2026年生物技术实验操作习题集

2026年生物技术实验操作习题集一、选择题（每题2分，共20题）1.在进行PCR实验时，以下哪种引物设计原则是错误的？A.引物长度一般为18-25个碱基B.引物Tm值应在55-65℃之间C.引物内部不应存在二级结构（如发夹）D.引物3'端应尽量避免G或C碱基2.以下哪种缓冲液常用于蛋白质电泳？A.Tris-HCl缓冲液B.SDS缓冲液C.TBE缓冲液D.以上都是3.在进行基因克隆时，以下哪种载体不适合用于表达外源蛋白？A.质粒载体B.病毒载体C.噬菌体载体D.BAC载体4.以下哪种方法常用于检测核酸样品的纯度？A.紫外分光光度法B.凝胶电泳C.PCR扩增D.液相色谱法5.在进行细胞培养时，以下哪种措施有助于提高细胞活力？A.使用无菌操作技术B.控制培养基pH值C.定期更换培养基D.以上都是6.以下哪种酶常用于DNA测序？A.DNAPolymeraseB.LigaseC.RestrictionEnzymeD.ReverseTranscriptase7.在进行蛋白质纯化时，以下哪种方法属于离子交换色谱？A.凝胶过滤色谱B.亲和色谱C.离子交换色谱D.凝胶电泳8.以下哪种技术常用于基因编辑？A.CRISPR-Cas9B.PCRC.基因芯片D.基因测序9.在进行酶活性测定时，以下哪种因素会影响酶的Km值？A.酶浓度B.底物浓度C.温度D.pH值10.以下哪种方法常用于检测微生物耐药性？A.药敏试验B.基因测序C.PCR检测D.以上都是二、填空题（每空1分，共10空）1.PCR实验中，引物的退火温度通常根据______值进行选择。2.蛋白质电泳中，SDS利用______来使蛋白质带负电荷。3.基因克隆中，载体上的______序列用于连接外源基因。4.核酸样品的纯度检测通常使用______法。5.细胞培养中，无菌操作技术主要通过______和______来实现。6.DNA测序中，Sanger测序法利用______终止反应。7.蛋白质纯化中，亲和色谱利用______与目标蛋白结合。8.基因编辑中，CRISPR-Cas9系统利用______识别靶向序列。9.酶活性测定中，Vmax表示______。10.微生物耐药性检测中，药敏试验通常使用______培养基。三、简答题（每题5分，共5题）1.简述PCR实验的基本步骤。2.解释SDS的原理及其应用。3.描述基因克隆的流程及其关键步骤。4.说明如何检测核酸样品的纯度。5.阐述CRISPR-Cas9基因编辑技术的原理及其优势。四、实验设计题（每题10分，共2题）1.设计一个实验方案，用于检测某基因在特定组织中的表达水平。2.设计一个实验方案，用于纯化并鉴定一种未知蛋白质。答案与解析一、选择题1.D解析：引物3'端应尽量避免G或C碱基，因为它们可能导致非特异性结合。2.D解析：SDS缓冲液、TBE缓冲液和Tris-HCl缓冲液均常用于蛋白质电泳。3.D解析：BAC载体主要用于大型基因组克隆，不适合表达外源蛋白。4.A解析：紫外分光光度法常用于检测核酸样品的纯度。5.D解析：使用无菌操作技术、控制培养基pH值和定期更换培养基均有助于提高细胞活力。6.A解析：DNAPolymerase常用于DNA测序。7.C解析：离子交换色谱利用电荷相互作用进行蛋白质纯化。8.A解析：CRISPR-Cas9常用于基因编辑。9.B解析：Km值受底物浓度影响。10.D解析：药敏试验、基因测序和PCR检测均用于检测微生物耐药性。二、填空题1.Tm2.SDS3.多克隆位点4.紫外分光光度法5.无菌操作、灭菌6.荧光标记的ddNTPs7.亲和配体8.gRNA9.酶的最大反应速率10.MHA三、简答题1.PCR实验的基本步骤-提取模板DNA-设计引物-混合PCR反应体系（模板DNA、引物、dNTPs、Taq酶等）-热循环（变性、退火、延伸）-分析产物（凝胶电泳）2.SDS的原理及其应用-原理：SDS利用SDS使蛋白质带负电荷，并根据分子量大小分离蛋白质。-应用：用于蛋白质纯化、鉴定和表达分析。3.基因克隆的流程及其关键步骤-提取目的基因-设计引物并PCR扩增-连接目的基因到载体-转化宿主细胞-筛选阳性克隆4.如何检测核酸样品的纯度-使用紫外分光光度计检测A260/A280比值（纯度）和A260/A230比值（杂质）。5.CRISPR-Cas9基因编辑技术的原理及其优势-原理：利用gRNA识别靶向序列，Cas9酶进行切割。-优势：高效、精确、可编辑多基因。四、实验设计题1.检测某基因在特定组织中的表达水平-提取特定组织RNA-反转录为cDNA-设计基因特异性和内参基因引物-进行qPCR