2026届新高考生物三轮热点复习：微生物的基本培养技术

2026届新高考生物三轮热点复习微生物的培养技术与应用非细胞类原核类真核类病毒：新冠病毒等RNA病毒；

噬菌体等DNA病毒微生物细菌：乳酸菌、大肠杆菌等；放线菌：链霉菌等；支原体、衣原体等单细胞真菌：酵母菌、霉菌等；原生生物：草履虫、衣藻等【注意】本章提及的微生物主要指用于发酵所用的细菌和真菌。1、概念：微生物是难以用肉眼观察的微小生物的统称，包括细菌、真菌和病毒等。2、分类：微生物概述3、研究和应用微生物的前提（发酵工程的重要基础）是：__________________、______________________________。4、实验室培养微生物基本要求：防止杂菌污染获得纯净的微生物培养物①提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件②确保其他微生物无法混入③并将需要的微生物分离出来培养基无菌技术纯化培养微生物概述考点010203微生物的基本培养技术微生物的选择培养与计数探究•实践土壤中分解尿素的细菌的分离和计数人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出其生长繁殖的营养基质。①培养、分离、鉴定、保存微生物。②积累其代谢物。①按照物理性质分类：液体培养基、固体培养基、半固体培养基液体培养基不含凝固剂，呈液体状态。+琼脂琼脂在98℃以上熔化，在44℃以下凝固。琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。含凝固剂，呈固态。扩大培养、工业生产微生物的分离与鉴定，活菌计数，保存菌种，实验室最常用的培养基。半固体培养基观察微生物的运动、分类鉴定。1、概念：2、用途：3、类型：固体培养基（一）培养基的配制

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！3、类型：②按照化学成分分类：合成培养基：天然培养基：含有化学成分还不清楚或化学成分不明确的天然有机物。用已知的化学物质配制表1牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌)的营养组成组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000ml水表2查氏培养基（培养霉菌）的营养组成蔗糖（C12H22O11）10g硝酸钠（NaNO3）3g磷酸氢二钾（K2HPO4）1g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5g氯化钾（KCl）0.5g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）0.01g琼脂15～20gH2O定容至1000mL（一）培养基的配制

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！3、类型：选择培养基：基础培养基：③按照用途分类：鉴别培养基：含一般微生物生长繁殖所需要的基本营养物质。在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长，将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。加入能与目的菌的代谢产物发生显色反应的指示剂。用于鉴别不同类型的微生物。耐高浓度食盐的金黄色葡萄球菌伊红-美蓝培养基能与大肠杆菌代谢物反应，出现带金属光泽的深紫色菌落（一）培养基的配制

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！一、微生物的基本培养技术2.培养基具体处理原理目的选择培养基鉴别培养基

分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养微生物鉴别分解尿素的细菌鉴别纤维素分解菌加入青霉素不加氮源不加有机碳源加入酚红培养基加入刚果红青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用固氮微生物能利用空气中的氮气自养型微生物能利用无机碳源尿素被分解产生氨，培养基呈碱性，酚红指示剂变红。刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以菌落为中心的透明圈。加入伊红-亚甲蓝琼脂培养基鉴别大肠杆菌菌落呈现深紫色拓展：选择培养基与鉴别培养基实例及其作用4、培养基的营养构成：成分来源功能碳源（提供碳元素的物质）无机碳源：①构成细胞物质和一些代谢产物；②有机碳既是碳源又是能源有机碳源：氮源（提供氮元素的物质）无机氮源：将无机氮合成含氮的代谢产物有机氮源：合成蛋白质、核酸和含氮的代谢废物水①良好的溶剂，参与化学反应；②维持生物大分子结构的稳定无机盐①提供无机营养；②调节培养基的pH；③维持渗透压CO2、CO32-、HCO3-等糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、牛肉膏和蛋白胨等NH4＋、NO3-、N2、NH3等牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等外界摄入(培养基提供、代谢产物)无机化合物，培养基常用：K2HPO4MgSO4NaClCa(NO3)2FeSO4自养微生物异养微生物水、碳源、氮源和无机盐（1）基本成分：（一）培养基的配制

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸盐和维生素等蛋白胨

10g碳源、氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000mL水实例：1000mL牛肉膏蛋白胨培养基（应用最广泛普通的细菌基础培养基）的营养构成Q1.按物理性质划分，上述实例属于？思考•讨论液体培养基。未加琼脂（凝固剂）。Q2.培养任何微生物，是否必须有有机碳源和有机氮源？否。培养自养型微生物可利用无机碳源（如空气中的CO2）；

培养固氮微生物可利用无机氮源（如空气中的N2）。（一）培养基的配制

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！微生物碳源氮源能源蓝细菌硝化细菌根瘤菌大肠杆菌（空气中）CO2NH4＋、NO3-等光能NH3NH3氧化的化学能糖类等有机物（空气中）N2有机物中的化学能糖类、蛋白质等有机物蛋白质、NH4＋、NO3-等有机物中的化学能光能自养化能自养异养、固氮菌异养拓展：几种代表性微生物的营养和能量来源归纳（空气中）CO2（一）培养基的配制

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！（2）特殊需求：培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。主要指生长因子：维生素、氨基酸、

嘌呤、嘧啶等例如：①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_______；

②培养霉菌时，需要将培养基调至_____；

③培养细菌时，需要将培养基调至

；

④培养厌氧微生物时，需要提供_____的条件。维生素酸性中性或弱碱性无氧真菌pH为5.0–6.0细菌pH为6.5–7.5放线菌pH为7.5–8.54、培养基的营养构成：（一）培养基的配制

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！1.(2025·辽宁阜新模拟)如表是

培养某种微生物的培养基配方,以下说法正确的是(

)成分含量NH4NO30.5gKH2PO43.0gCaCl20.5gFeSO40.5g维生素少许蒸馏水定容至1000mLA.该培养基中含有碳源、氮源、水和无机盐四类物质B.该培养基可以用来培养硝化细菌,不能用来培养酵母菌C.该培养基在培养硝化细菌时,需要密封D.要用该培养基培养酵母菌,需要加入葡萄糖作为氮源B1、目的：（1）防止培养物被杂菌污染；（2）防止感染实验操作者。2、内容：（二）无菌技术

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。（1）对操作的空间、操作者的衣着和手，

进行清洁和消毒；（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。（二）无菌技术

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！（1）消毒：使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。方法适用范围操作方法煮沸消毒法巴氏消毒法化学药物消毒法紫外线消毒法某些实验器具、家庭餐具等在100℃下煮沸5~6min不耐高温的液体，如牛奶等63~65℃下煮30min或72~76℃处理15s或80~90℃处理10~15s用于皮肤、伤口、动植物组织表面等用70%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源、5%次氯酸钠消毒植物组织等接种室、接种箱，超净工作台等可用紫外灯照射30min2、内容：生物消毒法：利用生物或其代谢物除去环境中部分微生物的方法。（二）无菌技术

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！（2）灭菌：用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，

包括芽孢和孢子。2、内容：知识拓展芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个

椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜(如温度、水分适宜)的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖

作用的无性生殖细胞。能直接长成新个体。（二）无菌技术

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！（2）灭菌：用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，

包括芽孢和孢子。2、内容：灭菌方法操作方式灭菌条件适用对象湿热灭菌利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽杀灭微生物，以高压蒸汽灭菌效果最佳压力100kPa、温度121℃，维持15～30min耐高温、耐潮湿的物品，如培养基、非金属材质的实验器材等干热灭菌将物品放入密闭干热灭菌箱，利用热空气杀灭微生物温度160～170℃，维持2～3h耐高温、需保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）、金属用具灼烧灭菌利用酒精灯火焰的充分燃烧层的高温杀灭微生物酒精灯火焰充分燃烧层直接灼烧微生物接种工具（涂布器、接种环、接种针等）；接种过程中试管口、瓶口等易污染部位（二）无菌技术

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！（2）灭菌：用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，

包括芽孢和孢子。2、内容：对于一些不耐高温的成分，可以采用过滤灭菌的方法进行灭菌。利用滤膜的微孔截留微生物，仅允许液体或气体通过，达到无菌效果。【拓展补充】纯培养物培养物纯培养在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体。获得纯培养物的过程。由单一个体繁殖所获得的微生物群体。配制培养基灭菌倒平板接种和分离培养制备培养基相关概念：步骤（三）微生物的纯培养

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！1、实验原理分散或稀释繁殖单个细胞微生物群单个菌落①分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、

有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。（一个菌落就是一个种群）鉴别菌种：菌落的大小、形状、颜色、透明度、光泽度等是鉴定菌种的重要依据。（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！②采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，

之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。稀释涂布平板法平板划线法2、实验目的①

学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板②

学会进行无菌操作③

尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落①酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖(或蔗糖)、琼脂、蒸馏水②天平，小刀，纱布，烧杯，锥形瓶，棉塞、牛皮纸（或报纸）③皮筋，培养皿，接种环，酒精灯，超净工作台④高压蒸汽灭菌锅，干热灭菌箱和恒温培养箱等3、材料用具（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！4、实验步骤（1）制备培养基称取去皮的马铃薯200g切成小块加水1000mL，加热煮沸至马铃薯软烂。用纱布过滤滤液中加入20g葡萄糖，15~20g琼脂。用蒸馏水定容至1000mL得到滤液①配制培养基（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！②灭菌【注意】若需要调节pH，应在蒸馏水定容之后、灭菌之前进行操作。4、实验步骤（1）制备培养基（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！③

倒平板：培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。1拔出锥形瓶的棉塞。2将瓶口迅速通过火焰。3用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基倒入培养皿（10～20mL），立即盖上皿盖。4等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。温度过高容易烫伤，温度过低琼脂会凝固。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。不能完全打开，以免杂菌污染培养基。1.防止皿盖上冷凝水滴入培养基，造成污染。2.防止培养基水分过快蒸发。4、实验步骤（1）制备培养基（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！Q2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？①配制培养基→②灭菌→③倒平板Q1.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？思考•讨论将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。4、实验步骤（1）制备培养基（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！连续划线稀释分散繁殖单个细胞微生物群单个菌落指在无菌条件下将微生物或含菌材料转移到合适其生长繁殖的培养基中的过程。通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。（平板划线法）经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。接种方法：平板划线法、稀释涂布平板法、穿刺接种法、斜面接种法接种分离连续划线法分区划线法12345接种环4、实验步骤（2）接种和分离酵母菌（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！平板划线法①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红。⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞。②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞。

③试管口通过火焰。

④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。

⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。4、实验步骤（2）接种和分离酵母菌（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！——平板划线法Q1.接种分离过程中接种环蘸取几次菌液？思考•讨论接种环只蘸一次菌液。划线末端细菌的数目比起始处少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，以将聚集的菌种逐步稀释，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最后一次的划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次的划线相连则增加了细菌的数目，达不到纯化的目的。Q2.除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，目的是什么？Q3.为什么最后一次的划线与第一次的划线不能相连？123454、实验步骤（2）接种和分离酵母菌（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，最终得到单菌落。杀死接种环上原有微生物，避免污染培养物思考•讨论Q4.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？Q5.图中共划5个区域，共需要灼烧接种环多少次？6次。——平板划线法4、实验步骤（2）接种和分离酵母菌（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！（3）培养酵母菌：

完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。作用：检验培养基灭菌是否合格；检验培养过程是否有杂菌污染。原因：防止皿盖上冷凝水滴落，造成污染。4、实验步骤（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！5、结果分析与评价思考•讨论Q1.如果在未接种的培养基表面有菌落生长，说明什么？Q2.如果在接种酵母菌的培养基上观察到了不同形态的菌落，可能是哪些原因引起的？说明培养基灭菌不合格

或

在培养过程中被污染。可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起。Q3.你是如何记录实验结果的？可以在培养12h和24h后，观察菌落的大小、形状、颜色。培养24h后，菌落的大小、形状是否发生变化，菌落颜色是否加深，光泽度是否增加等。（三）微生物的纯培养（以酵母菌的纯培养为例）

考点一：微生物的基本培养技术一轮复习，夯实基础！考点010203微生物的基本培养技术微生物的选择培养与计数探究•实践土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

考点二：微生物的选择培养和计数一轮复习，夯实基础！（一）微生物的选择培养1、选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，

同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。选择培养基四种常见制备方法或实例加入某些特定的物质原理举例改变培养基的营养成分培养基缺乏氮源时培养基缺乏有机碳源时利用培养基“特定化学成分”分离当石油为唯一碳源时当尿素是唯一氮源时当以纤维素为唯一碳源时通过某些“特殊环境分离”在无氧环境中在高温环境中依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以“抑制”不需要的微生物的生长，“促进”所需要的微生物的生长（前提是培养基具备全部营养成分）加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌；加高浓度食盐的培养基分离得到金黄色葡萄球菌可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物而生存不能利用石油的微生物不能生存，能够利用石油的微生物能生存，从而分离出能降解石油的微生物不能利用尿素的微生物因缺乏氮源而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素作为氮源而正常生长能分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖可分离得到厌氧型微生物、兼性厌氧型微生物，需氧型微生物在无氧环境中无法生存可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温中因酶失活而无法生存【资料】尿素含氮量高，化学性质稳定，是一种重要的农业氮肥，尿素施入土壤后，被某些细菌分解成NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。NH3再转化成NO3-、NH4+等才能被植物吸收。

土壤中尿素分解菌之所以能将尿素分解，是因为它们能合成脲酶。Q1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？思考•讨论设计一种选择培养基，以尿素作为唯一氮源。

考点二：微生物的选择培养和计数一轮复习，夯实基础！（一）微生物的选择培养Q2.怎么证明该选择培养基具有选择性呢？应该设置完全/基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）作为对照。若完全培养基中生长的菌落数多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。Q3.尿素高温条件下会水解，该培养基如何灭菌？先按照配方配置无尿素的培养基，并灭菌，待冷却到60℃左右，加入经过过滤灭菌的尿素溶液，缓慢摇匀。稀释涂布平板法：分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物计数：测定分解尿素的细菌的数量仅通过选择培养基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌吗？能利用平板划线法，进行微生物的培养计数吗？不能。平板划线法最开始的划线区域，细菌可能会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分细菌。平板划线法稀释涂布平板法

将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。菌液梯度稀释涂布平板繁殖单个细胞微生物群单个菌落可计数。【注意】取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌。③取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，

依次等比稀释。（1）梯度稀释1mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1031×1041×1051×1061×1079mL无菌水1×10210g①铲取土样，将样品装入纸袋中②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。90mL无菌水1×10

考点二：微生物的选择培养和计数一轮复习，夯实基础！（一）微生物的选择培养2、稀释涂布平板法（2）涂布平板③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。移液枪⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。

考点二：微生物的选择培养和计数一轮复习，夯实基础！（一）微生物的选择培养2、稀释涂布平板法⑦待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。在涂布有____________菌液的平板上就可以观察到分离的_________。（3）菌落培养与观察稀释104倍稀释105倍稀释106倍恒温培养箱合适浓度单菌落检验培养基灭菌是否合格；检验培养过程是否有杂菌污染。空白对照

考点二：微生物的选择培养和计数一轮复习，夯实基础！（一）微生物的选择培养2、稀释涂布平板法主要方法稀释涂布平板法平板划线法主要步骤接种工具菌体获取能否用于计数共同点系列梯度稀释操作和涂布平板操作接种环在固体培养基表面连续划线涂布器接种环从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体可以计数不能计数平板划线法

VS

稀释涂布平板法都要用到固体培养基；都会在培养基表面形成单个菌落；都可用于观察菌落特征；都需进行无菌操作。（1）计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测除样品中大约含有多少活菌。一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后取其平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。

统计结果一般用

而不用活菌数来表示。菌落数恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。原因：因为当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落。（4）计算公式：每g样品中的菌落数＝(C÷V)×MC：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：代表稀释倍数。

考点二：微生物的选择培养和计数一轮复习，夯实基础！（二）微生物的数量测定1、稀释涂布平板法（间接计数法）（2）计数原则：（3）缺点：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。2、优点：3、缺点：血细胞计数板——细菌计数板——较厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。较薄，对细菌等较小的细胞进行观察和计数。细菌计数板血细胞计数板快速、直观；能观察微生物的形态特征。不能区分死菌和活菌→结果偏大。如何操作可避免上述缺点？能被染色的为死菌可用台盼蓝染色后再进行显微镜计数。（1）计数原理：

考点二：微生物的选择培养和计数一轮复习，夯实基础！（二）微生物的数量测定2、显微镜直接计数1个计数室有

个小方格。1个计数室的体积为

mm3=

ml方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供计数用。中方格小方格大方格边长为1mm，深度为0.1mm0.14001×10-4每个小方格平均酵母菌数×40010-4×稀释倍数每毫升原培养液所含菌数=血细胞计数板内容显微镜直接计数法（直接计数法）稀释涂布平板法(间接计数法）计数依据细菌个数培养基上菌落数计算公式每克样品中的细菌数=(C÷V)×MC：某稀释度下平板上生长的平均菌落数;V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);M：稀释倍数缺点不能区分死菌与活菌当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落结果比实际值偏大比实际值偏小每个小方格平均酵母菌数×40010-4×稀释倍数每毫升原液细胞数=显微镜直接计数法

VS

稀释涂布平板法4.(2025·湖北咸宁模拟)尿素容易保存,是目前使用量较大的一种化学氮肥,尿素分子并不能直接被农作物吸收,只有被尿素分解菌分解成氨之后才能被植物利用。如图是从土壤中分离、计数尿素分解菌的过程,下列有关分析正确的是()A.若②过程稀释了10倍,则乙锥形瓶里盛有9mL无菌水B.③的接种方法可以用平板划线法或稀释涂布平板法C.a、b、c培养基可以用牛肉膏蛋白胨培养基D.若①②过程分别稀释了10倍,a、b、c培养基上的菌落数依次为57、58、56个,则10g土样中的尿素分解菌数量约为5.7×109个D考点010203微生物的基本培养技术微生物的选择培养与计数探究•实践土壤中分解尿素的细菌的分离和计数1、提出问题：（1）土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？（2）每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？2、实验原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。培养基配方KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000mlCO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。

考点三：探究•实践

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一轮复习，夯实基础！土壤取样制培养基样品稀释涂布平板观察培养菌落计数3、实验步骤：①土壤要求：酸碱度接近中性且潮湿。（细菌适宜在该环境中生长）②取样部位：铲去表层土（一般3cm左右），距地表约3～8cm的土壤层。

（细菌绝大部分分布在距地表3～8cm的土壤层。）③注意事项：取土样时用的铁铲和取样袋使用前都需要灭菌。

操作完成后，一定要洗手。

考点三：探究•实践

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一轮复习，夯实基础！土壤取样制培养基样品稀释涂布平板观察培养菌落计数①制备选择培养基（尿素为唯一氮源）②制备牛肉膏蛋白胨培养基培养基配方KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml①提供无机盐；②调节pH。作用：作为对照，验证选择培养基是否具有选择性。3、实验步骤：

考点三：探究•实践

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一轮复习，夯实基础！土壤取样制培养基样品稀释涂布平板观察培养菌落计数1mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1031×1041×1051×1061×1079mL无菌水1×10210g90mL无菌水1×10不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。测细菌数：一般用104、105、106稀释液测放线菌：一般用103、104、105稀释液测真菌数：一般用102、103、104稀释液3、实验步骤：

考点三：探究•实践

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一轮复习，夯实基础！土壤取样制培养基样品稀释涂布平板观察培养菌落计数选择培养基牛肉膏蛋白胨培养基②整个实验还要设置2个空白对照平板：

，以验证培养基灭菌是否合格或培养过程中是否有杂菌污染。未接种的选择培养基

和

未接种的牛肉膏蛋白胨①每个浓度至少设置4个平板：

1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个，平行重复）；

4为牛肉膏蛋白胨培养基（作为对照，用以判断选择

培养基是否具有选择作用）3、实验步骤：

考点三：探究•实践

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一轮复习，夯实基础！土壤取样制培养基样品稀释涂布平板观察培养菌落计数①培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。

细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。②观察：③记录结果：一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的

菌落特征，如形状、大小和颜色等。每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。→防止因培养时间不足而导致菌落数目遗漏。3、实验步骤：

考点三：探究•实践

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一轮复习，夯实基础！土壤取样制培养基样品稀释涂布平板观察培养菌落计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。稀释度104105106123平均值123平均值123平均值每个平板的菌落数3、实验步骤：

考点三：探究•实践

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一轮复习，夯实基础！4、结果分析与评价未接种以尿素为唯一氮源的选择培养基牛肉膏蛋白胨培养基1×1041×1051×106未接种的培养基上无菌落的生长，说明：；培养基灭菌合格且培养过程中没有被杂菌污染牛肉膏蛋白胨培养基中的菌落数明显多于选择培养基中的菌落数，说明：该选择培养基有选择作用Q1.结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。思考•讨论

考点三：探究•实践

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一轮复习，夯实基础！Q2.你是否获得了某一稀释度下菌落数为30～300的平板?在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近?思考•讨论Q3.你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少?与其他同学统计的结果接近吗?如果差异很大，可能是什么原因引起的?如果得到了两个或多个菌落数为30～300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。如果用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。4、结果分析与评价

考点三：探究•实践

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一轮复习，夯实基础！5、进一步探究以尿素为唯一氮源的选择培养基上得到的菌落