（正式版）DB21∕T 3093-2018 《犬冠状病毒病诊断技术规范》

DB21Thetechnicalspecificationsfordiagnosistechnologyofcaninecoronavirusdisease辽宁省市场监督管理局发布I 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 3 4 4 4淼、张旭、章春燕、俞向前、张建平、马强、高静荐1犬冠状病毒病诊断技术规范本标准规定了犬冠状病毒病诊断的技术方法、步骤和结果判件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版本）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3.1犬冠状病毒Caninecoronavir属于冠状病毒科冠状病毒属，呈圆形或椭圆形，有囊膜，囊膜表面有纤突，病毒核酸为单股RNA病3.2犬冠状病毒病Caninecoronavirusd3.4CRTCapillaryfil疫学（CCV胶体金检测试纸）和分子生物学（RT-PCR病毒基4.1流行病学诊断24.1.1病犬和带毒犬是主要传染源，病犬和带毒犬粪便中含有大量CC4.1.3本病一年四季均可发生，但冬季多发；该病的发生和严重程度常与断乳、运输、气温骤变、饲4.2临床症状诊断4.2.5腹泻：呕吐的同时，出现腹泻，粪便由糊状、半糊状变至水样，其颜色由暗绿色或灰绿色逐渐两前肢触地，低头拱背而坐的姿势，后期，肛门括约肌松弛，排4.2.7血常规检查：白细胞计数大多正常或偏低，也有少数升高者，时有淋巴细胞增高或出现变异型4.2.8全身变化：发病后期，病犬眼球深陷，CRT时间延长，呼/create/edit/?eid=6034396&sid=6247400&secid=64.3病理学诊断4.3.2组织学变化：表现为小肠绒毛萎缩变短并融合，粘膜固有层细胞成份增多，隐窝加深，上皮细4.4应用现代免疫学（CCV胶体金检测试纸）诊断用棉签取适量新鲜粪便；将棉签浸入样品用一次性滴管取上清液作为检测液(样品若不能立即检测，应冷藏保存，超过24小时的，应冷冻保存，样品再次检测前需恢复至室温)。将未开封的试纸卡和检测样品恢复至室温；将试纸卡水平放置，用滴管向试纸卡孔缓慢逐滴加入4滴不含气泡的检测液。静止5分钟判断结果，10分钟后的结果仅作参考。无效：C线不显示红色色带，无论T线是否显示红色色带，该试纸均判为无效。保存)、氯仿(4℃预冷)、异丙醇(4℃预冷)、75%乙醇(用新开启的无水乙醇和DEPC水配制，—20℃酶抑制剂(40U/μL)、TaqDNA聚合酶(5U/μL)、dNTP(2.5mmol/L)、AMV反转录酶(5U/μL)、三4.5.2病料采集与处理：按照NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范执行。实质脏器类：肝脾等研磨至浆糊状，加5倍体积的灭菌生理盐水稀释，3000r/min,离心10肠内容物：粪样用0.01mol/LPBS做10倍稀释，12000r/min,离心5分钟，取上清液保存于44.5.4RNA的提取及cDNA的合成：:按照Trizol提取试剂说明书提取总RNA,按照反转录试剂盒说明4.5.6反应条件：95℃预变性5min,94℃变性30sec,55℃退火1min,72℃延伸30sec,32个循环；72℃延伸5min。反应结束后，经1%琼脂糖凝胶电泳检测，可观察到大