生物样本核酸提取技术员岗位招聘考试试卷及答案

生物样本核酸提取技术员岗位招聘考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.核酸提取的核心步骤包括样本裂解、______、核酸纯化和______。2.提取RNA时需避免______污染，常用抑制剂是______。3.蛋白酶K的作用是降解______，释放核酸。4.苯酚-氯仿抽提法中，DNA主要位于______相。5.常用核酸沉淀试剂是______和异丙醇。6.组织样本提取前常需______处理破碎细胞。7.DNA的基本组成单位是______。8.离心机转速单位常用______（非rpm）。9.全血提取DNA前需去除______减少杂质。10.qPCR可用于核酸的______分析。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.去除RNA中DNA污染的试剂是？A.RNaseAB.DNaseIC.蛋白酶KD.DEPC2.RNA样本保存最佳温度是？A.4℃B.-20℃C.-80℃D.室温3.异丙醇沉淀核酸的优点是？A.沉淀量少B.体积大C.快速沉淀D.不影响酶反应4.需先裂解红细胞再提DNA的样本是？A.血清B.全血C.唾液D.组织5.蛋白酶K最适作用温度是？A.37℃B.56℃C.65℃D.95℃6.苯酚-氯仿抽提后上层水相主要含？A.DNA/RNAB.蛋白质C.多糖D.脂类7.核酸纯度检测常用方法是？A.电泳B.A260/A280C.比色法D.质谱8.导致RNA降解的情况是？A.立即冻存B.RNase-free试剂C.戴手套D.室温放1小时9.磁珠法提取核酸的原理是？A.核酸与磁珠特异性结合B.磁珠吸附蛋白C.磁珠溶解核酸D.磁珠沉淀杂质10.DNA提取中加RNaseA的目的是？A.去RNA污染B.降解蛋白C.沉淀核酸D.抑制DNase三、多项选择题（每题2分，共20分）1.核酸提取常用方法包括？A.苯酚-氯仿法B.磁珠法C.硅胶膜法D.煮沸法2.RNA提取注意事项有？A.避免RNase污染B.快速处理C.RNase-free容器D.加β-巯基乙醇3.核酸沉淀试剂有？A.无水乙醇B.异丙醇C.醋酸钠D.氯化钠4.组织样本预处理步骤包括？A.研磨B.匀浆C.液氮冷冻D.过滤5.A260/A280比值异常的原因是？A.蛋白污染（<1.8）B.RNA污染（>2.0）C.多糖污染D.酚污染6.蛋白酶K的特点是？A.耐高温B.降解多种蛋白C.需Ca²+激活D.不降解核酸7.全血裂解红细胞的试剂是？A.ACK液B.蒸馏水C.75%乙醇D.生理盐水8.磁珠法优势是？A.自动化高B.纯度高C.耗时短D.成本低9.适合提取核酸的样本是？A.新鲜组织B.冻存组织C.FFPE组织D.腐败样本10.核酸浓度检测方法是？A.分光光度法B.琼脂糖电泳C.qPCRD.比色法四、判断题（每题2分，共20分）1.DEPC处理的水可直接溶解RNA。（）2.蛋白酶K在95℃仍有活性。（）3.苯酚-氯仿抽提后中间层是变性蛋白。（）4.异丙醇沉淀量为样本的0.5-1倍。（）5.RNA的A260/A280正常范围1.8-2.0。（）6.磁珠法无需离心。（）7.全血可直接提DNA无需处理红细胞。（）8.样本裂解越充分，核酸得率越高。（）9.DNaseI37℃作用30分钟去DNA污染。（）10.FFPE组织需先脱蜡再提核酸。（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述苯酚-氯仿法提取DNA的主要步骤。2.提取RNA时如何避免RNase污染？3.磁珠法提取核酸的基本原理是什么？4.A260/A280比值异常（<1.8或>2.0）的原因及解决方法？六、讨论题（每题5分，共10分）1.全血DNA提取得率低、纯度差，分析原因及改进措施。2.如何根据样本类型（新鲜组织、FFPE、唾液）选择核酸提取方法？---答案部分一、填空题1.蛋白去除；核酸沉淀2.RNase；DEPC（或RNA酶抑制剂）3.蛋白质（或结合蛋白）4.水5.无水乙醇6.匀浆（或研磨）7.脱氧核苷酸8.相对离心力（g）9.红细胞10.定量二、单项选择题1.B2.C3.C4.B5.B6.A7.B8.D9.A10.A三、多项选择题1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABCD6.ABD7.AB8.ABC9.ABC10.ABCD四、判断题1.√2.×3.√4.×5.√6.×7.×8.√9.√10.√五、简答题1.苯酚-氯仿法提DNA步骤：①样本裂解（加SDS+蛋白酶K，56℃孵育）；②蛋白去除（加苯酚-氯仿-异戊醇，振荡离心取上层水相）；③重复抽提（若污染重，再用氯仿抽提）；④核酸沉淀（加2倍无水乙醇或1倍异丙醇，-20℃放置）；⑤洗涤（75%乙醇洗2次，晾干）；⑥溶解（TE缓冲液溶解保存）。2.避免RNase污染措施：①试剂用DEPC处理并灭菌；②耗材用RNase-free或DEPC处理；③戴手套、超净台操作；④新鲜样本立即-80℃冻存，避免反复冻融；⑤裂解液加β-巯基乙醇、RNase抑制剂；⑥超净台定期用RNase去除剂擦拭。3.磁珠法原理：核酸与磁珠表面特异性基团（羧基、硅羟基等）在特定条件下结合，杂质不结合。步骤：①裂解释放核酸；②结合（加磁珠+结合液，调整条件使核酸吸附）；③洗涤（去除未结合杂质）；④洗脱（调整条件使核酸解离）；⑤磁架分离磁珠，取上清得纯化核酸。4.A260/A280异常原因及解决：①<1.8（蛋白污染）：重复苯酚-氯仿抽提或蛋白酶K处理；②>2.0（RNA污染/酚污染）：DNA提取得加RNaseA；酚污染则增加氯仿抽提；③多糖污染：用含醋酸钠的乙醇洗涤。六、讨论题1.全血DNA得率低、纯度差的原因及改进：原因：①红细胞未充分裂解（残留血红蛋白）；②裂解不充分（蛋白酶K活性不足）；③沉淀不完全（乙醇量不够）；④洗涤不充分（残留盐离子）。改进：①先加ACK液裂解红细胞，离心去上清；②调整蛋白酶K孵育条件（56℃延长至1-2小时）；③加2倍无水乙醇，-20℃放1小时；④75%乙醇洗2次，充分振荡离心。2.不同样本的提取方法选择：①新鲜组织：优先磁珠法/硅胶膜法（简便得率高），也可用苯酚-