微生物的培养技术及应用(分层练习)-2024-2025学年高二生物同步课堂 (二)

1.2微生物的培养技术及应用

基础练

一、单项选择题：

1.有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（）

A.是碳源的物质不可能同时是氮源

B.微生物的培养都需要提供碳源、氮源、水、无机盐，缺一不可

C.牛肉膏蛋白陈培养基属于合成培养基，营养全面

D.液体培养基有利于营养物质的吸收，可用于微生物的扩漕培养

【答案】D

【详解】

A.同一种物质可以既作碳源又作氮源，如牛肉膏，A错误；

B.培养自生固氮菌时不需要加入氮源，B错误：

C.牛肉膏蛋白陈培养基属于天然培养基，营养全面，C错误；

D.液体培养基有利于营养物质的吸收，可用于微生物的扩增培养，D正确。

2.对下列实验用具或实验材料进行灭菌时，可以依次采用灼烧灭菌、干热灭菌、紫外线照射、高压蒸汽灭

菌的是（）

A.培养皿、吸管、接种箱、培养基

B.吸管、接种环、培养基、接种箱

C.接种环、培养基、吸管、接种箱

D.接种环、培养皿、接种箱、培养基

【答案】D

【详解】

A.培养皿和吸管应该进行干热灭菌，培养基应该用高压蒸汽灭菌，接种箱应该用紫外线照射消毒，培养基

应该用高压蒸汽灭菌，A错误；

BC.吸管应该进行干热灭菌，接种环应该进行灼烧灭菌，培养基应该用高压蒸汽灭菌，接种箱应该用紫外线

照射消毒，B、C错误；

D.接种环应该进行灼烧灭菌，培养皿应该进行干热灭菌，接种箱应该用紫外线照射消毒，培养基应该用高

压蒸汽灭菌，D正确。

3.下列关于微生物实验室培养的叙述，错误的是（）

A.平板划线法是在培养基上连续划线以纯化菌种的接种方法

B.培养霉菌时需将培养基的pH调至中性或微碱性

C.培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素

D.培养破伤风芽抱杆菌时需要提供无氧的条件

【答案】B

【详解】

A.平板划线法是在培养基上连续划线以纯化菌种的接种方法，A正确；

B.培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，B错误；

C.乳酸菌属于厌氧菌，因此培养乳酸菌时需要提供无氧的条件，并在培养基中添加维生素，C正确;

D.破伤风芽抱杆菌属于厌氧菌，培养破伤风芽抱杆菌时需要提供无氧的条件，D正确。

4.下列关于无菌操作技术的说法，正确的是（）

A.煮沸消毒法中100°C煮沸5〜6分钟可以杀死微生物细胞和所有芽胞、泡子

B.培养皿、培养基可用干热灭菌法灭菌

C.牛奶、熟啤、葡萄酒都可用巴氏消毒法消毒

D.高压蒸汽灭菌时间达到后立即排气降温

【答案】C

【详解】

A.煮沸消毒法中100C煮沸5〜6分钟可以杀死部分微生物细胞，不包括所有芽抱、抱子，A错误；

B.培养皿可用干热灭菌法灭菌，培养基一般用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，B错误；

C.牛奶、熟啤、葡萄酒都可用巴氏消毒法消毒，C正确；

D.高压蒸汽灭菌时间达到后，待冷却、降温后才可排气，D错误。

5.下列关于微生物实验操作的叙述，正确的是（）

A.配制细菌培养基过程中，需要在倒平板时调节培养基的pH

B.配制固体培养基时加入琼脂，其目的是为微生物生长提供碳源

C.平板划线法接种时，每次划线操作之前都需对接种环进行灭菌

D.实验结束后，使用完的培养基可以直接丢弃

【答案】C

【详解】

A.配制细菌培养基过程中，需要在灭菌前调节培养基的pH,A错误；

B.配制固体培养基时加入琼脂，其作用是作为凝固剂，而不是为微生物生长提供碳源，B错误；

C.平板划线法接种时，每次划线操作之前和之后都需对接种环进行灭菌，C正确；

D.实验结束后，使用完的培养基需要经过灭菌操作后才可以丢突，D错误。

6.有关平板划线操作正确的是（）

A.平板划线法接种时菌液一般不需要稀释

B.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

C.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞

D.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可

【答案】A

【详解】

A.平板划线法接种时菌液一般不需要稀释，A正确；

B.使用已灭菌的接种环时，操作过程中仍需要灭菌，B错误；

C.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后仍需通过火焰灭菌，然后再塞上棉塞，C错误；

D.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，灼烧接种环，冷却后从第一区划线末端开始

向第二区域内划线，重复上述过程，完成三、四、五区域内划线，D错误。

7.在实验室进行“酵母菌的纯培养”时，下列叙述不正确的是（）

A.分离和纯培养微生物最常用的培养基是琼脂固体培养基

B.倒平板时,拔出锥形瓶棉塞后，应将瓶口迅速通过火焰

C.倒平板时要在酒精灯火焰旁进行，以防杂菌污染

D.为了防止污染，接种环经灼烧灭菌后应趁热快速蘸取菌液

【答案】D

【详解】

A.分离和纯培养微生物最常用的培养基是琼脂固体培养基，A正确；

B.倒平板时，拔出锥形瓶棉塞后，应将瓶口迅速通过火焰，以防止杂菌污染，B正确；

C.为了防止杂菌污染，倒平板时要在酒精灯火焰旁进行，C正确；

D.接种环经火焰灼烧灭菌后，应该在火焰旁待接种环冷却后再蘸取菌液，以避免接种环因温度太高而杀死

菌种，D错误。

8.防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列有关叙述错误的是（）

A.煮沸消毒法可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽抱

B.对试管口、锥形瓶口等部位，通过火焰灼烧进行灭菌

C.接种环、培养基、培养皿等均须采用干热灭菌法灭菌

D.调节培养基的pH应该在配制培养基之后，灭菌之前进行

【答案】C

【详解】

A.煮沸消毒法可以杀死微生物的营养细胞和部分芽抱，不能彻底消灭所有微生物，A正确；

B.对试管口、锥形瓶口等部位，通过火焰灼烧进行灭菌，B正确；

C.培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌锅进行湿热灭菌，C错误；

D.应该在配制培养基之后，灭菌之前调节培养基的pH,D正确。

9.某实验小组要对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数。下列叙述错误的是（）

A.取样时，可选择农田或者菜园里的土壤，要注意采集土壤时一般要铲去表层土

B.样品稀释时，为避免杂菌污染，应选择无菌水等梯度稀释

C.因为要对分解尿素的细菌分离和计数，所以不能选择平板划线法进行接种

D.若稀释105倍后培养得到的菌落数分别为155、165、160,则每克土壤中分解尿素的细菌数量为

1.6x10*

【答案】D

【详解】

A.取样时，可选择农田或者菜园里的土壤，采集土壤时一般要铲去表层土，一般选取距地表约3-8cm的土

壤层取样，A正确；

B.为避免杂菌污染，应选择无菌水对样品进行等梯度稀释，B正确；

C.对分解尿素的细菌分离和计数，不能选择平板划线法进行接种，要用稀释涂布平板法,C正确：

D.由于不知道取的样液的体积，所以无法计算出每克土壤中分解尿素的细菌数，D错误。

10.纤维素酶在生产实践中有广泛的应用，例如制作果汁时加入纤维素陶可以使果汁清亮。为获得纤维素

酶高产菌株，研究人员以表中配方配制的培养基进行了相关的实验。下列叙述正确的是（）

NaNO.3MgSO,LHPOiFeSO,XH20

2.8g0.6g0.15g0.02g2.0g定容至IL

A.表中X是纤维素，它可以为菌株的生长提供碳源

B.在用稀释涂布平板法分离时，用涂布器蘸取的培养液的量不宜过多

C.在刚果红培养基中，透明圈越大说明该菌落产纤维素酶的能力越强

D.纤维素酶可以将不溶性的纤维素分解成葡萄糖和果糖，使果汁清亮

【答案】A

【详解】

A.要筛选出纤维素分解菌，应该用以纤维素作为唯一碳源的选抵培养基；纤维素分解菌也能以葡萄糖为碳

源，但是该培养基不选用葡萄糖作为碳源，因为葡萄糖是普遍微生物均可利用的碳源，用纤维素作为唯一

碳源时只有能分解纤维素的微生物能生存，A正确；

B.在用稀释涂布平板法分离时，用移液枪取0.1mL菌液，添加到培养基表面，再用消毒的涂布器将菌液均

匀地涂布在培养基的表面，B错误；

C.在刚果红培养基中，透明圈直径与菌落直径的比值越大，说明该菌落产纤维素酶的能力越强，C错误：

D.纤维素酶可以将不溶性的纤维素分解成葡萄糖，使果汁清亮，D错误。

二、解答题

11.某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了随机取样、系列糅度稀释、涂

布平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下：

请分析并回答下列问题：

(1)土壤取样时，取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要(填“消毒”或“灭菌”)

(2)该培养基中只选择了作为唯一氮源，制成的培养基经过高温蒸汽灭菌后，将培养基倒入培

养皿，待平板冷却凝固后，将平板倒置的目的是。

(3)在采用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，需要进行梯度稀释的目的是“

(4)在实验中，研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以

防止。实验结果为6号试管涂布的三个平板的菌落数为550、501、688,7号试管涂布的三个

平板的菌落数为58、73、97,8号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28。该l()g土壤样品中含有分解

尿素的细菌的估算数目是个。

【答案】

⑴灭菌

(2)尿素防止培养皿盖上的水珠落入培养基，造成污染(或避免培养基中的水分过快蒸发)

(3)将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并形成单个菌落，有利于计数

(4)因培养时间不足遗漏细菌数目，导致统计数目偏小7.6X1011

【详解】

(1)土壤取样时，取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要灭菌。

(2)本实验是探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，所以该培养基中只选择了尿素作为唯一氮源，

制成的培养基经过高温蒸汽灭菌后，将培养基倒入培养皿，待平板冷却凝固后，将平板倒置的目的是防止

培养皿盖上的水珠落入培养基，造成污染（或避免培养基中的水分过快蒸发）。

（3）在采用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，需要进行梯度稀释的目的是将聚集在一起的微生物分散

成单个细胞，并形成单个菌落，有利于计数。

（4）在实验中，研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可

以防止因培养时间不足遗漏细菌数目，导致统计数目偏小。在每一个梯度浓度内，至少要涂3个平板，选

择菌落数在30-300的进行计数，求其平均值，因此需要选择7号试管进行计数，并且7号试管的稀释倍数

为U倍，7号试管涂布的三个平板的菌落数为58、73、97,该10g土壤样品中含有分解尿素的细菌的估算

数目是1/3X（58+73+97）/0.IX10叹10=7.6X10”个。

提升练

一、单项选择题:

1.垃圾分类有利于变废为宝，减少环境污染。如图为分类后餐厨垃圾资源化处理的流程设计。下列叙述错

误的是（)

添加木屑堆肥体（好氧）

»腐殖质

餐厨垃圾破碎、压榨、沉渣

油襦合物灭菌

X—►沼气

A.压榨出的油水混合物可再加上，生产出多种产品

B.添加的木屑有利于堆肥体通气，还可作为某些微生物的碳源

C.X中需要添加合适的菌种，才能产生沼气

D.为保证堆肥体中微生物的活性，不宜对堆肥体进行翻动

【答案】D

【详解】

A.压榨出的油水混合物可再加工，生产出多种产品,有利于实现物质的循环再生和能量的多级利用,A正确；

B.添加的木屑有利于堆肥体通气，木屑也可作为某些微生物的碳源，B正确；

C.X中需要添加合适的菌种，通过分解有机物才能产生沼气，C正确；

D.为保证堆肥体中微生物的活性，可以对堆肥体进行翻动，D错误。

2.细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集

型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/n?）。下列叙述错误的是（）

A.采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理

B.细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置

C.同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值

D.稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高

【答案】D

【详解】

A.为防止杂菌感染，接种前需要对培养基、培养皿、微生物采样器进行灭菌，对实验操作者的双手进行消

毒，A正确；

B.纯化培养时，为防止污染培养基和水分蒸发，培养皿应倒置放在恒温培养箱内培养，B正确；

C.微生物计数时在同一稀释度下，应至少需要对3个菌落数目在30〜300的平板进行计数，以确保实验的

准确性，C正确；

D.便用稀释涂布平板法对微生物计数，数值往往偏小，原因是两个或多个细胞连在一起时,在平板上只能

观察到一个菌落，D错误。

3.某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度

梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（）

A.培养基pH需偏碱性B.泡菜汁需多次稀释后才能划线接种

C.需在无氧条件下培养D.分离得到的微生物均为乳酸菌

【答案】C

【详解】

A.因为乳酸菌经过无氧呼吸产生乳酸，故其生活的环境是酸性，培养基pH需偏酸性，A错误；

B.平板划线接种时不需要稀释，B错误；

C.乳酸菌是厌氧型微生物，所以需在无氧条件下培养，C正确；

D.参与泡菜发酵的微生物有乳杆菌、短乳杆菌和明串珠菌等，所以分离得到的微生物除了乳酸菌，还会有

其他耐高盐的微生物，D错误。

4.为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内土壤样本并开展相关实验。下列有关叙述埼

送的是（）

A.采样时应随机采集植物园中多个不同地点的土壤样本

B.培养细菌时，可选用牛肉育蛋白陈固体培养基

C.土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落

D.鉴定细菌种类时，除形态学鉴定外，还可借助生物化学的方法

【答案】c

【详解】

A.采集植物园中土壤样本的原则之一是要随机采样，A正确;

B.牛肉膏蛋白陈固体培养基中含有细菌生长所需的碳源、氮源、水、无机盐等，可用于细菌的培养，B正

确;

C.土壤溶液稀释倍数足够高时，才能将聚集的细菌分散开，有助于在培养基表面形成单菌落，C错误;

D.不同种类细菌的理化特性一般不同,鉴定细菌种类时，除根据菌落特征进行形态学鉴定外，还可以借助

生物化学的方法进行鉴定，D正确。

5.下列操作能达到灭菌目的的是（）

A.用免洗酒精凝胶擦手B.制作泡菜前用开水烫洗容器

C.在火焰上灼烧接种环D.防疫期间用石炭酸喷洒教室

【答案】C

【详解】

A.用免洗酒精凝胶擦手属于消毒，A错误；

B.制作泡菜前用开水烫洗容器属于消毒过程，B错误；

C.在火焰上灼烧接种环能达到灭菌目的，C正确；

D.防疫期间用石炭酸喷洒教室，属于消毒，D错误。

6.野生草本植物多具存根系发达、生长较快、抗逆性强的特点，除用于生态治理外，其中一些可替代木材

栽培食用菌，收获后剩余的菌渣可作肥料或饲料。相关叙述错误的是（）

A.种植此类草本植物可以减少水土流失

B.菌渣作为农作物的肥料可实现能量的循环利用

C.用作培养基的草本植物给食用菌提供碳源和氮源

D.菌渣作饲料实现了物质在植物、真菌和动物间的转移

【答案】B

【详解】

A.此类草本植物根系发达可以固定更多的土壤，故种植此类草本植物可以减少水土流失，A正确；

B.能量可多级利用，但不能循环利用，B错误；

C.草本植物含有蛋白质和纤维素，可给食用菌提供碳源和氮源，C正确；

D.草本植物可栽培食用菌，而菌渣可作肥料或饲料，故实现了物质在植物、真菌和动物间的转移，D正确。

7.鸡蛋表面污染的细菌会逐渐侵入蛋内，缩短鸡蛋保质期。对某地不同季节及不同养殖模式下生产的鸡蛋

取样，按每克鸡蛋用1mL无菌生理盐水清洗鸡蛋表面，收集清洗液，培养计数结果如下表。下列叙述错误

的是（）

菌落数（个・葭）

季节

半封闭式养殖模式全封闭式养殖模式

夏季3.92X1017.24X103

冬季7.60X1011.24X10'

A.表中数据是对清洗液稀释IXIO?倍后涂板获得的

B.稀释涂布平板法得到的鸡蛋表面菌落数比实际数略少

C.比较两种养殖模式可知鸡蛋表面的细菌主要来自环境

D.冬季鸡舍更需要消毒以减少鸡蛋表面的细菌污染

【答案】A

【详解】

A.菌落数为30-300的平板适于计数，根据图中数据分析，半封闭式养殖模式对清洗液稀释1X103倍后涂板，

全封闭式养殖模式对清洗液稀释IXIO2倍后涂板，A错误；

B.由于两个或更多的细胞可能聚集在一起形成一个菌落，因此稀释涂布平板法得到的鸡蛋表面菌落数比实

际数略少，B正确；

C.半封闭式养殖模式下的鸡蛋表面菌落数明显高于全封闭式养殖模式，这说明环境中的细菌更容易污染鸡

蛋表面，C正确；

D.从表中数据可以看出，冬季鸡蛋表面的菌落数明显高于夏季，这可能是因为冬季气温低，细菌更容易在

鸡蛋表面生存和繁殖，因此需要加强消毒措施，D正确。

8.大肠杆菌显色培养基是改良的快速检测培养基，可用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌的

快速检测。下列有关说法正确的是（）

A.从物理性质看大肠杆菌显色培养基属于液体培养基

B.大肠杆菌显色培养基中一般含有水、氮源、无机盐、维生素

C.可用稀释涂布平板法将大肠杆菌接种于显色培养基并进行计数

I）.在大肠杆菌显色培养基上观察到的是很多个细菌个体

【答案】C

【详解】

A.从物理性质看大肠杆菌显色培养基属于固体培养基，A错误；

B.大肠杆菌显色培养基无需要维生素，B错误；

C.稀释涂布平板法可用于接种和计数，C正确；

D.在大肠杆菌显色培养基上观察到的是很多个细菌菌落，而非个体，D错误。

9.野生型大肠杆菌能在基础培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株由「无法合成某种氨基酸，只能在完

全培养基上生长。如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表

示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述正确的是（）

A.A操作的目的是提高基因突变的概率，增加突变株的数量

B.B的正确操作是用接种环蘸取菌液后在②表面涂布来接种菌种

C.图中①②③为完全培养基，培养基一般用湿热灭菌法进行灭菌

D.若要获得氨基酸营养缺陷型突变株，可从④中挑取E进行纯化培养

【答案】A

【详解】

A.紫外线操作可以提高突变的频率，A操作即培养可以提高已突变菌株的浓度，即增加突变株的数量，A正

确；

B.B操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，B错误；

C.结合题图信息分析可知，野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，而氨基酸营养缺陷型菌株由于发

生基因突变无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长，且③中只有部分菌落，故图中①②④为完全培

养基，③为基本培养基，C错误；

D.④为完全培养基，③为基本培养基，若要获得氨基酸营养缺陷型突变株，可从④中挑取D进行纯化培养，

D错误。

10.超市中酸奶的配料表显示其有乳杆菌、嗜热链球菌等乳酸菌。研究小组计划将酸奶中的不同乳酸菌进

行分离纯化，下列操作的顺序正确的是（）

①高压蒸汽灭菌、倒固体平板

②将酸奶进行系列稀释

③准备水、培养皿并配制培养基

④挑取单菌落接种到斜面培养基

⑤用涂布器涂布并进行37c厌氧培养

A.①②->③->④->⑤