实验动物的生物安全课件

实验动物的生物安全

引言实验动物：指经人工饲养、繁育，对其携带的微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产和检测鉴定以及其他科学实验的动物。如大白鼠、小白鼠、裸鼠、豚鼠、家兔、比格犬、恒河猴、小型猪、沙鼠等。实验用动物包括：实验动物，野生动物，经济动物。如牛、羊、猫、未实验动物化的土种狗等。KM小鼠C57小鼠裸鼠SD大鼠新西兰兔Hartely豚鼠引言我国实验动物以及环境设施规模和质量不断扩大和提升，实验动物进出口越来越频繁，新品系不断引进，使得我国实验动物资源日趋丰富。实验动物在生产、使用过程中，存在感染、繁殖病原体的可能以同时也存在向环境扩散病原微生物的危险，对人和环境都有可能造成生物安全危害。

1941年美国发生74例实验室相关的吸入性布氏杆菌感染事故1960’s中国相继发生三起布病实验室感染1976年英国某医学实验室的工作人员体检时发现结核菌感染者比其他人员高5倍2004年新加坡、中国台湾、中国CDCSARS实验室感染事故引言引言1999年北京某实验室曾发生实验人员感染流行性出血热事件。事件起因就是操作人员被携带病毒的实验动物抓咬伤而受感染引起的。引言2006年长春市某高校中药系实验室发生学生感染流行性出血热事件，76名学生中有10名学生受感染。整个事件起因也是由于实验操作过程中被动物抓咬伤而造成。引言东北农大28师生剖活羊染“怪病”2010年12月东北农业大学畜禽生产教育班30名学生进行“羊活体解剖学实验”后，28人感染布鲁氏菌病，症状为关节疼痛、全身乏力、流产等，严重者生活不能自理.引言

实验动物生物安全问题已引起国、内外高度重视。

2001年我国实施新版《实验动物国家标准》，其中规定：实验用大小鼠的等级提高到SPF级。取消普通级。

2004年《北京市实验动物管理条例》，修改和增加了实验动物生物安全方面内容，

2006年第二届北京实验动物科学国际论坛上，日本国立大学生物安全委员会委员长佐藤浩教授提出，生物安全已成为实验动物研究中不容忽视的重要因素。实验动物生物安全:是对实验动物可能产生的潜在风险或现实危害的防范和控制。由实验动物造成的各种风险和危害包括：

生产和使用实验动物中的各个环节，如实验动物的引种、保种、繁育、运输、进出口，使用实验动物(包括感染和非感染实验动物)进行动物实验、从事科研活动等过程中实验动物都有可能造成各种危害。

实验动物的生物安全危害的来源实验动物的生物安全危害的来源利用实验动物进行

动物实验过程造成的生物危害，已引起微生物学、生物医学等相关学科工作者的极大关注。动物性气溶胶、人兽共患病是形成动物实验生物危害的重要因素。在制定防护生物危害的生物安全措施上应包括实验室规程的制定、实验设备的设置(一次隔离)、实验设施的规划(二次隔离)、个人防护用品的准备(一次隔离)、感染动物的饲养和管理以及生物危害的评估等方面；动物性气溶胶（AnimalAerosol）的产生：动物在实验观察饲养期间，它们在呼吸、排泄、抓咬、挣扎、逃逸、跳跃时，在更换垫料、饲料，进行感染接种时，在尸体剖检、病理组织、排泄物的处理等过程中会大量产生传播危害性极大的动物性气溶胶。因此对气溶胶的生物安全防护，应当是动物实验室建设中的核心。实验动物特别是实验用动物(Experjmentalanimals)本身可能患有能感染人的人畜共患病（zoonoticDisease）。主要的人畜共患病如下实验动物的生物安全防护

实验动物的这两大危害有力说明：动物实验室无论在操作技术规范的制订，个人安全防护设备的设置，以及实验室设施的设计和建设上，都有很大的特点和特殊的要求。第一种危害要用实验室设施（二级隔离）来防范，通过静态隔离（负压梯度）动态隔离和排风处理（HEPA过滤）等措施，把产生的动物性气溶胶牢牢地控制在污染区内，确保不向外环境扩散。第二种危害，则要用安全防护设备（一级隔离）和其他个人防护设备（personnelprotectiveEquipmentPPES）来防止病原微生物对实验人员的感染。动物生物安全实验室设施的分级动物生物安全实验室和生物安全实验室一样，主要根据所研究病原微生物的危害评估结果和危害程度分类划分为一级、二级、三级和四级动物安全水平。一级动物生物安全（ABSL-1）实验室二级动物生物安全（ABSL-2）实验室三级动物生物安全（ABSL-3）实验室四级动物生物安全（ABSL-4）实验室一级动物生物安全实验室：适用范围：适用于检疫后的大多数种属动物（灵长类除外），以及专门接种了危害程度第四类的微生物如大、小鼠及金黄地鼠白血病病毒、小鼠乳腺瘤病毒等的动物的饲养和操作。设置要求：实验室与建筑物中的一般通道不须隔开,一般在实验台上操作。防护设备：一般不要求专用防护设备。二级动物生物安全实验室：适用范围：与动物实验一级生物安全水平相似，适用于那些对人及环境有中度潜在危险的微生物和动物实验工作。与一级的不同点：①人员经过操作病原性物质专门训练，并由能胜任的科学人员监督管理；②正在工作时限制外人进入实验室；③某些产生传染性气溶胶的工作在生物安全柜或其他物理封闭设备内进行。三级动物生物安全实验室：适用范围：适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死的致病微生物或者毒素。设置要求：用生物安全柜或其他个人防护用品，或物理阻隔装置。防护设备:一级防护：使用Ⅱ级或Ⅲ级生物安全柜，戴防毒面具，穿着背开衣或罩衣、长衣和连裤衣，重复使用必须消毒。二级防护：隔离，通过两道自动连锁门才能进入，内设更衣室，随时可淋浴。有脚动或肘动或自动开关的洗手池，设在实验室出口处。排出的空气至少有一道HAPE过滤，空气不准在建筑物的其他区域循环使用；制定系统的维修制度和消毒措施并严格执行。Ⅱ级或Ⅲ级生物安全柜1年必须检测鉴定1次，排放空气可在室外循环。眼睛清洗器随时可用。四级动物生物安全实验:适用范围：适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明、目前尚无有效疫苗或治疗方法的致病微生物或者病毒。设置要求：用生物安全柜或其他个人防护用品，或物理阻隔装置。防护设备：1、所有动物必须饲养在隔离器内。2、所有感染性材料的操作都必须在三级生物安全柜中进行。有生命维持系统的实验室，相关操作可在二级生物安全柜内进行。3、进入实验室时，工作人员必须脱下包括内衣裤的全部日常服装，并换上专用防护服。工作结束后，必须脱下防护服进行消毒，淋浴后再离去。4、设施必须安装带有HEPA过滤器的排风系统进行通风，以确保室内负压（向内气流）。5、通风系统必须能防止气体逆流及出现正压。6、必须配备双门高压灭菌器来传递物品，洁净端在防护室外的房间内。7、必须配备传递气锁舱以供不能高压灭菌的物品，其洁净端在防护室外的房间内。8、在进行感染危害程度第一类的病原微生物的动物的操作时，均必须在四级生物安全水平的最高防护实验室中进行。个体防护装备（PPE）实验动物生物安全的条件与保障国家、地方法律、法规合格的实验动物与和符合标准的设施生产和实验中严格进行标准化的操作废弃物的正确处理实验动物生物安全应急预案

实验动物生物安全的条件与保障

国家或地方实验动物主要法规、标准1、国家《实验动物管理条例》（1988）2、《实验动物质量管理办法》（修订版）（2001）3、《实验动物许可证管理办法（试行）》（国家：2001、广东省：2002）4、《实验动物种子中心管理办法》5、《省级实验动物质量检测机构技术审查准则》6、国家GB14925—2010(2011.10.01)国家和地方实验动物主要法规、标准7.《广东省实验动物管理条例》2010年6月2号通过；2010年10月1号执行第四章：生物安全与实验动物福利第二十二条实验动物发生传染性疾病时，从事实验动物生产、使用的单位和个人应当及时采取隔离、预防控制措施，防止动物疫情扩散，同时报告当地畜牧兽医主管部门、动物防疫监督机构；当发生人畜共患病时，还应当立即报告当地疾病预防控制机构。国家或地方实验动物主要法规、标准1《实验动物微生物等级及监测》2《实验动物寄生虫等级及监测》3《实验动物环境及设施》4《哺乳类实验动物的遗传质量控制》5《实验动物配合饲料通用质量标准》6《实验动物配合饲料卫生标准》国家或地方实验动物主要法规、标准实验动物生产许可证

实验动物使用许可证

国家或地方实验动物主要法规、标准实验动物分为四级：一级为普通级（cv）；二级为清洁级（cl）；三级为无特定病原体（SPF）级；四级为无菌级（包括悉生动物）。目前比格犬、恒河猴、小型猪等大动物多为普通级，大、小鼠均为清洁级以上，豚鼠、家兔等有普通级、清洁级、SPF级。国际上将实验动物分为三个级别；SPF级以上动物种群来源于剖腹产动物，微生物、寄生虫是按国标严格控制。实验动物设施分为三级：一是普通环境（洁净度8级、10万）；二为屏障环境（洁净度7级、万级）；三为隔离环境（洁净度5级、百级）。实验动物及其设施的等级隔离系统(Insulationsystem)

是以隔离器(Isolator)为主体及其附属装置组成的饲养系统。用作饲养无菌动物和已知菌动物。分正、负压隔离器。

屏障系统(Barriersystem)

这是清洁级、SPF级动物生产或实验的设施。人、实验动物、饲料、饮水、垫料、空气及其它物品均需进行严格的微生物控制。人流、物流及动物流要分开。开放系统(Opensystem)

只能进行普通级实验动物的生产与实验。实验动物及其设施的等级屏障环境

主要用于进行SPF级、清洁级的大鼠、小鼠等小动物实验（配备饲养室及操作室）。洁净走廊SPF动物实验室实验动物及其设施的等级

实验动物及其设施的等级

屏障环境动物实验设施设备

实验动物及其设施的等级

屏障环境动物实验设施设备实验动物及其动物实验的操作实验动物使用的生物安全：动物及饲养要求:1、引进动物进行实验必须具备实验动物质量合格证,隔离检疫一周，无异常时方进行实验。2、坚持卫生消毒制度：定期对动物房舍和饲养用具进行消毒（消毒方法及消毒剂交替使用）。3、饲养管理人员要定期做健康检查。实验操作要求：动物实验人员实验操作过程中做好防护，穿戴好工作衣、帽、口罩、手套;严格按标准操作规程进行。实验动物及其动物实验的操作实验动物及其动物实验的操作

屏障环境标准操作规程

SPF级动物实验室的管理责任SPF级动物实验室工作人员职责SPF级动物实验室工作人员职责SPF级动物实验室人员进出的标准操作规程SPF级动物实验室物品进出的标准操作规程SPF级动物实验室动物进出的标准操作规程使用SPF级动物实验室的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作

屏障环境标准操作规程

SPF级实验动物购买的标准操作规程SPF级实验动物接收和检疫的标准操作规程SPF级动物实验室实验动物饲料、饮水、垫料管理的标准操作规程SPF级实验动物抓取和保定的标准操作规程SPF级实验动物逃脱处理的标准操作规程SPF级实验动物死亡和伤病处理的标准操作规程高压蒸汽灭菌器使用与维护的标准操作规程传递窗使用与维护的标准操作规程渡槽使用与维护的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作不同品种、不同等级和互有干扰的动物实验，不得在同一实验间进行饲养，同一来源、相同品种、品系而用于不同实验目的动物实验饲养，也不得在同一实验间进行。不得将普通级动物带进屏障环境中进行实验，如将实验动物带离屏障环境进行实验，不得再带回屏障环境中进行饲养、实验。实验动物及其动物实验的操作在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态，抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。实验小鼠的抓取实验动物及其动物实验的操作实验兔的抓取与给药实验动物及其动物实验的操作豚鼠的抓取

实验动物及其动物实验的操作实验狗的抓取与固定实验动物及其动物实验的操作实验动物及其动物实验的操作

实验动物误伤的处理实验动物咬伤救治在伤口上方扎止血带，然后用消毒液冲洗伤口。如被实验犬咬伤，首先要把脏血挤出，否则容易引起感染。伤口若比较大或自己不好处理，最好去医院处理。同时24小时内到防疫站注射相关疫苗。标本处理：动物血液及组织标本立即按实验要求进行分离、冻存或固定等处理后存放。动物实验标本及废弃物的处理废弃物处理国务院《医疗废物管理条例》卫生部令《医疗卫生机构医疗废物管理办法》卫生部文件《医疗废物分类目录》病原体的培养基、标本和菌种、毒种保存液等高危险废物，在交医疗废物集中处置前应就地高压消毒。动物实验标本及废弃物的处理实验动物使用的各种废弃物可按《医疗废物分类目录》进行相应分类，并严格按照《医疗废物管理条例》的规定进行处理。根据实验动物使用的废弃物的特征可分为感染性废弃物：如被动物血液、体液污染的物品病理性废弃物：实验动物尸体等废弃物损伤性废弃物：废弃的锐器。药物性废弃物：变质或者被污染的废弃的药品化学性废弃物：具有毒性、腐蚀性、易燃易爆性的废弃的化学物品动物实验标本及废弃物的处理实验动物使用的废弃物收集●将实验动物使用废弃物分别置于动物废弃物专用包装袋或者容器内。●感染性废弃物、病理性废弃物、损伤性废弃物、药物性废弃物及化学性废弃物不能混合收集。●盛装实验动物使用废弃物的每个包装袋、容器外表面应当有警示标识，注明：单位、日期、类别等。●废弃物经包装、密封后存放于暂时贮存设施，不得露天存放；暂时贮存的时间不得超过２天，由爱卫办或防疫部门统一运输、处理。动物实验标本及废弃物的处理对实验动物废弃物暂时贮存设施、设备要求：●远离人员活动区和生活垃圾存放场所，方便实验动物使用废弃物运送人员及运送工具、车辆出入。●有严密的封闭措施，设专（兼）职人员管理，防止非工作人员接触动物废弃物。●有防渗漏、防雨水冲刷、防阳光直射、防蚊蝇、防蟑螂、防盗以及预防儿童接触等安全措施。●易于清洁和消毒。动物实验标本及废弃物的处理●如需暂时贮存病理性废弃物，则应当具备低温贮存或者防腐条件。●设有明显的动物废弃物警示和“禁止吸烟、饮食”标识。●病原体感染性动物实验的废弃物，需经过高压或消毒液初步处理后再分装收集，然后统一由爱卫办或防疫部门运输后进一步处理。1、人畜共患病毒性疾病：流行性出血热、淋巴性脉络丛脑膜炎病毒感染、口蹄疫、埃博拉病毒感染、灵长类痘病毒病、麻疹、鸡新城疫、A型肝炎、猴免疫缺陷综合征、狂犬病、流感、节肢动物携带性病毒感染。

2、人畜共患立克次氏体病：Q热

附：重要的人畜共患病附：重要的人畜共患病3、人畜共患细菌性疾病：

布氏杆菌病、李斯特菌、猴结核病、鸚鹉热、鼠咬热、鼠疫、钩端螺旋体病、沙门氏菌病、志贺氏菌病、肠炎耶森氏菌病。4、人畜共患病原虫性疾病：弓形虫病、包虫病、梨形虫病、隐孢子虫病、阿米巴原虫病、大肠纤毛虫病。

1、病原体：汉坦病毒。传染源——带病毒黑线姬鼠和褐家鼠，实验大鼠也偶尔传播。

2、传播途径——带病毒的血、尿污染人皮肤破损处，也使人患病。污染尘埃飞扬形成气溶胶吸入感染。（一）流行性出血热（肾综合征出血热HFRS）3、易感者——人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔。4、症状——潜伏期14天；动物无明显症状；人感染后出现高热、出血、休克、肾功能受损和循环衰竭，严重者死亡。（一）流行性出血热（肾综合征出血热HFRS）（二）淋巴细胞性脉络丛脑膜炎1、病原体：淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒。传染源——带病毒野小鼠或实验小鼠为传染源。2、传播途径——带病毒小鼠的分泌物、排泄物污染，吸血昆虫传播，胎盘垂直传播。（二）淋巴细胞性脉络丛脑膜炎3、易感者——人，小鼠、猴、豚鼠、大鼠、地鼠、兔、狗、鸡等。4、症状——人感染后表现类似流感样症状，有三种表现：大脑型、内脏型、迟发型。（三）口蹄疫1、病原体：口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease，FMDV)。是引起患病动物的口、蹄部出现水疱性病症为特征的传染性疾病。传染源—患病的偶蹄动物。2、传播途径——接触传播（三）口蹄疫3、易感者——偶蹄类动物、人4、症状——发烧，呕吐，口腔组织发生红色溃疡腐烂(表面腐蚀性水疱)，偶有皮肤小水疱。值得注意的是，该症状与另外一种病毒疾病“手足口病”的症状类似。手足口病与口蹄疫的区别病原不同：口蹄疫——口蹄疫病毒

手足口病——数种肠道病毒，如EV71病毒传染源：口蹄疫——染病动物

手足口病——患者和肠道病毒携带者传播途径：口蹄疫——接触病畜溃烂斑，偶有经口途径

手足口病——接触病人、经口、呼吸道易感人群：口蹄疫——发病人群广泛

手足口病——多为3