PCR实验室知识及新冠检测生物安全培训考试(试题与答案)

PCR实验室知识及新冠检测生物安全培训考试(试题与答案)一、单项选择题（每题2分，共30分）1.PCR实验室核心工作区域不包括以下哪项？A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增分析区D.清洁消毒区答案：D解析：PCR实验室标准分区为试剂准备区、样本处理区（核酸提取区）、扩增区和扩增产物分析区（部分实验室合并扩增与分析区），清洁消毒区属于辅助区域，非核心工作区。2.新冠病毒核酸检测样本（咽拭子）采集时，采集人员应穿戴的防护装备不包括？A.N95/KN95口罩B.护目镜或面屏C.单层乳胶手套D.医用防护服答案：C解析：样本采集需三级防护，包括N95/KN95口罩、护目镜/面屏、医用防护服、双层手套（内层乳胶手套+外层丁腈手套），单层手套无法满足生物安全要求。3.以下关于PCR实验室压差控制的描述，正确的是？A.试剂准备区为正压，样本处理区为负压B.所有区域均保持常压C.扩增区为正压，样本处理区为负压D.各区域压差应≤5Pa答案：A解析：PCR实验室需通过压差防止交叉污染，通常试剂准备区（正压，+10-+15Pa）→样本处理区（常压或微负压）→扩增区（负压，-10--15Pa）→扩增产物分析区（负压），相邻区域压差应≥5Pa。4.新冠病毒核酸检测中，“假阳性”最常见的原因是？A.样本采集量不足B.扩增产物污染C.试剂灵敏度低D.样本保存温度过高答案：B解析：PCR扩增产物（大量目标DNA片段）是实验室最主要的污染源，若操作不当（如扩增管未密闭、区域间物品混用），易导致后续实验出现假阳性。5.生物安全柜使用时，正确的操作是？A.实验物品全部摆放在安全柜边缘B.操作时手臂快速进出安全柜C.安全柜内同时进行两种不同样本处理D.操作结束后，安全柜需运行15分钟后关闭答案：D解析：生物安全柜操作结束后，需继续运行15分钟以排出残留气溶胶；物品应摆放在安全柜中后部，避免遮挡回风口；手臂应缓慢进出，减少气流扰动；不同样本需分区操作，避免交叉污染。6.新冠病毒核酸检测样本（拭子）保存运输时，常用的保存液是？A.生理盐水B.病毒保存液（含胍盐）C.75%乙醇D.磷酸盐缓冲液（PBS）答案：B解析：病毒保存液（含胍盐）可灭活病毒、保护核酸不被降解，是新冠样本保存的标准选择；生理盐水无灭活作用，乙醇会破坏核酸结构，PBS无法有效稳定核酸。7.PCR实验室工作人员手部被样本污染后，应立即采取的措施是？A.用清水冲洗后继续操作B.脱去手套，用0.5%含氯消毒液擦拭，更换新手套C.用75%乙醇喷洒手套表面D.用肥皂洗手后涂抹护手霜答案：B解析：样本可能含病毒，污染后需立即脱去污染手套，用0.5%含氯消毒液（或75%乙醇）擦拭暴露皮肤，更换双层手套；仅冲洗或喷洒无法彻底灭活病毒。8.以下哪项不符合PCR实验室“单一流向”原则？A.人员从试剂准备区→样本处理区→扩增区B.物品通过传递窗从样本处理区→扩增区C.废弃物从扩增区→样本处理区→专用暂存点D.清洁工具分区专用，不得跨区使用答案：C解析：PCR实验室需严格遵循“单向气流、单向物品流向”，废弃物应从高污染区（扩增区）直接密封后送至专用暂存点，禁止逆向流动（如返回样本处理区）。9.新冠病毒核酸检测中，“内标”的主要作用是？A.验证扩增仪温度准确性B.监测样本采集是否合格C.排除假阴性（抑制物干扰）D.提高检测灵敏度答案：C解析：内标（人工合成的非目标基因片段）与样本核酸同时提取、扩增，若内标未扩增，提示样本中存在PCR抑制物（如血红蛋白、痰液成分），需重新处理样本，避免假阴性。10.生物安全二级实验室（BSL-2）的基本要求不包括？A.入口处设生物危害标识B.配备洗眼装置C.通风系统为直排式（非循环）D.所有操作均在生物安全柜中进行答案：D解析：BSL-2实验室中，可能产生气溶胶的操作（如样本涡旋、离心）需在生物安全柜中进行；常规加样、记录等低风险操作可在开放实验台完成，但需佩戴手套、口罩。11.PCR实验室“清洁区”与“污染区”的分界标识应设置在？A.各区域入口处地面B.实验室主入口墙面C.传递窗上方D.走廊与实验室连接处答案：A解析：为明确区域划分，避免人员误操作，各核心区域（如试剂准备区与样本处理区）入口处地面需用醒目标识（如黄线）标注“清洁区”“半污染区”“污染区”分界。12.新冠病毒核酸检测试剂（荧光PCR法）的“检出限”通常要求不高于？A.500拷贝/mLB.50拷贝/mLC.5拷贝/mLD.1拷贝/mL答案：B解析：根据《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南》，新冠核酸检测试剂的检出限应≤500拷贝/mL（部分高灵敏度试剂可达50拷贝/mL），以确保对低病毒载量样本的检测能力。13.以下哪种情况无需重新进行PCR实验室环境监测？A.实验室空调系统检修后B.更换实验人员C.发生样本泄漏事件后D.连续3次检测出现可疑污染答案：B解析：环境监测（如空气、表面微生物及核酸污染检测）需在实验室设施变更（如空调检修）、污染事件后或检测结果异常时进行；人员更换不直接影响环境状态，无需强制监测。14.样本处理区（核酸提取区）的关键操作规范是？A.同时处理100份以上样本以提高效率B.提取过程中频繁开启离心机盖C.每处理10份样本更换一次手套D.提取试剂与样本在同一区域预冷答案：C解析：样本处理时，每处理10-20份样本或手套污染时需更换手套，避免交叉污染；批量处理应分批次进行，离心机需密闭后再离心，提取试剂与样本需分区存放（试剂在清洁区预冷，样本在污染区处理）。15.新冠病毒核酸检测报告中，“Ct值”的含义是？A.扩增产物达到阈值的循环数B.样本中病毒的实际数量C.检测试剂的灵敏度指标D.扩增仪的温度准确性答案：A解析：Ct值（CycleThreshold）指荧光信号达到设定阈值时的扩增循环数，Ct值越小，样本中病毒载量越高；Ct值≥40通常判为阴性（需结合实验室标准）。二、多项选择题（每题3分，共15分，少选、错选均不得分）1.PCR实验室避免交叉污染的关键措施包括？A.各区域专用仪器（如离心机、移液器）B.严格遵循单向工作流程C.使用带滤芯的吸头D.每日实验后进行紫外线消毒答案：ABCD解析：专用仪器、单向流程、滤芯吸头（防止气溶胶回吸）、紫外线/化学消毒（灭活残留核酸）均为避免交叉污染的核心措施。2.新冠病毒核酸检测样本（咽拭子）采集时，需注意的事项有？A.采集前2小时避免进食、饮水B.拭子深入咽后壁擦拭3-5次C.采集后立即将拭子浸入保存液，折断柄部D.样本管外标注信息包括姓名、采样时间、编号答案：ABCD解析：所有选项均符合《新冠病毒核酸检测采样技术规范》要求，其中采集前2小时禁食可减少呕吐风险，拭子擦拭次数确保样本量，及时保存防止核酸降解，标注信息确保可追溯。3.生物安全柜的日常维护要求包括？A.每6个月进行一次风速与气流模式检测B.操作时避免遮挡前窗开口C.柜内物品按“清洁→污染”方向摆放D.长期不用时，每周开机运行30分钟答案：ABC解析：生物安全柜需定期检测（通常每6-12个月），操作时前窗开口高度需符合要求（如18-20cm），物品摆放应从清洁区到污染区（避免交叉）；长期不用时无需每周开机，使用前需检测即可。4.以下哪些情况可能导致PCR检测“假阴性”？A.样本采集部位不准确（如仅擦拭舌尖）B.核酸提取时离心速度不足C.扩增仪温度校准偏差（退火温度过高）D.检测试剂超过有效期答案：ABCD解析：采集部位错误（未接触病毒富集区域）、提取不充分（离心速度低导致核酸未分离）、扩增条件异常（温度偏差影响引物结合）、试剂失效（酶活性下降）均可能导致目标核酸未被检测到，出现假阴性。5.PCR实验室废弃物品的处理流程包括？A.实验废液先经化学消毒（如0.5%含氯消毒液作用30分钟）B.一次性手套、吸头放入双层黄色医疗垃圾袋C.污染的离心机转子用75%乙醇擦拭后送专用清洗区D.废弃扩增管需密封后高压蒸汽灭菌（121℃，30分钟）答案：ABD解析：污染的离心机转子属于耐高压设备，应先在污染区用0.5%含氯消毒液擦拭，再放入高压灭菌器（121℃，30分钟）处理，不可直接送清洗区；其他选项均符合《医疗废物管理条例》及PCR实验室规范。三、判断题（每题2分，共20分，正确填“√”，错误填“×”）1.PCR实验室各区域可共用同一台冰箱存放试剂和样本。（）答案：×解析：各区域需专用冰箱，避免试剂（清洁区）与样本（污染区）交叉污染。2.新冠病毒核酸检测中，阴性对照（无模板）出现扩增曲线，说明实验无污染。（）答案：×解析：阴性对照出现扩增，提示存在扩增产物或试剂污染，实验结果无效。3.生物安全柜内可以使用酒精灯，以加强无菌操作。（）答案：×解析：生物安全柜内使用酒精灯会破坏气流平衡，导致气溶胶扩散，禁止使用。4.样本处理区的空气压力应低于试剂准备区，防止污染扩散。（）答案：√解析：通过压差控制（试剂准备区正压，样本处理区常压或微负压），避免污染气流进入清洁区。5.新冠病毒核酸检测样本可在室温下保存超过48小时。（）答案：×解析：样本应在4℃保存（≤48小时），长期保存需-70℃，室温下核酸易降解。6.PCR实验中，移液器的量程调节可在0-最大量程范围内任意调整。（）答案：×解析：移液器不可超量程使用（如将200μL移液器调至250μL），会损坏内部结构，影响准确性。7.发生样本泄漏（如离心管破裂）时，应立即用纸巾擦拭并丢弃。（）答案：×解析：需先用吸水纸覆盖，喷洒0.5%含氯消毒液（作用30分钟），再用镊子夹取污染物品，放入医疗废物袋，最后对区域再次消毒。8.新冠病毒核酸检测报告中，“未检出”等同于“未感染”。（）答案：×解析：可能因采样时机（如潜伏期病毒载量低）、操作误差等导致假阴性，需结合临床症状和其他检测（如抗原、影像学）综合判断。9.PCR实验室工作人员进入污染区（扩增区）时，需更换专用工作服，不得穿入清洁区。（）答案：√解析：分区着装可避免交叉污染，污染区工作服需单独清洗或高压灭菌。10.生物安全培训只需新员工参加，在岗人员无需定期复训。（）答案：×解析：所有人员需每年至少参加1次生物安全复训，更新知识并熟悉最新规范。四、简答题（每题5分，共20分）1.简述PCR实验室“四区两缓”的布局要求及作用。答案：“四区”指试剂准备区、样本处理区、扩增区、扩增产物分析区；“两缓”指各核心区域之间的缓冲间（如试剂准备区与样本处理区之间的缓冲间）。布局要求：四区独立，单向连通（试剂准备区→样本处理区→扩增区→分析区），缓冲间可防止区域间气流直接串通。作用：通过物理分隔和压差控制，避免不同阶段的实验材料（如未扩增的试剂与扩增产物）交叉污染，确保检测结果准确性。2.新冠病毒核酸检测中，如何区分“实验室污染”与“真实阳性”？答案：（1）查看阴性质控：若阴性质控（无模板）出现扩增，提示实验室污染；（2）重复实验：对可疑样本用新试剂、新耗材重新检测，若结果一致为阳性，可能为真实阳性；（3）扩增曲线分析：污染样本的扩增曲线可能出现异常（如Ct值过低、曲线形态不规则），而真实阳性曲线符合标准（Ct值在检测范围内，指数期明显）；（4）环境监测：检测实验室空气、表面核酸残留，若阳性，确认存在污染。3.简述生物安全柜使用的“三不原则”及其原因。答案：（1）不遮挡回风口：生物安全柜的回风口位于柜内后下方，遮挡会破坏气流平衡，导致污染物外溢；（2）不快速移动手臂：快速移动会扰乱柜内气流，可能将污染气溶胶带出工作区；（3）不放置过多物品：物品过多会阻挡气流，降低防护效果，建议仅放置当前操作所需物品，且摆放于中后部。4.新冠病毒核酸检测样本转运时，需满足哪些生物安全要求？答案：（1）包装要求：样本需置于防渗漏的初级容器（如螺口管），放入含吸水材料的次级容器（如密封盒），再装入符合UN3373标准的运输箱（三层包装：主容器-次级容器-外包装）；（2）标识要求：运输箱外标注“生物危害”“高感染性物质”及联系人信息；（3）运输条件：2-8℃冷藏（≤48小时）或冷冻运输（长期），避免反复冻融；（4）人员要求：转运人员需培训合格，穿戴防护装备（手套、口罩），避免样本与人体直接接触。五、案例分析题（共15分）某PCR实验室在进行新冠核酸检测时，出现以下情况：（1）当天检测的50份样本中，10份结果为“Ct=38-40”（实验室判定阈值为Ct≤37）；（2）阴性质控（无模板）的Ct值为35；（3）实验员A在样本处理区操作时，将未用完的提取试剂带回试剂准备区继续使用。