2026年生物技术实验题目分子生物学实验技术与操作考核题

2026年生物技术实验题目：分子生物学实验技术与操作考核题一、选择题（每题2分，共20题）1题：PCR技术的核心原理是什么？A.逆转录B.基因重组C.DNA扩增D.基因测序2题：下列哪种酶主要用于DNA连接反应？A.DNaseIB.RNA聚合酶C.DNA连接酶D.聚合酶链式反应酶3题：凝胶电泳中，DNA片段的迁移速率主要取决于什么？A.电场强度B.DNA片段大小C.凝胶浓度D.DNA序列4题：RNA干扰（RNAi）技术主要通过抑制哪种分子来发挥作用？A.mRNAB.tRNAC.rRNAD.DNA5题：基因克隆中最常用的载体是？A.病毒B.质粒C.细菌人工染色体（BAC）D.YAC6题：Westernblotting实验中，首先需要用哪种抗体检测目标蛋白？A.一抗B.二抗C.三抗D.辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体7题：CRISPR-Cas9技术的核心元件是什么？A.gRNAB.Cas9蛋白C.基因编辑器D.基因靶向序列8题：逆转录PCR（RT-PCR）主要用于检测什么？A.基因表达B.DNA序列C.蛋白质结构D.病毒感染9题：荧光定量PCR（qPCR）中，SYBRGreenI染料的作用是？A.扩增DNAB.检测荧光信号C.引物设计D.调节退火温度10题：基因芯片技术主要用于？A.DNA测序B.基因表达分析C.基因克隆D.蛋白质组学二、填空题（每空1分，共10空）1.PCR反应体系中，通常需要加入______、______、______和______。2.DNA凝胶电泳中，溴化乙锭（EthidiumBromide）的作用是______。3.基因编辑技术CRISPR-Cas9中，gRNA的长度通常为______个核苷酸。4.Westernblotting实验中，蛋白质印迹的膜通常用______封闭。5.RT-PCR实验中，逆转录酶的作用是将______转录为cDNA。6.基因芯片技术通过______检测基因表达水平。7.荧光定量PCR中，融解曲线分析用于______。8.基因克隆过程中，载体质粒通常需要携带______和______。9.RNA干扰（RNAi）的分子机制主要通过______和______实现。10.基因测序中，Sanger法的主要原理是______。三、简答题（每题5分，共6题）1题：简述PCR技术的步骤及其关键条件。2题：解释凝胶电泳在分子生物学实验中的作用及原理。3题：比较DNA测序的Sanger法和二代测序技术的优缺点。4题：简述CRISPR-Cas9基因编辑技术的应用领域。5题：解释Westernblotting实验的步骤及其原理。6题：简述RNA干扰（RNAi）的分子机制及其应用。四、实验设计题（每题10分，共2题）1题：设计一个实验方案，用于检测某基因在肝癌细胞中的表达水平。实验需要包括实验目的、原理、步骤、试剂及预期结果。2题：设计一个实验方案，利用CRISPR-Cas9技术敲除某种病原菌的关键毒力基因。实验需要包括实验目的、原理、步骤、试剂及预期结果。五、计算题（每题5分，共2题）1题：某PCR实验需要扩增一个1.5kb的DNA片段，引物退火温度为55℃，PCR循环数为30次。计算理论上该片段的产量。2题：某Westernblotting实验中，已知目标蛋白的分子量为50kDa，电泳时凝胶孔径为0.8mm，电场强度为5V/cm。计算该蛋白的迁移时间。答案与解析一、选择题答案与解析1.C（PCR的核心原理是DNA扩增，通过变性、退火、延伸三个步骤实现）。2.C（DNA连接酶用于将DNA片段连接在一起，是基因克隆的关键酶）。3.B（凝胶电泳中，DNA片段大小是决定迁移速率的主要因素，片段越大迁移越慢）。4.A（RNAi通过降解mRNA抑制基因表达）。5.B（质粒是基因克隆最常用的载体，因其易于操作和复制）。6.A（Westernblotting首先用一抗特异性结合目标蛋白）。7.A（gRNA是CRISPR-Cas9系统的关键元件，负责靶向基因序列）。8.A（RT-PCR用于检测mRNA表达水平，常用于基因表达研究）。9.B（SYBRGreenI染料通过结合双链DNA发出荧光，用于实时检测扩增信号）。10.B（基因芯片技术通过微阵列检测大量基因的表达水平）。二、填空题答案与解析1.TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物、模板DNA2.染色DNA片段以便在紫外灯下观察3.204.封闭剂（如牛血清白蛋白或脱脂奶粉）5.mRNA6.荧光探针7.鉴别PCR产物特异性8.抗原决定簇（Antigenicdeterminant）和复制起始点（Originofreplication）9.mRNA降解和翻译抑制10.化学合成法测序三、简答题答案与解析1题：PCR步骤包括变性（95℃）、退火（55℃）、延伸（72℃），关键条件包括Taq酶、dNTPs、引物、模板DNA和缓冲液。2题：凝胶电泳通过电场使带电分子在凝胶中迁移，按大小分离DNA或蛋白质，原理基于分子大小与电场力的关系。3题：Sanger法基于链终止子测序，精度高但通量低；二代测序通过并行测序提高通量，但准确率稍低。4题：CRISPR-Cas9用于基因敲除、基因治疗、疾病模型构建等。5题：Westernblotting步骤包括电泳、转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、化学发光检测。6题：RNAi通过小RNA（siRNA）降解mRNA或抑制翻译，用于基因功能研究或药物开发。四、实验设计题答案与解析1题：-目的：检测肝癌细胞中某基因的表达水平。-原理：RT-PCR扩增目标基因片段，qPCR定量表达水平。-步骤：①提取总RNA；②逆转录为cDNA；③qPCR扩增目标基因；④用内参基因（如GAPDH）校正。-试剂：TRIzol、逆转录酶、qPCR试剂盒、引物。-预期结果：肝癌细胞中目标基因表达量显著高于正常细胞。2题：-目的：敲除病原菌毒力基因。-原理：CRISPR-Cas9通过gRNA靶向切割基因，导致基因失活。-步骤：①设计gRNA靶向毒力基因；②构建CRISPR-Cas9载体；③转化病原菌；④筛选突变菌株。-试剂：gRNA、Cas9表达载体、感受态细胞。-预期结果：病原菌毒力减弱。五、计算题答案与解析1题：理论产量与循环数