（正式版）DB21∕T 2289.3-2016 《海洋微藻成分分析 第3部分：酸值的测定》

海洋微藻成分分析第3部分：酸值的测定AnalysisofcompositionsinmarinemicroalgaeThirdPart:Determinationofacidvalue2016-03-28发布2016-05-28实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/T2289.3—2016本标准是按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草DB21/T2289《海洋微藻成分分析》分为以下9个部分：—第1部分：中性脂的测定；——第2部分：极性脂的测定；——第3部分：酸值的测定；——第4部分：脂肪酸组成成分的测定；——第5部分：蛋白质的测定；——第6部分：总糖的测定；——第7部分：淀粉的测定；——第8部分：色素的测定；—第9部分：灰分的测定。本部分为DB21/T2289《海洋微藻成分分析》的第3部分。本部分由大连市质量技术监督局归口。本部分主要起草人：薛松、姚长洪、刘娇、姜君鹏、曹海洋微藻是海洋初级生产力的主要来源，其生长繁殖快，光合效率高，培养不占耕地，节约淡水然而，目前缺少相应的海洋微藻成分测定的标准方法，不同方法测定的各成分含量差别较大，使得不同实验室公布的数据可比性小，影响了海洋微藻天然产物代谢的研究，限制了海洋微藻生物质产业的海洋微藻中存在的脂酶使其在收获后水解脂类生成游离脂肪酸，导致微藻油脂酸值升高，影响海洋微藻生物质的品质，进而影响微藻生物质的下游炼制工艺。因此海洋微藻中酸值的大小是海洋微藻品质的重要指标之一。不同的微藻培养方式、微藻生物质的储藏条件和储藏时间等均对酸值造成影响。分析海洋微藻酸值有利于在微藻生物质的培养、收获和相关制品的制备过程中控制游离脂肪酸的1海洋微藻成分分析第3部分：酸值的测定本部分规定了用滴定法进行海洋微藻酸值测定的术语和定义本部分适用于海洋微藻油脂酸值的测定。….….下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T601-2002化学试剂标准滴定溶液的制备试样在氯仿-甲醇(v/v=2:1)溶液中经超声混合溶液溶解，加入饱和氯化钠溶液，以酚酞为指示剂，用氢氧化钾标准溶液滴定，由消耗的氢氧化25.11提取溶剂：体积比为2:1的氯仿(5.1)/甲醇(5.2)混合溶液，现配现用。5.12油脂溶解溶剂：体积比为2:1的乙醚(5.3)/乙醇(5.4)混合溶液，现配现用。5.130.01mol/L氢氧化钾标准溶液：称取0.14g氢氧化钾固体(5.6),用95%的乙醇(5.5)溶解定容至250mL,按GB/T601-2002中4.24部分的操作步骤进行标定，现配现用。5.1410mg/mL酚酞指示剂：称取0.5g酚酞固体(5.7),用95%的乙醇(5.5)溶解定容至50mL。5.15饱和氯化钠溶液：称取400g氯化钠(5.10)固体加入到1L水(5.9)中，搅拌至氯化钠固体6.1分析天平：感量0.0001g。6.3离心机：离心力不小于12000g。6.6烘箱：温度不小于100℃。7.1.1微藻油脂的提取称取0.5g～0.6g微藻藻粉(3.1),加入10mL提取溶剂(5.11),超声清洗仪(6.2)辅助萃取10min,于离心机(6.3)上4000r/min离心10min,收集上层溶液于离心管(6.4)中；重复以上提取操作3次，合并提取液，用氮气装置(6.5)吹扫，待溶剂挥发至小于0.5mL后转移至烘箱(6.6)中，60℃烘干16h。7.1.2微藻油脂的溶解称取7.1.1所述的微藻油脂样品10mg~15mg于磨口锥形瓶(6.7)中，加入40mL油脂溶解溶剂(5.12),盖上塞子，磁力搅拌器(6.8)搅拌溶解30min备用。每份油脂样品制备2瓶。7.2.1样品的预滴定3向7.1.2所述的微藻油脂溶液中加入30mL饱和氯化钠溶液(5.15)至分层，加入4滴～5滴酚酞指示剂(5.14),用3mL碱式滴定管(6.9)以不低于1mL/s的速度滴入氢氧化钾标准溶液(5.13)向7.1.2所述的微藻油脂溶液中加入30mL饱和氯化钠溶液(5.15)至分层，加入4滴～5滴酚酞指示剂(5.14),用3mL碱式滴定管(6.9)以不低于1mL/s的速度滴入80%滴定参考体积(V₁)的氧化钾标准溶液(5.13)总体积(V₂)。氧化钾标准溶液(5.13)总体积(V₀)。样品酸值按式(1)进行计算：56.1—氢氧化钾摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol);4(资料性附录)酸值(mg/g)相对标准偏差(%)新鲜微拟球藻(Nannochloropsissp.)存放两年的微拟球藻(Nannochloropsissp.)新鲜湛江等鞭金藻(Isochrysisz