生物安全试题及(参考答案)

生物安全试题及(参考答案)1.单项选择题（每题2分，共20分）1.1在BSL-3实验室中，下列哪项操作必须在Ⅱ级生物安全柜内完成？A.离心含H5N1病毒培养物的离心管B.对含SARS-CoV-2的样本进行核酸提取C.将灭活后的埃博拉病毒样本转移至4℃冰箱D.用10%漂白液浸泡污染耗材【答案】B【解析】核酸提取属于“产生气溶胶的高风险步骤”，BSL-3条件下必须在Ⅱ级或Ⅲ级生物安全柜内完成；A项若使用带密封杯套的离心机可在柜外进行；C项病毒已灭活，风险降至BSL-2；D项为化学消毒，无需柜内操作。1.2某实验室拟开展CRISPR-Cas9基因驱动改造按蚊，依据《卡塔赫纳生物安全议定书》，首先应提交：A.环境影响评价（EIA）B.跨境越境转移通知（LMO-FFP）C.提前知情同意（AIA）D.封闭使用风险评估（CURA）【答案】C【解析】基因驱动属“可能对生物多样性造成重大不利影响”的改性活生物体（LMO），首次跨境释放前须执行AIA程序。1.3对高致病性禽流感病毒（HPAIV）样本进行干冰运输时，国际民航组织（ICAO）规定其包装必须符合：A.PI602B.PI620C.PI650D.PI954【答案】A【解析】A类感染性物质（UN2814）适用PI602；B类（UN3373）用PI650；干冰（UN1845）用PI954，但主危险仍是感染性物质。1.4某BSL-2实验室发生10mL含HBV血液溅洒，最佳消毒顺序为：A.吸水纸吸弃→0.5%次氯酸钠覆盖10min→75%乙醇脱氯B.0.5%次氯酸钠直接覆盖30min→吸水纸吸弃→清水擦拭C.1%过氧乙酸喷洒→立即紫外照射30min→清水擦拭D.75%乙醇喷洒→吸水纸吸弃→0.1%季铵盐擦拭【答案】B【解析】HBV对普通乙醇耐受，需高浓度有效氯；先覆盖可充分灭活，后脱氯避免腐蚀。1.5对含有非洲猪瘟病毒（ASFV）的猪肉样品进行长途运输，若采用冷冻状态，其包装系统必须含：A.三层包装+吸水材料+主容器防漏+外标UN2900B.两层包装+干冰+外标UN3373C.三层包装+UN2814+冷藏箱2–8℃D.一层泡沫箱+冰袋+外标“易腐”【答案】A【解析】ASFV整猪组织按A类感染性物质（UN2900）管理，需三层包装，主容器防漏，外容器抗压。1.6在实验室获得性感染（LAI）统计中，下列哪项占比最高？A.针刺伤B.气溶胶吸入C.黏膜飞溅D.动物抓咬伤【答案】B【解析】回顾性研究显示，约70%LAI与“不知觉”气溶胶暴露相关，远高于可见的针刺或飞溅。1.7某研究拟将合成“最小基因组”支原体引入小鼠肠道，依据美国NIH指南，该实验属于：A.豁免（RG1）B.风险组2（RG2）C.风险组3（RG3）D.需DEA审批【答案】B【解析】合成支原体虽基因组精简，但仍能在宿主繁殖，潜在致病性属RG2；NIH未将其列入RG3。1.8实验室常用β-丙内酯（BPL）灭活流感病毒，其机制主要是：A.烷化鸟嘌呤N7位B.交联病毒包膜神经氨酸酶C.断裂M1蛋白D.氧化脂质双层【答案】A【解析】BPL为烷化剂，主要与核酸鸟嘌呤N7位共价结合，阻断转录。1.9依据WHO《实验室生物安全手册》第4版，下列哪项不是生物安全柜（BSC）年度验证必测项目？A.下降气流速度B.高效过滤器完整性（DOP/PAO）C.噪声级D.紫外灯强度【答案】D【解析】紫外灯强度非强制验证项，仅建议每季度自检。1.10某实验室保存的炭疽芽孢悬液发现泄漏，现场快速检测应采用：A.胶体金抗原试纸条B.手持式拉曼光谱C.时间分辨荧光微球法D.噬菌斑裂解试验【答案】A【解析】炭疽芽孢表面含特异性多糖，胶体金试纸条可在5min内完成现场初筛。2.多项选择题（每题3分，共15分；每题至少两个正确答案，多选少选均不得分）2.1关于实验室生物危害标识，下列描述正确的是：A.生物危害符号须为紫红色或黑色，背景黄色B.门入口须贴“生物危害”警示，并注明风险组与负责人电话C.废弃物容器外只需中文标识，无需英文D.运输外箱必须同时显示UN编号与生物危害符号【答案】A、B、D【解析】C项错误，国际运输需中英文双语。2.2下列哪些操作可在开放台面完成（BSL-2条件）？A.对56℃30min灭活的SARS-CoV-2样本进行ELISAB.用酚-氯仿抽提法提取HBVDNAC.对紫外线照射2h的炭疽芽孢进行PCRD.对甲醛固定的大肠杆菌O157:H7进行革兰染色【答案】A、C、D【解析】B项酚-氯仿易产生气溶胶，需柜内操作。2.3关于基因驱动“抑制型”策略，下列说法正确的是：A.通过X染色体shredding减少雄性生育力B.属于自我限制型驱动C.可能因靶基因抗性突变而失效D.释放后可通过停止放虫实现种群恢复【答案】A、C【解析】抑制型驱动多为自我维持型；D项一旦建立，难以逆转。2.4实验室发生锐器伤后，应立即：A.挤压伤口至出血B.用75%乙醇或碘伏消毒C.报告主管并填写事故记录D.若源患者为HIV阳性，2h内启动PEP【答案】A、B、C、D【解析】四项均为标准流程。2.5下列哪些属于“双重用途研究关注”（DURC）范畴？A.通过连续传致增强H5N1对雪貂的呼吸道传播力B.构建可降解塑料的重组大肠杆菌C.使炭疽芽孢获得磺胺类耐药质粒D.利用CRISPR敲除水稻致病基因【答案】A、C【解析】B、D为明显有益研究；A、C可增强病原体毒力或耐药性。3.判断题（每题1分，共10分；正确打“√”，错误打“×”）3.1所有BSL-3实验室必须配备B2型生物安全柜。【答案】×【解析】B2型为全排，A2型也可满足，只要风险评估通过。3.2含寨卡病毒的临床血清若用GuSCN灭活，可降为BSL-2操作。【答案】√【解析】GuSCN可裂解病毒包膜，经验证灭活动力学≥4log10。3.3运输UN3373时，外箱无需标注“生物危害”符号。【答案】×【解析】仍需标注，但尺寸可缩小。3.4实验室饲养的NSG小鼠若携带人源肿瘤，其垫料可按普通医疗废物处理。【答案】×【解析】含人源移植物，需高压灭菌后按感染性废物处理。3.5对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）进行药敏试验，可在开放台面完成。【答案】√【解析】标准CLSI流程允许BSL-2开放台面，但需防扩散措施。3.6紫外线照射可完全替代化学法对BSC工作面消毒。【答案】×【解析】紫外线存在阴影效应，必须配合化学消毒。3.7经γ射线25kGy辐照的FBS，可视为无病毒风险。【答案】√【解析】25kGy为国际公认剂量，可灭活≥10^6PFU/mL病毒。3.8实验室自建LAMP检测新型冠状病毒，无需卫健委审批即可开展临床收费。【答案】×【解析】需通过技术审核与室间质评，取得注册证。3.9对含朊病毒（PrP^Sc）的组织进行121℃15min高压灭菌即可彻底灭活。【答案】×【解析】需132℃30min或1MNaOH+121℃30min。3.10生物安全柜运行中，玻璃观察窗开启高度超过标定值将触发声光报警。【答案】√【解析】BSC前窗高度超限会扰乱气流，现代设备均带报警。4.填空题（每空1分，共15分）4.1依据WHO《生物风险管理系统》（BRM），风险评估核心公式为：风险=（  ）×（  ）×（  ）【答案】危害程度；暴露概率；暴露后果4.2我国《人间传染的病原微生物名录》将H7N9禽流感病毒列为风险组____类，运输包装分类为____。【答案】二；UN33734.3若BSC下降气流速度为0.30m/s，前窗流入气流为0.55m/s，则其安全裕度系数SF=____（保留两位小数）。【答案】0.55/0.30=1.834.4对含Mycobacteriumtuberculosis的痰样本进行NaOH-NALC前处理，NaOH终浓度为____%，处理时间为____min。【答案】1；154.5实验室常用“斯氏芽孢”作为高压灭菌生物指示剂，其拉丁学名为____，灭菌合格标准为____。【答案】Geobacillusstearothermophilus；10^6CFU/片灭菌后全部灭活4.6依据OIE《陆生动物法典》，ASFV的“区域无疫”认定要求最后一例病例后至少____天，且完成____。【答案】40；流行病学调查与消毒4.7对含西尼罗病毒（WNV）的蚊子进行运输，其UN编号为____，包装指令为____。【答案】UN2814；PI6024.8若某病毒TCID50为10^7.5/mL，则其PFU/mL约为____（已知TCID50:PFU≈0.7）。【答案】10^7.5×0.7≈3.16×10^7PFU/mL5.简答题（每题8分，共24分）5.1简述实验室开展“功能获得”（GOF）研究需满足的“美国PPP框架”三项核心标准。【答案】（1）科学价值：研究需解决重大公共卫生或科学问题，具有不可替代性；（2）风险-收益比：潜在收益显著高于可能风险，且无更安全的替代方案；（3）风险缓解措施：实验设计、生物安全、监督、通信计划四方面需通过联邦审查，包括NIH、NSABB及机构生物安全委员会（IBC）三级审批。5.2某BSL-3实验室拟更换排风高效过滤器（HEPA），请写出完整更换流程的8个关键步骤。【答案】1.停机并切断电源，确认实验室无人；2.对旧过滤器上游及下游气溶胶喷洒2%戊二醛消毒30min；3.工作人员穿戴正压呼吸器与双层手套；4.拆除旧过滤器，立即装入双层生物危害袋，表面贴“污染HEPA”标签；5.用1%次氯酸钠擦拭过滤器框架及风道内壁；6.安装新过滤器，确保密封垫完整，螺栓对角紧固；7.进行DOP/PAO扫描检漏，穿透率≤0.01%；8.重新启动系统，连续运行30min后采样，确认房间负压及气流方向正常，填写更换记录。5.3说明“实验室自建新冠核酸检测”需满足的室间质评（EQA）五项规定指标。【答案】（1）检测限：≥95%检出1.0×10^3copies/mL；（2）精密度：Ct值CV≤5%；（3）特异性：与常见呼吸道病原体无交叉；（4）报告时限：从样本接收到结果≤6h；（5）年度室间质评：参加国家级≥2次，合格率≥80%。6.计算与综合题（共16分）6.1某BSL-3实验室进行H5N1病毒鸡胚培养，每枚鸡胚尿囊腔接种0.2mL含10^6.5EID50/mL病毒液，共100枚。若操作过程产生气溶胶，估算暴露风险。已知：气溶胶产生量：拔针瞬间约50μL形成气溶胶；病毒在气溶胶中存活率：70%；工作人员呼吸量：0.01m^3/min，暴露时间5min；实验室换气：12次/h，房间体积100m^3；病毒吸入感染剂量（MID50）：约0.9log10EID50。求：（1）气溶胶病毒总活性（EID50）；（2）房间平均气溶胶浓度（EID50/m^3）；（3）工作人员吸入病毒量（EID50）；（4）是否超过MID50？【答案】（1）50μL×10^6.5/mL×0.7=3.5×10^4EID50（2）房间换气12次/h=0.2次/min，5min内换气1次，近似稳态浓度：C=3.5×10^4/100=3.5×10^2EID50/m^3（3）吸入量=0.01m^3/min×5min×3.5×10^2=17.5EID50（4）17.5EID50≈1.24log10>0.9log10，超过MID50，存在感染风险。6.2某实验室拟将EGFP基因插入鼠痘病毒（ECTV）TK位点，构建重组病毒。请完成以下风险评估表（节选），并给出风险等级（高/中/低）。危害因子基因功能插入位点病毒毒力变化人群易感性风险等级ECTV-EGFP标记TK（减毒）降低极低低【解析】TK缺失显著降低毒力，ECTV对人罕见感染，EGFP无附加毒性，故综合风险为低。7.案例分析题（共10分）背景：某高校BSL-2实验室，研究生A在移液含耐多药结核菌（MDR-TB）培养液时，未戴护目镜，液体溅入右眼。A立即用洗眼器冲洗5min，并报告导师。机构生物安全委员会（IBC）启动调查，发现：1.实验方案未强制要求护目镜；2.洗眼器水压不足，冲洗流量仅0.8L/min（标准≥1.5L/min）；3.该菌株对利福平、异烟肼耐药，但对莫西沙星敏感。问题：（1）指出三处不符合规范之处；（2）给出后续医学处置与实验室整改措施各两条。【答案】（1）不符合：未按BSL-2要求佩戴护目镜；洗眼器流量低于国家标准（GB/T38144-2019）；风险评估未识别“黏膜飞溅”为高风险步骤。（2）医学处置：立即送定点医院眼科与感染科，启动MDR-TB暴露后预防（PEP），口服莫西沙