抗PD-1/PD-L1抗体）可解除T细胞的抑制状态，增强其对CRC-SCs的杀伤能力。与CSCs靶向治疗（如Wnt抑制剂、CAR-T细胞）联合，可产生协同效应。例如，抗PD-1抗体联合CD133-CAR-T细胞在结直肠癌肝转移模型中，可完全清除转移灶（P＜0.001），且无复发迹象。这种“免疫靶向联合”策略为CRC-SCs转移的预防提供了新思路。06挑战与未来方向：迈向个体化精准预防挑战与未来方向：迈向个体化精准预防尽管靶向预防CRC-SCs转移的策略已取得显著进展，但从实验室到临床仍面临诸多挑战。只有正视这些挑战，才能推动策略的优化和转化。CRC-SCs异质性与靶向逃逸的难题CRC-SCs的异质性是导致靶向逃逸的主要原因。单细胞测序研究表明，同一肿瘤内存在多个CRC-SCs亚群，其表面标志物、信号通路依赖性存在差异。例如，部分CRC-SCs依赖Wnt通路，而另一部分依赖Notch通路，单一靶点抑制剂难以清除所有CRC-SCs亚群。此外，CRC-SCs具有可塑性，非干细胞肿瘤细胞可在特定条件下（如化疗压力）转化为CRC-SCs，导致靶向治疗失效。解决这一难题需要：-开发多靶点联合策略：同时阻断2-3条核心信号通路（如Wnt+Notch），或靶向多个表面标志物（如CD133+CD44），降低逃逸风险。-动态监测CRC-SCs状态：通过液体活检（如外周血CTCs、外泌体）实时监测CRC-SCs的表型和基因型变化，及时调整