微生物实验常用的36种培养基的配制说明

微生物实睑常用的36种培养基的配制说明

目录

1.牛肉膏蛋白陈培养基（用于细菌培养）............................................2

2.高氏1号培养基（用于放线菌培养）..............................................2

3.马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌）..................................2

4.马铃薯培养基（PDA）（用于霉菌或酵母菌培养）....................................2

5.察氏培养基（蔗糖硝酸讷培养基）（用于霉菌培养）.................................2

6.Hayflik培养基（用于支原体培养）................................................2

7.麦氏（McClary）培养基（醋酸钠培养基）...........................................3

8.葡萄糖蛋白陈水培养基（用于V.P.反应和甲基红试验）.............................3

9.蛋白陈水培养基（用于引咻试验）................................................3

10.糖发酵培养基（用于组菌糖发酵试验）...........................................3

11.RCM培养基（强化梭茵培养基）、（用于厌氧菌培养）..............................3

12.TYA培养基（用于厌氧菌培养）.................................................4

13.玉米醪培养基（用于厌氧菌培养）...............................................4

14.中性红培养基（用于厌氧菌培养）...............................................4

15.CaCO3明胶麦芽汁培养基（用于厌氧菌培养）.....................................4

16.BCG牛乳培养基（用于乳酸发酵）...............................................4

17.乳酸菌培养基（用于乳酸发酵）.................................................4

18.酒精发酵培养基（用于酒精发酵〕...............................................5

19.柯索夫培养基（用于钩端螺旋体培养）...........................................5

20.豆芽汁培养基................................................................5

21.LB（Luria—Bertani）培养基（细菌培养，常在分子生物学中应用）...................5

22.复红亚硫酸钠培养基（远藤氏培养基）...........................................5

23.乳糖蛋白陈半固体培养基（用于水体中大肠菌群测定）............................6

24.乳糖蛋白陈培养液（用于多管发酵法检测水体中大肠菌群）........................6

25.三倍浓乳糖蛋白陈培养液（用于水体中大肠菌群测定）............................6

26.伊红美蓝培养基（EMB培养基）（用于水体中大肠菌群测定和细菌转导）.............6

27.加倍肉汤培养基（用于细菌转导）...............................................7

28.半固体素琼脂（用于细菌转导）.................................................8

29.豆饼斜面培养基（用于产蛋白酶毒.菌菌株筛选）..................................8

30.酪素培养基（用于蛋白酶菌株筛选）.............................................8

31.细菌基本培养基（用于筛选营养缺陷型）.........................................8

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32.YEPD培养基（用于酵母原生质体融合）..........................................10

33.YEPD高渗培养基（用于酵母原生质体融合）.....................................10

34.YNB基本培养基（用于酵母原生质体融合）......................................11

35.YNB高渗基本培养基（用于原生质体融合）.......................................11

36.酚红半固体柱状培养基（用于检查氧与菌生长的关系）............................11

1.牛肉膏蛋白月东培养基（用于细菌培养）

牛肉膏3g,蛋白陈10g,NaCl5g,水1000mL,pH=7.4〜7.6。

2.高氏1号培养基（用于放线菌培养）

可溶性淀粉20g,KNO3lg,NaCl0.5g,K2HPO4*3H2O0.5g,MgS04*7H20

0.5g,FeS04<H200.01g,水1000mL,pH=7.4〜7.6。配制时注意：可溶性淀

粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。

3.马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌）

K2HP04lg,MgS04*7H200.5g,蛋白膝5g,葡萄糖10g,1/3000孟加拉

红水溶液100mL,水900mL,自然pH=，121℃湿热灭菌30min。待培养基融

化后冷却55〜60c时加入链霉素（链霉素含量为30pg/mL）o

4.马铃薯培养基（PDA）（用于霉菌或酵母菌培养）

马铃薯（去皮）200g，蔗糖（或葡萄糖）20g，水1000mL,配制方法如下：

将马铃署去皮，切成约2cm2的小块，放入1500mL的烧杯中煮沸

30min,注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖，再

补足至1000mL,自然pH二，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。

5.察氏培养基（蔗糖硝酸钠培养基）（用于霉菌培养］

蔗糖30g,NaNO32g,K2HP04lg,MgS04-7H200.5g,KC10.5g,

FeS04*7H200.1g,水1000mL,pH=7.0〜7.2。

6.Hayflik培养基（用于支原体培养）

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牛心消化液（或浸出液）1000mL,蛋白月东10g,NaCl5g,琼脂15g,

pH=7.8〜8.0,分装每瓶70mL,121c湿热灭菌15min,待冷却至80℃左右，

每70mL中加入马血清20mL,25%鲜酵母浸出液10mL,15醋酸铭水溶液

2.5mL,青霉素G钾盐水溶液（20万单位以上）0.5mL,以上混合后倾注平板。

注1：注意：醋酸鸵是极毒的药品，需特别注意安全操作。

7.麦氏（McClary）培养基（醋酸钠培养基）

葡萄糖0.1g,KC10.18g,酵母膏0.25g,醋酸钠0.82g,琼脂1.5g,蒸储水

lOOmLo溶解后分装试管,115℃湿热灭菌15mino

8.葡萄糖蛋白月东水培养基（用于V.P,反应和甲基红试验）

蛋白陈0.5g,葡萄糖白5g,K2HP040.2g,水100mL,pH=7.2,115℃湿热

灭菌20mino

9.蛋白月东水培养基（用于口引味试验］

蛋白陈10g,NaCl5g,水1000mL,pH=7.2〜7.4,121c湿热灭菌

20mino

10.糖发酵培养基（用于细菌糖发酵试验）

蛋白豚0.2g,NaCl0.5g,K2HP040.02g,水100mL,溪麝香草酚蓝（1%水

溶液）0.3mL,糖类1g。分别称取蛋白陈和NaCl溶于热水中，调pH=至7.4,再

加入滨麝香草酚蓝（先用少量95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液），加入

糖类，分装试管，装量4〜5cm高，并倒放入一杜氏小管（管口向下，管内充满

培养液）。115℃湿热灭菌20min。灭菌时注意适当延长煮沸时间，尽量把冷空

气排尽以使杜氏小管内不残存气泡。常用的糖类，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、

麦芽糖、乳糖、半乳糖等（后两种糖的用量常加大为1.5%）。

11.RCM培养基（强化梭菌培养基］、（用于厌氧菌培养）

酵母膏3g,牛肉膏10g,蛋白陈10g,可溶性淀粉1g,葡萄糖5g,半胱氨

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酸盐酸盐05g,NaCl3g,NaAc3g,水1000mL,pH=8.5,刃天青3mg/L,

121℃湿热灭菌30mino

12.TYA培养基（用于厌氧菌培养］

葡萄糖40g,牛肉膏2g,酵母膏2g,胰蛋白豚（bacto-typetone）6g,醋酸

镀3g,KH2P040.5g,MgSO4«7H2O0.2g,FeSO4-7H2O0.01g,水1000mL,

pH=6.5,121c湿热灭菌30min。

13.玉米醪培养基（用于厌氧菌培养）

玉米粉65g,自来水1000mL,混匀，煮lOmin成糊状，自然pH=,

121℃湿热灭菌30mino

14.中性红培养基（用于厌氧菌培养）

葡萄糖40g,胰蛋白豚6g,酵母膏2g,牛肉膏2g,醋酸镂3g,

KH2P045g,中性红0.2g,MgS04*7H200.2g,FeS04*7H200.01g,水

1000mL,pH=6.2,121℃湿热灭菌30min。

15.CaC03明胶麦芽汁培养基（用于厌氧菌培养）

麦芽汁（6波美）1000mL,水1000mL,CaC0310g,明胶10g,pH=6.8,

121C湿热灭菌30mino

16.BCG牛乳培养基（用于乳酸发酵）

（A）溶液：脱脂乳粉100g,水500mL,加入1.6%澳甲酚绿（B.CG）乙醇溶

液1mL,80，C灭菌20min。

（B）溶液：酵母膏10g,水500mL,琼脂20g,pH=6.8,121℃湿热灭菌

20min。以无菌操作趁热将（A）、（B）溶液混合均匀后倒平板。

17.乳酸菌培养基（用于乳酸发酵）

牛肉膏5g,酵母膏5g,蛋白陈10g,葡萄糖10g,乳糖5g,NaC15g,水

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1000mL,pH=6.8,121℃湿热灭菌20min。

18.酒精发酵培养基（用于酒精发酵）

蔗糖10g,MgSO4*7H2O0.5g,NH4N030.5g,20%豆芽汁2mL,

KH2P040.5g,水100mL,自然pH二。

19.柯索夫培养基（用于钩端螺旋体培养］

优质蛋白膝0.4g,NaCl0.7g,KC10.02g,NaHC030.01g,CaCl0.02g,

KH2Po40.09g,NaH2P040.48g,蒸储水500mL,无菌兔血清40mL。

制法：除兔血清外的其余各成分混合，加热溶解，调pH二至7.2,121c湿

热灭菌20min,待冷去1后，加入无菌兔血清，制成8%血清溶液，然后分装试

管［5〜10mL/管），56℃水浴灭活lh后备用。

20.豆芽汁培养基

黄豆芽500g,加水1000mL,煮沸lh,过滤后补足水分，121℃湿热灭菌

后存放备用，此即为50%的豆芽汁；

用于细菌培养：10%豆芽汁200mL,葡萄精（或蔗糖）50g,水800mL,

pH=7.2〜7.4。

用于霉菌或酵母菌培养：10%豆芽汁200mL,糖50g,水800mL,自然

pH=0霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。

21.LB（Luria-Bertani）培养基（细菌培养，常在分子生物学

中应用）

双蒸储水950mL，胰蛋白陈10g,NaCl10g,酵母提取物（bacto-yeast

extract）5g,用lmol/LNaOH（约1mL）调节pH二值至7.0,加双蒸储水至总体积

为1L,121℃湿热灭菌30min。

含氨节青霉素LB培养基：待LB培养基灭菌后冷至50℃左右加入抗生

素，至终浓度为80〜100mg/L。

22.复红亚硫酸钠培养基（远藤氏培养基］

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蛋白豚10g,牛肉浸膏5g,酵母浸膏5g,琼脂20g,乳糖10g,

K2HP040.5g,无水亚硫酸钠5g,5%碱性复红乙醇溶液20mL,蒸播水

lOOOmLo

制作过程：先将蛋白月东、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到900mL水

中，加热溶解，再加入K2P。4，溶解后补充水至1000mL,调pH二至

7.2〜7.4。随后加入乳糖，混匀溶解后，于115℃湿热灭菌20min。再称取亚硫

酸钠至一无菌空试管中，用少许无菌水使其溶解，在水浴中煮沸lOmin后，立

即滴加于20mL的5%碱性复红乙醇溶液中，直至深红色转变为淡粉红色为

止。

将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持融化状态的培养基中，混匀

后立即倒平板，待凝固后存放冰箱备用，若颜色由淡红变为深红，则不能再

用。

23.乳糖蛋白月东半固体培养基（用于水体中大肠菌群测定）

蛋白豚10g,牛肉浸膏5g,酵母膏5g,乳糖10g,琼脂5g,蒸储水

1000mL,pH=7.2〜74分装试管（10mL/管），115℃湿热灭菌20min。

24.乳糖蛋白月东培养液（用于多管发酵法检测水体中大肠菌

群）

蛋白陈10g,牛肉膏3g,乳糖5g,NaCl5g,蒸储水1000mL,1.6%旗甲

酚紫乙醇溶液1mL。调pH=至7.2,分装试管（10mL/管），并放入倒置杜氏小

管，115℃湿热灭菌20mino

25.三倍浓乳糖蛋白月东培养液（用于水体中大肠菌群测定］

将乳糖蛋白陈培养液中各营养成分以扩大3倍加入到1000mL水中，制法

同上，分装于放有倒置杜氏小管的试管中，每管5mL,115℃湿热灭菌

20mino

26.伊红美蓝培养基（EMB培养基）（用于水体中大肠菌群测

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定和细菌转导）

蛋白陈10g,乳糖10g,K2HP042g,琼脂25g,2%/伊红Y（曙红）水溶液

20mL,0。％美蓝（亚甲蓝）水溶液13mL,pH=7.4o

制作过程：先将蛋白陈、乳糖、K2HPO4和琼脂混匀，加热溶解后，调

pH二至7.4,115℃湿热灭菌20min,然后加入已分别灭菌的伊红液和美蓝液，

充分混匀，防止产生气泡。待培养基冷却到50℃左右倒平皿。如培养基太热会

产生过多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱备用。在细菌转导实验中用

半乳糖代替乳糖，其余成分不变。

27.加倍肉汤培养基（用于细菌转导）

牛肉膏6g,蛋白与20g,NaCl10g,水1000mL,pH=7.4〜7.6。

肉汤培养基D原理和使用方法

一、试验原理及用途：

明胶蛋白陈，牛肉浸粉提供碳源、氮源和维生素，满足细菌生长的需求；

大肠菌群可发酵培养基中的乳糖产酸产气，在小倒管中有气泡。

用于沙门氏菌前增菌培养或大肠菌群检测。

二、培养基配方fg/L）：

明胶蛋白陈5.0

乳糖5.0

牛肉浸粉3.0

pH6.9±0.225c

三、试验方法：

1.称取本品13g,加热溶解于1000ml蒸镭水中，分装试管每管10ml,并加

入倒管121c高压灭菌15分钟。

2.制备质控菌液。

3.把质控菌液加入试管中。

4.在36±1℃培养24±2小时，记录实验结果。

四、结果观察与解释

接种以下质控菌株，在36±1℃培养24±2小时：

质控菌株|菌株编号|接种量|生长情况|其他特征一

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伤寒沙门氏菌ATCC1402810-100+++浑浊

大肠埃希氏菌ATCC873910-100+++浑浊，产气

铜绿假单胞菌ATCC2785310-100+++浑浊

28.半固体素琼脂（用于细菌转导）

琼脂1g,水100mL,121c湿热灭菌30min。

29.豆饼斜面培养基（用于产蛋白酶霉菌菌株筛选）

豆饼100g加水5〜6倍，煮出滤汁100mL,汁内加入KH2P

MgS040.05%,（NH4）2S040.05%,可溶性淀粉2%,pH=6,琼脂2%〜2.5%。

30.酪素培养基（用于蛋白酶菌株筛选）

分别配制A液和B液。

A液：称取Na2HPO4・7H2。1.07g。干酪素4g,加适量蒸播水，并加热溶

解。

B液：称取KH2PoQ36g,加水溶解。

A、B液混合后，加入酪素水解液0.3mL,加琼脂20g,最后用蒸储水定

容至lOOOmLo

酪素水解液的配制：1g酪蛋白溶于碱性缓冲液中，加入1%的枯草芽胞杆

菌蛋白酶25mL加水至100mL,30℃水解lh。用于配制培养基时，其用量为

1000mL,培养基中加入100mL以上水解液。

31.细菌基本培养基（用于筛选营养缺陷型）

Na2HP04*7H20lg,MgS04«7H200.2g,葡萄糖5g,NaCl5g,K2HP04lg,

水1000mL,pH=7.0,115C湿热灭菌30min。

培养基（culturemedium）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁

殖使用的混合营养物制品。培养基一般pH为7.2〜7.6,少数的细菌按生长要求

调整pH偏酸或偏碱。许多细菌在代谢过程中分解糖类产酸，故常在培养基中

加入缓冲剂，以保持稳定的pH。培养基制成后必须经灭菌处理。

培养基按其营养组成和用途不同，分为以下几类：

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1.基础培养基

基础培养基(basicmedium)含有多数细菌生长繁殖所需的基本营养成

分。它是配制特殊培养基的基础，也可作为一般培养基用。如营养肉汤

(nutrientbroth)、营养琼脂(nutrientagar)、蛋白陈水等。

2.增菌培养基

若了解某种细菌的特殊营养要求，可配制出适合这种细菌而不适合其他细

菌生长的增菌培养基(enrichmentmedium)在这种培养基上生长的是营养要

求相同的细菌群。它包括通用增菌培养基和专用增菌培养基，前者为基础培养

基中添加合适的生长因子或微量元素等，以促使某些特殊细菌生长繁殖，例如

链球菌、肺炎链球菌需在含血液或血清的培养基中生长；后者又称为选择性增

菌培养基，即除固有的营养成分外，再添加特殊抑制剂，有利于目的菌的生长

繁殖，如碱性蛋白陈水用于霍乱弧菌的增菌培养。

3.选择培养基

在培养基中加入某种化学物质，使之抑制某些细菌生长，而有利于另一些

细菌生长，从而将后者从混杂的标本中分离出来，这种培养基称为选择培养基

(selectivemedium),例如培养肠道致病菌的SS琼脂,其中的胆盐能抑制革

兰阳性菌，枸椽酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病的沙门菌和志贺菌

容易分离到C若在培养基中加入抗生素，也可起到选择作用C实际上有些选择

培养基、增菌培养基之间的界限并不十分严格。

4.鉴别培养基

用于培养和区分不同细菌种类的培养基称为鉴别培养基(differential

medium)o利用各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物不同，在培

养基中加入特定的作用底物和指示剂，一般不加抑菌剂，观察细菌在其中生长

后对底物的作用如何，从而鉴别细菌。如常用的储发酵管、三糖铁培养基伊红-

亚甲蓝琼脂等。也有一些培养基将选择和鉴别功能结合在一起，在选择的同

时，起一定的鉴别作用，如SS琼脂，其中所加的底物乳糖和指示剂中性红就

起到鉴别作用。

5.厌氧培养基

专供厌氧菌的分离、培养和鉴别用的培养基，称为厌氧培养基(anaerobic

medium)o这种培养基营养成分丰富，含有特殊生长囚子，氧化还原电势

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低，并加入亚甲蓝作为氧化还原指示剂。其中心脑浸液和肝块、肉渣含有不饱

和脂肪酸，能吸收培养基中的氯；硫乙醇酸盐和半胱氨酸是较强的还原剂；维

生素K氯化血红素可以促进某些类杆菌的生长。常用的有庖肉培养基(cooked

meatmedium)硫乙醵酸盐肉汤等，并在液体培养基表面加入凡士林或液状石

蜡以隔绝空气。

此外，还可根据对培养基成分了解的程度将其分为两大类：化学成分确定

的培养基(definedmedium),乂称为合成培养基(syntheticmedium)；化

学成分不确定的培养基(undefinedmedium),又称天然培养基(complex

medium)也可根据培养基的物理状态的不同分为液体、固体和半固体培养基

三大类。在液体培养基中加入15g/L的琼脂粉，凝固成固体培养基；琼脂粉含

量在3〜5g/L时，则为半固体培养基。琼脂在培养基中起赋形剂作用不具营养

意义。液体培养基可用于大量繁殖细菌，但必须种入纯种细菌；固体培养基常

用于细菌的分离和纯化；半固体培养基则用于观察细菌的动力和短期保存细

菌。

32.YEPD培养基(用于酵母原生质体融合)

醉母粉10g,蛋白陈20g,葡萄糖20g,蒸储水1000mL,pH=6.0,115℃

湿热灭菌20min。

33.YEPD高渗培养基(用于酵母原生质体融合)

在YEPD培养基中加入0.6mol/L的Nad,3%琼脂。

YPD培养基又称YEPD培养基，可用于多种细菌培养，主要用于酵母常规

生长的复合培养基。LuageneYPD培养基主要由胰蛋白月东、酵母提取物、葡萄

糖等组成，其浓度比常规LB培养基高，