生物安全试题及标准答案

生物安全试题及标准答案1.单项选择题（每题2分，共20分）1.1在BSL-3实验室中，下列哪项操作必须在Ⅲ级生物安全柜内完成？A.稀释非致病性大肠杆菌B.打开含SARS-CoV-2冻干毒种的密封安瓿C.配制LB液体培养基D.紫外照射后的实验室台面清洁1.2对高致病性禽流感病毒（H5N1）进行鸡胚增殖时，实验室应至少具备：A.BSL-1设施＋普通通风橱B.BSL-2设施＋高效过滤器（HEPA）排风C.BSL-3设施＋定向气流＋双人门缓冲D.BSL-4设施＋正压防护服1.3关于“双重包装”运输UN2814感染性物质，下列描述正确的是：A.主容器与次级容器间可填充普通碎纸B.次级容器必须能承受≥95kPa内压差无渗漏C.外包装无需任何标记D.干冰可直接与次级容器接触1.4实验室获得性感染（LAI）暴发调查中，R₀值最适于评估：A.感染剂量B.实验室人员续发风险C.消毒效率D.基因突变率1.5采用β-丙内酯（BPL）灭活新冠病毒时，常用终浓度与温度为：A.0.1%,4°C,24hB.0.5%,37°C,2hC.1%,25°C,30minD.2%,56°C,10min1.6在生物安全风险评估矩阵中，后果等级“C-4”代表：A.可忽略B.轻度C.中度D.灾难性1.7对耐乙二醇分枝杆菌进行消毒，下列哪种试剂最有效？A.75%乙醇B.0.1%季铵盐C.2%碱性戊二醛D.0.05%次氯酸钠1.8实验室小鼠出现竖毛、弓背、震颤，最可能符合《实验动物微生物等级》中的：A.SPF级B.清洁级C.普通级D.无菌级1.9基因驱动（genedrive）技术用于蚊媒控制，其生物安全核心关切是：A.目的基因在靶种群中固定后不可撤回B.PCR引物二聚体C.质粒拷贝数低D.培养基pH漂移1.10在实验室信息管理系统（LIMS）中，实现样本全生命周期追踪的关键字段是：A.试剂批号B.冰箱温度C.全球唯一标识（GUID）D.操作员生日2.多项选择题（每题3分，共15分；每题至少有两个正确答案，多选少选均不得分）2.1下列哪些属于“合成生物学”生物安全监管范畴？A.人工合成最小基因组B.CRISPR-Cas9敲除β-球蛋白基因C.化学合成≥200kb天花病毒全长基因组D.将青蒿素合成途径转入酿酒酵母2.2实验室发生布鲁氏菌气溶胶暴露后，应立即：A.撤离并关闭实验室门B.对暴露人员采血做虎红平板试验C.开启实验室紫外灯30min后进入D.通知机构生物安全官并启动应急预案2.3关于生物安全柜（BSC）性能验证，下列说法正确的是：A.ⅡA2型需每年进行NSF/ANSI49标准气流模式检测B.可用碘化钾气雾法测试工作区洁净度C.高效过滤器泄漏测试采用DOP/PAO气溶胶D.验证报告保存期限≥5年2.4对含prion的脑组织进行废弃处理，正确的是：A.132°C预真空高压灭菌≥18minB.1mol/LNaOH浸泡1h后高压灭菌C.直接用普通垃圾袋封装送市政焚烧D.使用专用防刺容器标识“PrionWaste”2.5以下哪些操作可降低实验室交叉污染风险？A.分区使用移液器与吸头B.在BSC内先加样后加阴性对照C.定期用ATP生物荧光法监测台面清洁度D.采用带滤芯吸头进行RNA提取3.判断题（每题1分，共10分；正确写“T”，错误写“F”）3.1所有BSL-3实验室必须配备淋浴间。3.2运输UN3373仅需主容器+次级容器，无需外包装。3.3实验室自建CRISPR-Cas13a检测试剂无需伦理审批。3.4对含病毒尿液可用50%甘油4°C长期保存。3.5生物安全柜内可明火灭菌接种环。3.6实验动物逃逸应立即启动“捕捉-检测-报告”流程。3.7抗生素替代策略可减少耐药基因环境扩散。3.8实验室风险评估应每年动态更新。3.9灭活疫苗可完全排除重组获得毒力表型风险。3.10生物安全柜高效过滤器下游气流速度<0.36m/s即判定失效。4.填空题（每空2分，共20分）4.1依据WHO《实验室生物安全手册》第4版，BSL-2实验室门应__________，并可视情况安装__________。4.2对含SARS-CoV-2样本进行核酸提取时，常用__________作为裂解缓冲液主要成分，其终浓度通常为__________mol/L。4.3运输感染性物质时，主容器与次级容器之间应填充__________材料，以防止__________。4.4实验室常用__________作为指示菌，验证高压灭菌器是否达到121°C、15min灭菌效果。4.5基因工程微生物的“防止扩散”策略中，__________营养缺陷型与__________自杀基因组合被称为“双保险”。4.6依据《生物安全法》，高等级病原微生物实验活动应经__________批准，并在__________系统备案。4.7对含prion器械进行灭菌时，推荐先__________处理，再__________高压灭菌。5.简答题（每题10分，共30分）5.1简述实验室开展SARS-CoV-2病毒中和试验的生物安全关键控制点（至少列出5条）。5.2某BSL-3实验室计划引入CRISPR-Cas9系统构建流感病毒低致病性突变株，请写出其生物安全审查流程（从立项到实验结束）。5.3说明“双重包装”与“三层包装”在感染性物质运输中的区别，并给出UN2814与UN3373对温度记录的要求差异。6.计算与案例分析题（共25分）6.1某BSL-3实验室发生炭疽芽孢杆菌气溶胶泄漏，监测显示实验室空气中初始浓度为CFU/m³。采用2%过氧化氢蒸汽（HPV）消毒，灭活常数k=0.92（1）写出灭活动力学公式，并计算使浓度降至CFU/m³所需时间。（10分）（2）若实验室体积V=150

，HPV发生器最大喷雾速率Q6.2案例分析（10分）某高校课题组在普通BSL-2实验室进行H9N2禽流感病毒传代实验，未在生物安全柜内操作，导致3名学生感染。调查组发现：a)实验方案未报学校生物安全委员会审批；b)学生未接种当季流感疫苗；c)实验室未做负压控制；d)病毒滴度达TCID₅₀/mL。请结合《人间传染的病原微生物目录》与《实验室生物安全通用要求》，指出该事件违反的条款，并提出整改措施（至少5条）。7.设计题（共30分）7.1设计一个针对“耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）”的BSL-2升级实验方案，包括：（1）实验室物理改造简图（文字描述即可）；（2）个人防护装备（PPE）分级；（3）废弃物管理流程图（文字描述）；（4）应急预案要点（至少5条）。7.2基于“OneHealth”理念，设计一个监测高校周边养殖场耐药基因扩散的综合方案，需涵盖样本类型、检测技术、数据管理与风险沟通策略。标准答案与解析1.单项选择题1.1B解析：SARS-CoV-2为第二类病原，打开冻干毒种易产生气溶胶，需在Ⅲ级柜完成。1.2C解析：H5N1属第一类病原，需BSL-3＋定向气流＋缓冲。1.3B解析：UN2814次级容器须通过95kPa压力差测试。1.4B解析：R₀衡量续发传播能力。1.5A解析：0.1%BPL4°C24h为标准灭活方案。1.6D解析：C-4为灾难性。1.7C解析：分枝杆菌对2%碱性戊二醛敏感。1.8C解析：普通级允许携带特定病原体，出现症状提示感染。1.9A解析：基因驱动不可逆扩散为核心关切。1.10C解析：GUID保证样本全周期唯一追踪。2.多项选择题2.1ACD解析：CRISPR敲除非合成生物学监管重点。2.2ABD解析：紫外不能立即杀灭布鲁氏菌，延迟进入无意义。2.3ACD解析：碘化钾法用于BSC洁净度测试已淘汰。2.4ABD解析：Prion禁止直接市政焚烧。2.5ACD解析：BSC内先加阴性对照可防交叉污染。3.判断题3.1F解析：BSL-3非必须淋浴，视风险评估。3.2F解析：UN3373仍需外包装。3.3F解析：自建CRISPR试剂涉及基因操作需伦理审批。3.4T解析：50%甘油4°C可长期保存RNA病毒。3.5F解析：BSC内禁止明火，扰乱气流。3.6T3.7T3.8T3.9F解析：灭活疫苗仍可能重组，需评估。3.10T4.填空题4.1可自动关闭；可视窗或门禁4.2盐酸胍；4～64.3吸震；碰撞破损4.4嗜热脂肪芽孢杆菌（Geobacillusstearothermophilus）4.5胸腺嘧啶；mazF4.6国务院卫生健康主管部门；国家生物安全信息平台4.71mol/LNaOH浸泡1h；132°C30min5.简答题（答案要点）5.1关键控制点：（1）实验需在BSL-3＋Ⅲ级柜操作；（2）人员需接种新冠疫苗并测抗体；（3）使用带滤芯吸头与螺口管；（4）实验结束后表面用0.5%次氯酸钠消毒30min；（5）血清灭活56°C30min后方可移出；（6）设盲样阳性对照与阴性对照监测交叉污染；（7）实验废物双层袋封扎高压灭菌。5.2审查流程：立项申请→生物安全委员会预审→机构伦理委员会→国家卫健委高等级病原实验活动审批→基因工程生物安全评价→BSL-3设施现场验收→操作员培训与考核→SOP备案→实验过程实时监测→实验结束报告与样本销毁记录归档。5.3区别：双重包装=主容器+次级容器+外包装；三层包装=主容器+次级容器+第三层刚性外包装。UN2814需记录全程温度并附数据记录器；UN3373仅需外包装温度标记，无需连续记录。6.计算与案例分析题6.1（1）灭活动力学：==（2）稳态时间：C6.2违反条款：（1）未按《人间传染的病原微生物目录》将H9N2高滴度操作升级至BSL-3；（2）违反《实验室生物安全通用要求》GB19489-2008第6.2.2条，未在BSC内操作；（3）未执行《病原微生物实验室生物安全管理条例》第21条审批制度。整改：a)立即暂停实验，补办BSL-3审批；b)实验室改造负压+定向气流；c)全员接种流感疫苗并建立血清库；d)制定H9N2专项SOP与应急预案；e)安装实时气溶胶监测报警系统。7.设计题（参考示例）7.1（1）物理改造：实验室入口设指纹门禁+缓冲间；排风加装HEPA，换气≥12次/h；室内负压-30Pa；设传递窗紫外+过氧化氢传递舱。（2）PPE分级：基础—disposablegown+手套+外科口罩；升级—防水隔离衣+双层手套+N95+护目镜；最高—正压呼吸头罩+防水连体服+靴套。（3）废弃物：分区垃圾桶→双层袋→表面消毒→专用高压灭菌器→医疗废物