生物制药判断试题库(附参考答案)

生物制药判断试题库(附参考答案)一、单项选择题（每题1分，共30分）1.在CHO细胞中表达单克隆抗体时，最常用以增强mRNA稳定性的元件是A.SV40ori B.WPRE C.IRES D.MAR答案：B解析：WPRE（WoodchuckHepatitisVirusPosttranscriptionalRegulatoryElement）可显著延长mRNA半衰期，提高异源蛋白产量。2.下列哪种层析技术主要依赖目标蛋白与配体的生物特异性结合？A.离子交换 B.疏水作用 C.亲和层析 D.凝胶过滤答案：C解析：亲和层析利用抗原-抗体、酶-底物等特异性相互作用，选择性最高。3.用于测定细胞培养液中乳酸含量的常规酶学反应偶联体系中，第二步反应通常检测的吸光波长为A.260nm B.280nm C.340nm D.560nm答案：C解析：乳酸脱氢酶反应生成NADH，在340nm有特征吸收峰。4.在生物反应器放大过程中，保持下列哪一参数恒定最能减少剪切力对细胞的损伤？A.P/V B.kLa C.搅拌雷诺数 D.叶尖速度答案：D解析：叶尖速度（tipspeed）直接关联机械剪切，放大时常保持恒定。5.对蛋白A层析洗脱峰进行病毒灭活，最常用且有效的低pH条件是A.pH3.0，室温，30min B.pH5.0，4℃，2h C.pH7.0，37℃，1h D.pH8.0，室温，10min答案：A解析：pH3.0可快速破坏包膜病毒脂质包膜，30min为法规推荐最低时间。6.下列哪项不是单克隆抗体糖基化修饰对药效的影响？A.影响半衰期 B.改变ADCC活性 C.改变亲和力常数Ka D.影响免疫原性答案：C解析：糖基化主要影响Fc相关功能，对Fab段亲和力Ka影响极小。7.在DOE（实验设计）中，用于筛选大量潜在因子的常用设计是A.全因子 B.中心复合 C.Plackett-Burman D.Box-Behnken答案：C解析：Plackett-Burman设计以最少实验次数筛选主效应。8.关于连续生物制造，下列说法错误的是A.可缩短生产周期 B.需实时放行检测 C.必然降低产品一致性 D.可降低设备footprint答案：C解析：连续制造通过PAT（过程分析技术）反而提高一致性。9.在质粒DNA发酵中，提高拷贝数最常用的筛选压力是A.磷酸盐限制 B.氨苄青霉素 C.色氨酸饥饿 D.低温诱导答案：B解析：氨苄青霉素抑制细胞壁合成，只有含质粒菌可存活，拷贝数自然富集。10.用于测定蛋白浓度的Bradford法，其显色基团与蛋白哪类氨基酸残基作用最强？A.酸性 B.碱性 C.芳香族 D.含硫答案：C解析：考马斯亮蓝G-250与芳香族氨基酸（Trp、Tyr、Phe）形成稳定复合物。11.下列哪项不是病毒过滤的典型操作参数？A.通量Lm⁻²h⁻¹ B.ΔP跨膜压 C.剪切率γ̇ D.孔径20nm答案：C解析：病毒过滤为死端或切向流，剪切率非关键参数。12.在抗体人源化过程中，最保守的CDR移植策略是A.仅移植CDR1 B.移植全部CDR+部分框架 C.移植整个可变区 D.仅移植CDR3答案：B解析：需保留关键框架残基以维持构象，降低免疫原性。13.用于检测宿主细胞蛋白（HCHO）残留的免疫学方法中，抗体覆盖率验证常用A.ELISA B.2D-WB C.SPR D.qPCR答案：B解析：二维电泳-免疫印迹可直观评估抗体对HCP的覆盖度。14.在冻干制剂中，下列哪种保护剂主要起“玻璃化”作用？A.蔗糖 B.甘露醇 C.甘氨酸 D.聚山梨酯80答案：A解析：蔗糖在干燥相形成玻璃态，限制蛋白分子运动。15.关于高浓度抗体（>100mgmL⁻¹）黏度升高，下列解释最准确的是A.静电排斥增强 B.疏水补丁导致可逆自缔合 C.糖基化增加 D.氧化聚集答案：B解析：疏水相互作用形成瞬态网络，黏度随浓度指数上升，可用公式η=η₀e^{kC}描述。16.在生物制药纯化中，使用NaCl梯度洗脱的层析是A.离子交换 B.疏水作用 C.亲和 D.分子筛答案：A解析：盐浓度升高屏蔽电荷，实现离子交换洗脱。17.下列哪项不是生物类似药可比性研究的“Tier1”关键质量属性？A.一级序列 B.糖型分布 C.体外生物活性 D.临床终点答案：D解析：临床终点为Tier3，Tier1聚焦理化与体外功能。18.用于测定细胞活度的台盼蓝拒染法，其原理是A.膜完整性丧失 B.线粒体膜电位下降 C.染色体断裂 D.胞内酶释放答案：A解析：死细胞膜破损，染料进入细胞核。19.在单抗电荷异构体分析中，阳离子交换峰I（主峰前）通常对应A.脱酰胺 B.氧化 C.C端赖氨酸缺失 D.甘露糖-5糖型答案：C解析：C端赖氨酸缺失减少正电荷，提前洗脱。20.下列哪种病毒清除验证研究需使用缩小模型（scaled-downmodel）？A.低pH灭活 B.阴离子交换 C.病毒过滤 D.纳滤除菌答案：C解析：病毒过滤需保持通量、ΔP与表面积/体积比一致，法规强制缩小模型。21.在生物反应器控制中，PID控制器积分时间常数T_i减小会导致A.响应变慢 B.超调增大 C.稳态误差增大 D.高频噪声放大答案：B解析：积分作用增强，系统更快但易超调。22.下列哪项不是mRNA疫苗脂质纳米颗粒（LNP）的关键组分？A.可电离脂质 B.DSPC C.PEG-脂质 D.鱼精蛋白答案：D解析：鱼精蛋白用于早期DNA疫苗，非LNP必需。23.关于宿主细胞蛋白（HCP）ELISA定量，下列说法正确的是A.灵敏度可达1ppm B.无需方法验证 C.不受基质效应影响 D.可用单克隆抗体答案：A解析：经验证的多克隆ELISA可检测≤1ngmL⁻¹，相当于1ppm。24.在抗体片段（scFv）复性中，最常用氧化还原对是A.GSH/GSSG B.DTT C.TCEP D.β-ME答案：A解析：GSH/GSSG提供温和氧化环境，促进正确二硫键。25.用于测定细胞比生长速率μ的公式是A.μ=1/X·dX/dt B.μ=X/t C.μ=lnX/t D.μ=(X−X₀)/t答案：A解析：μ定义为比生长速率，单位h⁻¹。26.在生物制药厂房设计中，B级区静态粒子限度（≥0.5µm）为A.3520pcm⁻³ B.352000pcm⁻³ C.3520pcm⁻² D.29pcm⁻³答案：A解析：GMP附录1规定B级静态3520pcm⁻³。27.下列哪项不是蛋白聚集的主要诱因？A.反复冻融 B.金属离子催化 C.高糖基化 D.高剪切答案：C解析：高糖基化通常提高溶解度，减少聚集。28.在生物制药水系统，TOC（总有机碳）限度为A.500ppb B.50ppm C.5ppm D.0.5ppb答案：A解析：USP<643>规定注射用水TOC≤500ppb。29.用于检测单抗二硫键错配的肽图技术需加入A.胰蛋白酶+还原剂 B.胰蛋白酶+碘乙酰胺 C.胰蛋白酶无还原 D.胰蛋白酶+PNGase答案：C解析：非还原肽图可保留错配二硫键，质谱定位。30.关于连续下游纯化，下列说法正确的是A.必须采用单一层析柱 B.可用SMB提高树脂利用率 C.无法验证清除病毒 D.缓冲液消耗增加答案：B解析：模拟移动床（SMB）可提高树脂利用率>80%，降低ProteinA成本。二、配伍题（每空1分，共10分）A.离子交换 B.疏水作用 C.亲和 D.分子筛 E.反相31.按大小分离抗体与病毒颗粒 D32.在高盐条件下结合抗体 B33.在低pH下洗脱抗体 C34.在有机溶剂梯度下分离变体 E35.通过电荷差异去除HCP A三、判断题（每题1分，共20分，正确写“T”，错误写“F”）36.蛋白A层析洗脱峰立即中和至pH7.0可防止聚集。 T37.在CHO细胞中，谷氨酰胺浓度越高越利于生长，无上限。 F38.病毒过滤的LRV≥4表示病毒滴度降低≥10⁴倍。 T39.冻干保护剂甘露醇主要起膨胀剂作用，提高蛋糕外观。 T40.生物类似药可比性研究无需进行临床前动物实验。 F41.连续培养中，D>μ_max会导致洗菌。 T42.采用TCEP还原抗体不会破坏二硫键。 F43.在生物反应器中，CO₂可兼作pH控制与溶氧驱动。 T44.宿主DNA残留限度为10ng/剂量。 T45.高浓度制剂黏度与蛋白表面电荷分布无关。 F46.采用DSC可测定蛋白Tm，评估热稳定性。 T47.在层析放大中，保持床高不变即可保证分辨率。 F48.采用深层过滤可去除大部分HCP。 T49.mRNA加帽效率可用RT-qPCR测定。 T50.生物制药厂房A级区需单向流，风速0.36–0.54ms⁻¹。 T51.采用ProteinA层析后，宿主DNA清除通常≥5LRV。 T52.在细胞培养中，乳酸消耗期称“shift”现象，与代谢转换相关。 T53.采用SEC-MALS可测定抗体绝对分子量。 T54.生物制药纯化中，所有步骤必须在4℃进行。 F55.采用S/D法灭活病毒，Tween80浓度通常为1%。 T四、填空题（每空1分，共20分）56.在Fed-batch培养中，常用公式=计算________。答案：比葡萄糖消耗速率57.抗体亚可见颗粒（sub-visible）常用________技术计数，范围1–100µm。答案：光阻法（HIAC）58.根据Arrhenius方程，蛋白降解速率常数k与温度关系为________。答案：k59.在生物制药纯化中，病毒清除需遵循________原则，至少两步不同机制。答案：互补60.用于测定抗体FcγRIIIa结合活性的细胞系为________细胞。答案：NK9261.在层析放大中，保持________不变可维持线速度。答案：停留时间（或线性流速）62.生物制药常用内毒素检测方法为________法，灵敏度0.005EUmL⁻¹。答案：动态显色63.在mRNA合成中，加帽效率低于________%需优化。答案：9064.生物类似药糖型可比性接受标准为________倍标准差范围内。答案：365.用于测定蛋白表面疏水性的荧光探针为________。答案：ANS（1-苯胺基-8-萘磺酸）66.在细胞培养中，渗透压高于________mOsmkg⁻¹会抑制生长。答案：40067.抗体氧化位点主要为________族氨基酸。答案：甲硫氨酸、色氨酸68.在冻干过程中，塌陷温度Tc通常用________仪测定。答案：冻干显微镜69.生物制药厂房C级区动态粒子≥0.5µm限度为________pcm⁻³。答案：35200070.在病毒清除验证中，缩小模型需证明________相似性。答案：对数去除值（LRV）71.用于测定抗体等电点的常用技术为________。答案：cIEF（毛细管等电聚焦）72.在生物反应器中，k_La单位________。答案：h⁻¹73.抗体片段Fab分子量约为________kDa。答案：5074.在生物制药水系统，电导率@25℃限度为________µScm⁻¹。答案：1.375.用于去除内毒素的层析模式为________。答案：阴离子交换（Q）五、简答题（每题10分，共30分）76.简述高浓度抗体（>150mgmL⁻¹）制剂开发中降低黏度的三种策略，并给出原理。答案：(1)引入电荷突变：在Fc区引入负电突变（如K439E），增大静电排斥，减少可逆自缔合，黏度下降约40%。(2)添加小分子赋形剂：如精氨酸盐酸盐（100mM）通过屏蔽电荷及抑制疏水作用，降低黏度系数k。(3)控制pH远离pI：选择pH5.5–6.0，使蛋白带正电，利用静电排斥降低网络结构，黏度随|pH−pI|增大呈指数下降，符合η=η₀e^{−α|pH−pI|}。77.描述采用qPCR法测定CHO宿主DNA残留的完整实验流程，包括样品前处理、标准曲线、质控及结果计算。答案：(1)样品前处理：取0.5mL纯化后蛋白液，加0.5mL裂解缓冲液（含蛋白酶K0.2mgmL⁻¹），56℃1h，酚-氯仿抽提，乙醇沉淀，DNA溶于TE。(2)标准曲线：将CHO基因组DNA用TE10倍梯度稀释（10⁵–10¹copiesµL⁻¹），每个浓度三复孔，建立Ct-log₁₀(copy)曲线，斜率−3.32，R²>0.99。(3)qPCR体系：SYBRGreen10µL，引物（Alu序列）0.4µM，模板2µL，ROX参比，程序：95℃3min；95℃15s，60℃30s，40循环。(4)质控：加标回收率80–120%，空白无Ct，NTCCt>35，阳性对照1