树突状细胞在肿瘤治疗上的应用进展

树突状细胞在肿瘤治疗上的应用进展树突状细胞是专职抗原提呈细胞，在发动原发免疫应答中起关健作用。目前对DC的了解，尤其是在抗肿瘤免疫等方面的作用已经取得了显著进展。DC包括：朗罕氏细胞、间质树突细胞、并指状树突细胞、隐蔽细胞等，它们广泛分布于除脑以外的全身各个组织器官。一、树突状细胞功能    现在普遍认为DC是激发Ｂ和Ｔ淋巴细胞介导的免疫反应的重要的高效专职抗原提呈细胞。DC能活跃地摄取一系列不同的抗原物质，并进行加工和装载到MHCI和II类分子上。未成熟DC具有很强的内吞能力，这一特性随其成熟而丧失。其摄取抗原的机制有：第一，通过固有巨吞饮作用,•摄取大量液体，然后将大分子溶质加以浓集。第二，通过受体介导的内吞作用，如DC•表达FcγＲ和甘露糖受体，能分别有效地内吞IgＧ免疫复合物和甘露糖化抗原。吞噬作用，是树突状细胞摄取抗原的第三机制。最近的研究表明，体外培养的单核细胞来源的DC能吞噬凋亡小体,但不能摄取坏死物质。    树突状细胞摄取抗原之后，发生成熟，失去内吞能力。但成熟DC具有高效Ｔ细胞（包括纯真Ｔ细胞）刺激能力。其高效Ｔ细胞刺激能力与以下因素有关：特异性高水平表达C－C趋化因子DC-CK1，吸引纯真Ｔ细胞；低水平唾液酸,降低了排斥力，使得其易与Ｔ细胞簇集；大量的粘附分子，使得其易与TCR配接；高水平的共刺激分子，降低了活化阈值，使得激活Ｔ细胞变得更加容易。   二、DC抗肿瘤机制           在肿瘤的发生、发展过程中，机体免疫系统通过对肿瘤抗 原的识别激活免疫细胞，杀伤肿瘤细胞，从而起到抗肿瘤作用。 DC作为专职APC，因其具有极强的摄取、递呈抗原以及有效 诱导和维持免疫应答的能力，在抗肿瘤免疫中起到至关重要的 作用。DC可通过多种机制发挥其抗肿瘤免疫作用。(1)诱导细 胞免疫：DC摄取肿瘤抗原后，将其加工处理为肽一MHC分子复 合物表达于细胞表面，进而与T细胞表面的T细胞受体(T cel receptor，TCR)结合，同时与DC表面高表达的CD80、 CD86等共刺激分子协同作用，共同激活T细胞，启动CD8’。细 胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)介导的免疫应 答。(2)增强体液免疫：一方面，DC通过促进抗原特异性 CD4 辅助性T细胞(helper T cell，Th)的产生，促进抗体生成；另一方面，DC直接作用于B细胞，促进免疫球蛋白的分泌。PDC通过工型干扰素(interferon，IFN)的分泌，直接诱导初始和记忆B细胞分化为浆细胞，产生大量免疫球蛋白 IgM。(3)分泌多种细胞因子或趋化因子：DC分泌的IL-12 可诱导ThO细胞向Thl细胞分化，启动细胞性免疫应答，抑制 IL-12的产生则促进IL-10的分泌及Th2细胞极化。IL一15 以膜结合方式存在于DC表面，显著刺激次级淋巴器官中自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)的增殖。DC还可分泌一种特异性趋化因子Dc_CK1(dendritic cell—derived CC chemo— kine 1)，选择性趋化初始型T细胞，增强对免疫应答的诱导作用。(4)DC通过与某些肿瘤细胞相互接触，直接抑制肿瘤细胞的生长口]。(5)肿瘤抗原致敏的DC可释放一种具有抗原递呈能力的囊泡小体exosomes，该小体内含有大量MHC I、Ⅱ类分子和共刺激分子，能显著刺激抗原特异性CD8 T细胞增殖，并诱导抗原特异性CTL反应。三、DC介导的肿瘤免疫治疗目前，以DC肿瘤疫苗为基础诱导的特异性抗肿瘤免疫治疗已成为肿瘤生物治疗研究的热点，其基本原理是通过体外细胞因子联合培养扩增出DC，模拟DC的体内成熟过程，并使其接触相应抗原物质(人工合成肿瘤多肽、肿瘤细胞溶解物、肿瘤蛋白抗原、DNA或RNA等)或应用基因工程使肿瘤抗原基因通过载体导人DC，将这些致敏DC回输体内作为疫苗可诱导机体产生有效的抗肿瘤免疫应答。来越来越多的证据表明，这种过继性免疫治疗方式已日趋成熟，由DC激活的细胞免疫在抗肿瘤过程中起着主导作用，显示出了DC肿瘤疫苗在肿瘤的预防和治疗的巨大前景。（一）DC的体外扩增DC在外周血及组织中分布极少，难以直接获取。在体外定向分化DC的方法出现以后，将DC应用于肿瘤特异性免疫治疗的研究才得以快速发展。DC的体外扩增方法主要有两种：①来自骨髓CD34祖细胞。用GM—CSF和TNF一细胞因子定向诱导扩增骨髓或脐带血CD34祖细胞可获得分化成熟的DC。成人外周血最易获取，HD—CTX后恢复期的血清较小牛血清和普通AB型血清更利于Dc生成；②来自外周血CD14单核细胞。用GM—CSF和IL一4细胞因子诱导分化外周血CD14细胞，可获得不成熟Mo—DC，再加人不同的刺激物如TLR配体、TNF一或单核细胞条件培养液等可分化为同源的具有较高活性的成熟DC，体内和体外实验均可诱导出CTLs。此外，有研究者发现外周来源的单核细胞与LAK细胞共同培养，LAK细胞可促进DC细胞的成熟。但是，应用的DC多来自人体外周血单核细胞诱导、扩增，技术难度较大，这在一定程度上将会限制其大规模临床应用，因此现有DC扩增法还有待改进或发明新的高效DC制备方法。（二）DC疫苗DC能有效地呈递肿瘤抗原，使其能被T细胞识别从而激活机体的抗肿瘤免疫反应，目前用于肿瘤特异性主动免疫治疗的DC疫苗大致可分为两类，DC多肽疫苗和DC基因疫苗。DC多肽疫苗有以下几种：①肿瘤特异性表位肽刺激的DC。来源于确定原的MHCI类分子限制性的7—10个氨基酸肤段被最常用作DC疫苗，易于生产和标准化；②肿瘤细胞溶解物致敏DC。利用超声波破碎、反复冻融、诱导细胞凋亡的的方法制备肿瘤抗原；③肿瘤细胞与DC的融合。采用聚乙二醇法或电融法将DC与肿瘤细胞融合，这种融合细胞既能表达DC自身的表面免疫应答分子，同时又可获得肿瘤细胞的肿瘤抗原信息；④Exosomes小体负载DC。由抗原递呈细胞分泌的Exosome富含主MHCI、Ⅱ及其刺激分子，在肿瘤模型中可发挥有效的免疫刺激作用，已成为肿瘤免疫治疗的新热点。Exosomes可作为一种新型的亚细胞成分的DC疫苗，开辟一条无细胞体系诱导体内免疫功能的新途径。DC基因疫苗主要包括负载DNA的DC疫苗、负载蛋白质的DC疫苗、负载RNA的DC疫苗、导人编码肿瘤相关抗原的DC疫苗、及导入编码细胞因子基因的DC疫苗，通过提高其对抗原的摄取、加工、呈递能力，从而提高机体对肿瘤的抵抗能力。（三）DC治疗肿瘤的临床应用近年来，DC的临床研究及应用已相当广泛，Nestle等进行的第一个研究用一百万个负载了KLH和肿瘤抗原肤或肿瘤细胞裂解物的DC淋巴结注射，显示了较好的临床反应。Ni等采用自体肿瘤裂解液处理的Dc疫苗瘤内注射治疗10例淋巴瘤病人，有1例完全缓解、4例部分缓解。Kuglar等对17例晚期。肾癌病人用DC融合疫苗进行治疗，结果表明41％的患者获得疗效，其中有4例完全缓解。Heise等刮对13例前列腺患者进行PSA—mRNA转染致敏DC，13例患者体内PSA均有下降，无不良反应。近年来，DC疫苗作为肿瘤生物治疗的方案已获的美国FDA批准正式进入临床试验，DC疫苗的研究展现了极好的发展和临床应用前景四、总结总之，DC用于肿瘤免疫治疗，具有极大前景。亦可望用于儿童血液系统肿瘤及实体瘤的治疗。但还需要对DC的体外培养、肿瘤抗原及其装载和致敏DC回输途径及频次等方面的问题作更加深入的研究。参考文献[1]王家鑫.免疫学[M].北