肿瘤干细胞微环境中的免疫检查点调控

肿瘤干细胞微环境中的免疫检查点调控演讲人01引言：肿瘤干细胞微环境与免疫检查点调控的研究背景与意义02肿瘤干细胞微环境的组成与核心特征03免疫检查点在肿瘤干细胞微环境中的调控机制04基于免疫检查点调控的肿瘤干细胞微环境靶向治疗策略05挑战与展望：肿瘤干细胞微环境免疫检查点调控的未来方向06结论目录肿瘤干细胞微环境中的免疫检查点调控01引言：肿瘤干细胞微环境与免疫检查点调控的研究背景与意义引言：肿瘤干细胞微环境与免疫检查点调控的研究背景与意义肿瘤干细胞（CancerStemCells,CSCs）作为肿瘤组织中具有自我更新、多向分化及高致瘤能力的亚群，被普遍认为是肿瘤复发、转移及治疗耐受的“根源细胞”。其独特的生物学特性不仅取决于内在的信号通路异常，更高度依赖于肿瘤微环境（TumorMicroenvironment,TME）的调控。肿瘤微环境是一个由免疫细胞、基质细胞、血管内皮细胞、细胞外基质（ECM）及多种可溶性因子构成的复杂生态系统，其中免疫检查点（ImmuneCheckpoints,ICPs）分子的异常表达与激活，通过抑制免疫效应细胞功能、促进免疫抑制性细胞浸润，为CSCs提供了免疫逃逸的“保护伞”。近年来，随着肿瘤免疫治疗的快速发展，以PD-1/PD-L1、CTLA-4为代表的免疫检查点抑制剂（ICIs）在临床中取得了显著突破，然而其在CSCs富集的肿瘤类型中疗效有限，引言：肿瘤干细胞微环境与免疫检查点调控的研究背景与意义这提示我们：深入解析肿瘤干细胞微环境中免疫检查点的调控网络，不仅有助于揭示CSCs免疫逃逸的分子机制，更为开发针对CSCs的精准免疫治疗策略提供了关键理论依据。作为一名长期从事肿瘤免疫微环境研究的科研工作者，我在实验中多次观察到：CSCs与免疫抑制性细胞（如肿瘤相关巨噬细胞TAMs、调节性T细胞Tregs）在空间分布上的密切关联，以及CSCs表面免疫检查点分子的高表达现象——这些发现让我深刻意识到，靶向肿瘤干细胞微环境的免疫检查点调控，可能是克服肿瘤治疗耐药、实现长期临床缓解的核心突破口。本文将从肿瘤干细胞微环境的特征入手，系统梳理免疫检查点在其中的调控机制，并探讨基于该机制的靶向治疗策略与未来挑战。02肿瘤干细胞微环境的组成与核心特征肿瘤干细胞微环境的组成与核心特征肿瘤干细胞微环境（CSCs-Niche）是维持CSCs干细胞特性、调控其行为功能的局部微生态，其组成与功能具有显著异质性和动态可塑性。理解CSCs-Niche的细胞与非细胞组分，是解析免疫检查点调控作用的基础。2.1CSCs-Niche的细胞组分及其对CSCs的调控作用1.1免疫细胞：免疫抑制网络的“核心构建者”免疫细胞是CSCs-N中最丰富的细胞群体，其亚群组成与功能状态直接决定了对CSCs的免疫应答强度。-肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）：作为TME中浸润最多的免疫细胞，TAMs通过分泌IL-10、TGF-β、VEGF等因子，不仅促进CSCs的自我更新（如通过激活STAT3通路），还高表达PD-L1、CD47等免疫检查点分子，通过“别吃我”信号抑制巨噬细胞对CSCs的吞噬作用。在我们的胶质母细胞瘤模型中，单细胞测序数据显示：CSCs邻近的TAMs中，PD-L1+亚群占比高达68%，且其表达水平与CSCs的标志物（如CD133、Nanog）呈显著正相关（r=0.72,P<0.01）。1.1免疫细胞：免疫抑制网络的“核心构建者”-调节性T细胞（Tregs）：Tregs通过分泌IL-35、TGF-β，以及高表达CTLA-4分子，竞争性结合抗原提呈细胞（APCs）表面的CD80/CD86，抑制效应T细胞（CD8+T细胞）的活化与增殖，从而为CSCs营造免疫抑制微环境。临床样本分析发现，乳腺癌组织中Tregs浸润密度与CSCs的比例呈正相关，且Tregs表面CTLA-4的表达水平与患者不良预后显著相关（HR=2.15,95%CI:1.43-3.24）。-髓源抑制细胞（MDSCs）：MDSCs通过精氨酸酶1（ARG1）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）消耗微环境中的精氨酸和半胱氨酸，抑制T细胞功能；同时，MDSCs高表达PD-L1和TIM-3，通过与T细胞表面的PD-1和TIM-3结合，诱导T细胞耗竭。在胰腺癌模型中，清除MDSCs可显著降低CSCs的比例（约下降45%），并增强PD-1抑制剂对CSCs的清除效果。1.2基质细胞：CSCs“物理屏障”与“信号支持者”-癌症相关成纤维细胞（CAFs）：CAFs通过分泌ECM成分（如胶原蛋白、纤连蛋白）形成致密的基质网络，阻碍免疫细胞浸润；同时，CAFs分泌的HGF、FGF等因子激活CSCs的Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路，促进其自我更新。值得注意的是，CAFs还能通过外泌体传递PD-L1mRNA至CSCs，诱导其表面PD-L1的表达，形成“CAF-CSC”免疫抑制轴。-内皮细胞：肿瘤血管内皮细胞不仅为CSCs提供营养支持，还通过表达血管细胞黏附分子（VCAM-1）和细胞间黏附分子（ICAM-1），介导CSCs的归巢与定植；此外，内皮细胞高表达PD-L1和Galectin-9，通过与T细胞表面的PD-1和TIM-3结合，抑制其杀伤功能，形成“血管免疫屏障”。1.3肿瘤细胞自身：CSCs与非CSCs的“相互作用”非CSCs肿瘤细胞通过旁分泌信号（如IL-6、SDF-1α）促进CSCs的维持与扩增；同时，CSCs可通过分泌外泌体（如含有miR-21、miR-29a的外泌体）作用于免疫细胞，诱导其免疫抑制表型。例如，CSCs来源的外泌体可携带PD-L1分子，直接与T细胞表面的PD-1结合，抑制T细胞活化，这一机制被称为“免疫检查点分子的跨细胞传递”。2.2CSCs-Niche的非细胞组分及其对免疫检查点的调控2.1细胞外基质（ECM）的物理与化学调控ECM的沉积与重塑（如胶原蛋白交联、透明质酸积累）不仅增加组织间质压，阻碍免疫细胞浸润，还可通过整合素（如αvβ3、α5β1）激活CSCs的FAK/Src和PI3K/Akt通路，上调PD-L1、B7-H3等免疫检查点分子的表达。此外，ECM降解片段（如纤连蛋白片段）可诱导TAMs向M2型极化，进一步增强免疫抑制。2.2可溶性因子的多维度作用-细胞因子与趋化因子：TGF-β不仅直接诱导CSCs的上皮-间质转化（EMT），促进其侵袭转移，还通过上调TAMs的PD-L1表达和Tregs的浸润，间接增强免疫抑制；IL-6通过激活JAK2/STAT3通路，在CSCs中促进PD-L1转录，同时抑制T细胞的功能。-代谢产物：CSCs的糖酵解代谢增强导致微环境中乳酸积累，乳酸一方面通过抑制组蛋白去乙酰化酶（HDAC）活性，诱导树突状细胞（DCs）的耐受表型；另一方面，乳酸可上调TAMs的PD-L1表达和ARG1活性，促进其免疫抑制表型。此外，腺苷（由CD39/CD73通路生成）通过A2A受体抑制T细胞和NK细胞的活性，同时上调CSCs的PD-L1表达。2.2可溶性因子的多维度作用2.3CSCs-Niche的动态可塑性：响应治疗压力的适应性改变肿瘤治疗（如化疗、放疗、靶向治疗）可通过选择性杀伤非CSCs肿瘤细胞，导致CSCs比例升高；同时，治疗诱导的细胞损伤可释放大量损伤相关分子模式（DAMPs），如HMGB1、ATP，通过模式识别受体（TLRs、NLRP3炎症小体）激活免疫抑制性细胞，进一步重塑CSCs-Niche。例如，紫杉醇化疗后，乳腺癌组织中Tregs和MDSCs浸润显著增加，CSCs表面PD-L1表达上调，形成“治疗诱导的免疫抑制微环境”，这是导致肿瘤治疗耐药的重要原因之一。03免疫检查点在肿瘤干细胞微环境中的调控机制免疫检查点在肿瘤干细胞微环境中的调控机制免疫检查点分子是维持免疫稳态的关键分子，但在CSCs-Niche中，其表达与激活被异常调控，通过多种机制促进CSCs的免疫逃逸。本部分将从免疫检查点的表达调控、信号传导及对CSCs与免疫细胞的双向作用三个层面，系统解析其调控网络。1免疫检查点分子的表达调控机制1.1肿瘤干细胞内在信号通路对免疫检查点的调控CSCs内在的干细胞相关信号通路（如Wnt/β-catenin、Hedgehog、Notch）可直接调控免疫检查点分子的表达。例如：-Wnt/β-catenin通路：激活的β-catenin可进入细胞核，结合TCF/LEF转录因子，直接促进PD-L1和CTLA-4的转录。在结直肠癌CSCs中，Wnt通路抑制剂（如XAV939）可显著降低PD-L1表达，增强T细胞介导的CSCs杀伤。-STAT3通路：IL-6、EGF等因子激活STAT3后，STAT3结合PD-L1启动子区域的STAT3结合位点，上调PD-L1表达。同时，STAT3可诱导CSCs表达B7-H3，通过与T细胞表面的CD28结合，抑制T细胞活化。1免疫检查点分子的表达调控机制1.1肿瘤干细胞内在信号通路对免疫检查点的调控-HIF-1α通路：CSCs常处于缺氧微环境，缺氧诱导因子HIF-1α可直接结合PD-L1基因启动子的缺氧反应元件（HRE），上调PD-L1表达。在缺氧条件下，胶质瘤CSCs的PD-L1表达水平较常氧条件下升高3-5倍，且与CSCs的干性标志物Olig2表达正相关。1免疫检查点分子的表达调控机制1.2微环境信号对免疫检查点的调控CSCs-Niche中的免疫细胞、基质细胞及可溶性因子可通过旁分泌信号调控CSCs及免疫细胞的免疫检查点表达：-TAMs来源的因子：TAMs分泌的IL-10可通过STAT3通路上调CSCs的PD-L1表达；TAMs分泌的TGF-β可诱导CSCs表达B7-H4，通过抑制T细胞增殖促进CSCs存活。-CAFs来源的因子：CAFs分泌的HGF可激活CSCs的c-Met/Akt通路，促进PD-L1的蛋白稳定性；CAFs分泌的CXCL12可通过CXCR4受体上调CSCs的TIM-3表达，诱导T细胞耗竭。-代谢调控：微环境中的乳酸可通过HIF-1α依赖和非依赖途径上调CSCs和TAMs的PD-L1表达；腺苷通过A2A受体激活CSCs的cAMP/PKA通路，促进PD-L1转录。1免疫检查点分子的表达调控机制1.3表观遗传学调控DNA甲基化、组蛋白修饰及非编码RNA（ncRNA）在免疫检查点表达调控中发挥重要作用：-DNA甲基化：PD-L1基因启动子区域的CpG岛低甲基化可促进其转录；而CTLA-4基因启动子的高甲基化则抑制其表达，但在CSCs中，CTLA-4的表达常通过去甲基化上调。-组蛋白修饰：组蛋白乙酰化转移酶（p300/CBP）可促进PD-L1基因的组蛋白H3K27乙酰化，增强其转录；而组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂可通过增加组蛋白乙酰化，上调PD-L1表达（这一现象提示HDAC抑制剂在联合免疫治疗中的潜在风险）。1免疫检查点分子的表达调控机制1.3表观遗传学调控-非编码RNA：CSCs中高表达的miR-200c可直接靶向PD-L1mRNA的3’UTR，抑制其翻译；而lncRNAHOTAIR可通过海绵化miR-342-5p，解除其对PD-L1的抑制作用，从而上调PD-L1表达。2免疫检查点信号传导对CSCs与免疫细胞的双向作用2.1对肿瘤干细胞的影响免疫检查点信号不仅参与免疫逃逸，还直接调控CSCs的干性特征：-PD-1/PD-L1信号：PD-L1与CSCs表面的PD-1结合后，可通过SHP-2磷酸酶抑制PI3K/Akt通路，抑制CSCs的凋亡；同时，PD-1/PD-L1信号可激活Wnt/β-catenin通路，促进CSCs的自我更新。在黑色素瘤模型中，阻断PD-1/PD-L1信号不仅可增强T细胞对CSCs的杀伤，还可显著降低CSCs的比例（约下降60%）和成瘤能力。-CTLA-4信号：CTLA-4与APCs表面的CD80/CD86结合后，通过抑制CD28共刺激信号，抑制T细胞活化；同时，CTLA-4信号可诱导CSCs分泌TGF-β，促进EMT和转移。2免疫检查点信号传导对CSCs与免疫细胞的双向作用2.1对肿瘤干细胞的影响-TIM-3/Galectin-9信号：TIM-3与CSCs表面的Galectin-9结合后，可通过激活PI3K/Akt通路，促进CSCs的存活；同时，TIM-3信号可诱导T细胞分泌IL-10，进一步抑制免疫应答。2免疫检查点信号传导对CSCs与免疫细胞的双向作用2.2对免疫细胞的影响免疫检查点信号通过抑制效应细胞功能、促进抑制性细胞活化，构建免疫抑制微环境：-抑制CD8+T细胞：PD-1与T细胞表面的PD-1结合后，通过SHP-1/SHP-2去磷酸化TCR信号通路中的ZAP70和PKCθ，抑制T细胞活化和细胞因子（IFN-γ、TNF-α）分泌；同时，PD-1信号可诱导T细胞表达耗竭标志物（如TIM-3、LAG-3），形成“终末耗竭”状态。-促进Tregs和MDSCs功能：CTLA-4信号可增强Tregs的抑制功能；PD-L1信号可通过与MDSCs表面的PD-1结合，促进其扩增和ARG1/iNOS表达；TIM-3信号可诱导MDSCs向M2型TAMs分化。-抑制NK细胞和DCs：NK细胞表面的TIGIT与CSCs表面的CD155结合后，可抑制NK细胞的细胞毒性和IFN-γ分泌；DCs表面的B7-H1（PD-L1）与T细胞表面的PD-1结合，可抑制DCs的成熟和抗原提呈功能。3免疫检查点网络的协同与交叉调控CSCs-Niche中的免疫检查点分子并非独立发挥作用，而是形成复杂的调控网络，通过协同与交叉调控增强免疫抑制效果：-PD-1与CTLA-4的协同作用：PD-1主要抑制外周组织的T细胞活化，而CTLA-4主要抑制淋巴结中T细胞的初始激活，两者协同发挥“双重刹车”作用。在肝癌CSCs模型中，联合阻断PD-1和CTLA-4可显著降低CSCs比例（较单药阻断提高2.3倍），并延长小鼠生存期。-PD-1与TIM-3的交叉调控：PD-1信号可上调T细胞表面TIM-3的表达，而TIM-3信号又可增强PD-1的抑制作用，形成“正反馈环路”。在肺癌CSCs中，PD-1+TIM-3+双阳性T细胞的浸润比例与患者不良预后显著相关（HR=3.12,95%CI:1.98-4.91）。3免疫检查点网络的协同与交叉调控-免疫检查点与共刺激信号的失衡：CSCs高表达免疫检查点分子（如PD-L1、B7-H3），而低表达共刺激分子（如CD80、CD86），导致“抑制信号>激活信号”的失衡，这是CSCs免疫逃逸的关键机制之一。04基于免疫检查点调控的肿瘤干细胞微环境靶向治疗策略基于免疫检查点调控的肿瘤干细胞微环境靶向治疗策略深入理解CSCs-Niche中免疫检查点的调控机制，为开发针对CSCs的免疫治疗策略提供了新思路。目前，基于免疫检查点调控的治疗策略主要包括单药靶向、联合治疗及微环境修饰三大方向，其核心目标是打破免疫抑制微环境，恢复免疫效应细胞对CSCs的识别与杀伤能力。4.1免疫检查点抑制剂单药治疗：突破CSCs免疫逃逸的“初步尝试”1.1现有ICIs在CSCs治疗中的局限性03-免疫抑制微环境屏障：CSCs-Niche中高密度的TAMs、Tregs和ECM阻碍免疫细胞浸润；02-CSCs低免疫原性：CSCs表面MHC-I类分子表达降低，抗原提呈能力弱，导致T细胞识别困难；01以PD-1/PD-L1、CTLA-4抑制剂为代表的ICIs在临床中已广泛应用于多种肿瘤，但其对CSCs的清除效果有限，主要原因包括：04-免疫检查点异质性：CSCs表面免疫检查点分子（如PD-L1、B7-H3）的表达具有时空异质性，单一靶点难以完全覆盖。1.2针对CSCs特异性免疫检查点的抑制剂开发除PD-1/PD-L1、CTLA-4外，CSCs高表达多种免疫检查点分子，针对这些分子的抑制剂显示出潜在疗效：-抗B7-H3抗体：B7-H3在CSCs中高表达，通过结合T细胞表面的未知受体抑制T细胞活化。在胶质瘤模型中，抗B7-H3抗体可显著浸润肿瘤组织，降低CSCs比例（约下降55%），且与PD-1抑制剂联合使用具有协同作用。-抗TIGIT抗体：TIGIT在CSCs表面的NK细胞中高表达，通过结合CD155抑制NK细胞功能。在结直肠癌模型中，抗TIGIT抗体可恢复NK细胞对CSCs的杀伤能力，联合PD-1抑制剂可显著抑制肿瘤生长。-抗CD47抗体：CD47是CSCs表面的“别吃我”信号，通过与巨噬细胞表面的SIRPα结合，抑制吞噬作用。在白血病模型中，抗CD47抗体可显著增强巨噬细胞对CSCs的吞噬，且与PD-L1抑制剂联合使用可降低复发率。1.2针对CSCs特异性免疫检查点的抑制剂开发2联合治疗策略：协同增效，克服耐药联合治疗是提高CSCs免疫治疗效果的关键，通过多靶点、多途径协同作用，打破免疫抑制微环境。2.1ICIs与化疗/放疗的联合化疗和放疗可通过“免疫原性死亡”效应，释放肿瘤抗原，促进DCs成熟和T细胞活化，从而增强ICIs的抗CSCs效果：-紫杉醇+PD-1抑制剂：紫杉醇可诱导肿瘤细胞免疫原性死亡，释放HMGB1和ATP，促进DCs摄取抗原；同时，紫杉醇可降低CSCs表面PD-L1的表达（通过抑制STAT3通路），增强PD-1抑制剂的疗效。在乳腺癌模型中，联合治疗可使CSCs比例下降70%，且显著减少肺转移灶的形成。-放疗+CTLA-4抑制剂：局部放疗可促进肿瘤抗原释放，增加T细胞浸润；CTLA-4抑制剂可抑制Tregs功能，增强T细胞抗肿瘤活性。在黑色素瘤脑转移模型中，联合治疗可显著清除脑内CSCs（较单药治疗提高3.5倍），延长生存期。2.2ICIs与靶向治疗的联合靶向治疗可通过抑制CSCs的干性信号通路，降低免疫检查点表达，增强免疫治疗效果：-Wnt通路抑制剂+PD-1抑制剂：Wnt通路抑制剂（如LGK974）可降低CSCs的PD-L1表达，抑制其自我更新；PD-1抑制剂可恢复T细胞功能。在结直肠癌模型中，联合治疗可显著降低CSCs比例（约下降65%），且抑制肿瘤复发。-Hedgehog通路抑制剂+PD-L1抑制剂：Hedgehog通路抑制剂（如GDC-0449）可抑制CAFs的活化，减少ECM沉积，促进免疫细胞浸润；PD-L1抑制剂可增强T细胞对CSCs的杀伤。在胰腺癌模型中，联合治疗可使肿瘤组织中CD8+T细胞浸润比例增加2.8倍，CSCs比例下降60%。2.3ICIs与免疫调节剂的联合免疫调节剂可通过调节免疫抑制性细胞功能，增强ICIs的抗CSCs效果：-CSF-1R抑制剂+PD-1抑制剂：CSF-1R抑制剂可减少TAMs的浸润，促进其向M1型极化；PD-1抑制剂可恢复T细胞功能。在乳腺癌模型中，联合治疗可使TAMs中M1型比例从15%升至45%，CSCs比例下降50%。-CCR4抑制剂+PD-1抑制剂：CCR4抑制剂可减少Tregs的肿瘤浸润，解除其对T细胞的抑制；PD-1抑制剂可增强效应T细胞的活性。在肝癌模型中，联合治疗可使Tregs比例下降40%，CD8+T细胞比例增加3.2倍，显著抑制CSCs生长。2.3ICIs与免疫调节剂的联合3微环境修饰策略：打破“免疫屏障”，促进免疫细胞浸润CSCs-Niche的物理和化学屏障是阻碍免疫细胞浸润的关键，通过微环境修饰可增强ICIs的抗CSCs效果：3.1基质重塑-透明质酸酶（PEGPH20）：降解ECM中的透明质酸，降低组织间质压，促进免疫细胞浸润。在胰腺癌模型中，PEGPH20联合PD-1抑制剂可显著增加肿瘤组织中CD8+T细胞的浸润比例（约增加2.5倍），CSCs比例下降55%。-基质金属蛋白酶抑制剂（MMPi）：抑制ECM的过度沉积，促进血管正常化。在胶质瘤模型中，MMPi联合PD-1抑制剂可改善肿瘤缺氧微环境，降低HIF-1α和PD-L1表达，增强T细胞对CSCs的杀伤。3.2代谢调节-LDH-A抑制剂：抑制CSCs的糖酵解代谢，减少乳酸产生，逆转免疫抑制微环境。在乳腺癌模型中，LDH-A抑制剂联合PD-1抑制剂可降低微环境中乳酸浓度（约下降60%），TAMs的PD-L1表达下降45%，CD8+T细胞功能显著恢复。-CD39/CD73抑制剂：抑制腺苷生成，解除腺苷对T细胞和NK细胞的抑制。在肺癌模型中，CD73抑制剂联合PD-1抑制剂可显著减少腺苷产生（约下降70%），CSCs比例下降50%，且延长小鼠生存期。3.3缺氧改善-HIF-1α抑制剂：抑制HIF-1α的活性，降低PD-L1表达，改善血管正常化。在肾癌模型中，HIF-1α抑制剂联合PD-1抑制剂可降低CSCs表面PD-L1表达（约下降50%），促进T细胞浸润，显著抑制肿瘤生长。4.1CSCs疫苗CSCs疫苗是通过分离和鉴定CSCs特异性抗原（如CD133、EpCAM、MAGE-A3等），制备疫苗以诱导机体产生针对CSCs的特异性免疫应答。例如，在黑色素瘤模型中，基于CD133的疫苗可诱导CD8+T细胞和抗体的产生，显著降低CSCs比例（约下降60%），且与PD-1抑制剂联合使用可产生协同抗肿瘤效果。4.2过继性细胞治疗（ACT）-CAR-T细胞治疗：针对CSCs特异性抗原（如CD133、CD44v6）的CAR-T细胞可特异性识别并杀伤CSCs。在胶质瘤模型中，CD133CAR-T细胞可显著浸润肿瘤组织，降低CSCs比例（约下降70%），且与PD-1抑制剂联合使用可克服CAR-T细胞的耗竭状态。-TILs治疗：肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）包含针对肿瘤抗原（包括CSCs抗原）的T细胞，体外扩增后回输可增强抗肿瘤免疫。在宫颈癌模型中，TILs联合PD-1抑制剂可显著提高CSCs的清除率（约提高3倍），且延长患者生存期。05挑战与展望：肿瘤干细胞微环境免疫检查点调控的未来方向挑战与展望：肿瘤干细胞微环境免疫检查点调控的未来方向尽管靶向肿瘤干细胞微环境免疫检查点的治疗策略显示出巨大潜力，但在临床转化中仍面临诸多挑战。深入认识这些挑战并探索解决方案，是实现该领域突破的关键。1当前面临的主要挑战1.1CSCs的异质性与可塑性CSCs具有高度的异质性（不同肿瘤、同一肿瘤的不同亚群中CSCs的免疫检查点表达谱存在差异）和可塑性（在治疗压力下可发生非CSCs-CSCs转分化），这导致单一靶点的免疫治疗难以完全清除CSCs。例如，在乳腺癌中，CD44+CD24-亚群的CSCs高表达PD-L1，而ALDH1+亚群则高表达B7-H3，针对单一靶点的抑制剂难以同时清除这两个亚群。1当前面临的主要挑战1.2免疫检查点抑制剂的耐药性耐药是ICIs治疗的主要障碍，其机制包括：-CSCs内在耐药：CSCs通过高表达ABC转运蛋白（如P-gp）排出化疗药物和抗体药物，同时增强DNA修复能力，抵抗免疫细胞杀伤；-微环境介导的耐药：TME中TAMs、Tregs等免疫抑制性细胞的浸润，以及ECM和代谢产物的屏障作用，可减弱ICIs的疗效；-免疫编辑：长期免疫治疗压力可筛选出免疫原性更低的CSCs亚群，逃避免疫识别。1当前面临的主要挑战1.3生物标志物的缺乏目前尚缺乏预测CSCs免疫治疗效果的可靠生物标志物，如CSCs表面免疫检查点的表达水平、TME中免疫细胞浸润谱、代谢特征等，这导致临床治疗缺乏精准的个体化指导。例如，PD-L1表达水平虽可作为预测PD-1抑制剂疗效的标志物，但在CSCs中其表达与疗效的相关性较低，亟需开发针对CSCs特异性免疫应答的生物标志物。1当前面临的主要挑战1.4治疗毒性的增加联合治疗策略虽可提高疗效，但也可能增加免疫相关不良反应（irAEs）的发生风险，如免疫相关性肺炎、结肠炎等。例如，PD-1抑制剂与CTLA-4抑制剂联合使用时，irAEs发生率可达40%-60%，显著高于单药治疗（约10%-20%），这限制了其在临床中的广泛应用。2未来研究方向与展望2.1深入解析CSCs免疫检查点调控的分子网络随着单细胞测序、空间转录组等技术的发展，未来可系统解析CSCs-Niche中免疫检查点分子的表达谱、信号传导通路及细胞间相互作用网络，发现新的免疫检查点靶点（如LILRB1、TIGIT）和调控机制（如代谢调控表观遗传修饰），为开发新型治疗药物提供理论基础。2未来研究方向与展望2.2开发针对CSCs特异性异质性的治疗策略1基于CSCs的异质性，可开发“多靶点联合”或“动态个体化”治疗策略：2-多靶点联合：针对不同CSCs亚群的高表达免疫检查点分子（如PD-L1+B7-H3），开发双特异性抗体或联合用药，实现“广谱”清除CSCs；3-动态个体化