体外受技术医学宣教专家讲座

体外受精概念狭义：将动物受精过程中精卵结合在体外环境下完成现象。包含自然条件下体外受精(两栖类和鱼类)，和人为培养条件下体外受精(哺乳动物)。广义：经过特殊处理精子在体外使卵母细胞受精技术，所以体外受精胚胎移植后所生婴儿又称为“试管婴儿”。包含卵母细胞体外成熟和受精卵体外培养两项配套技术。优点：与体内受精相比，所需精子数降低，提升精液利用率。Example:流式细胞含仪分离性控精子只能用于体外受精。体外受技术医学宣教专家讲座第1页

国内外研究现状1878年，Schenk(Germany)将体内成熟家兔和豚鼠卵子与附睾精子放入子宫液中培养，观察到第二极体排出和卵裂现象；

1945年，张明觉(华裔)偶然取得兔体外受精卵，但无重复性，且无试管动物出生；

1951，张明觉与Austin(澳)同时发觉精子获能现象；1959年，他首次取得体外受精兔；

80年代以来，对胚胎需求量加大，促进了家畜体外受精研究，牛、绵羊、山羊、猪等体处胚相继取得了成功，国内90年代在家畜上也取得了成功；

现已将卵母细胞体外成熟--体外受精--早期胚体外发育--冷冻保留结合在一起，建立工厂化胚胎生产。体外受技术医学宣教专家讲座第2页国内外研究现状世界体外受精首创纪录

动物种类首创纪录文件兔Thibault(1954)叙利亚仓鼠Yanaginmachi,chang(1963)小鼠Whittingham(1968)中国仓鼠Pickworth,Chang(1969)猫Hammer(1970)土拨鼠Yanagimachi(1972)大鼠Miyamoto,Chang(1973)狗Mahi,Yanagimachi(1976)牛Brackett(1978)猪Iritani,Niwa(1977)绵羊Bondioli,Wright(1980)山羊花田章(1985)

体外受技术医学宣教专家讲座第3页国内外研究现状我国体外受精首创纪录

动物种类首创纪录文件小鼠陈秀兰(1986)兔范必勤(1987)绵羊旭日干(1989)牛旭日干(1989)山羊钱菊汾(1990)猪范必勤(1990)水牛蒋和生(1993)

体外受技术医学宣教专家讲座第4页体外受精技术流程卵母细胞体外成熟精子体外获能卵母细胞体外受精受精卵体外发育配子冷冻保留体外受技术医学宣教专家讲座第5页体外胚胎生产技术要点卵母细胞采集与体外培养1.离体采集：30min内取卵巢，置生理盐水或PBS（25℃-35℃），3h内回收。⑴卵泡抽吸法：针头穿刺，一次进针可抽吸卵巢皮质多个卵泡优点：回收速度快，不易造成卵母细胞污染；缺点：轻易损伤卵母细胞周围卵丘细胞，影响其随即成熟。

体外受技术医学宣教专家讲座第6页体外胚胎生产技术要点卵母细胞采集⑵卵巢解剖法：卵巢切为两半，去掉中间髓质部分，刀片划破卵泡，在培养液中重复冲洗优点：能保持卵母细胞周围卵泡细胞完整性，回收率也相对较高；缺点：回收速度相对较慢，轻易造成污染。

体外受技术医学宣教专家讲座第7页体外胚胎生产技术要点卵母细胞采集2.活体采集(OvumPick-Up,OPU)

⑴腔镜法：腹壁切开一小口，插入腹腔镜，操作杆和穿刺针，配合将卵母细胞抽吸出来优点：比较直观，轻易掌握；缺点：工作量大，对母牛有损伤，不能频繁手术。体外受技术医学宣教专家讲座第8页体外胚胎生产技术要点卵母细胞采集⑵B型超声波法：超声波探头和采卵器插入到阴道子宫颈一侧穹隆处。术者经过直肠将卵巢贴在探头上，依据B超屏幕上所显示卵泡位置进行穿刺而将卵母细胞抽出优点：不用手术，操作速度快，对母牛损伤小，可频繁采卵，且亦可对妊娠母牛采卵；缺点：操作技术较难掌握，并需要昂贵超声设备。体外受技术医学宣教专家讲座第9页体外胚胎生产技术要点卵母细胞筛选只有周围包被着完整卵丘（A级）或部分卵丘脱落（B级）(1层以上卵丘细胞）、胞浆均质并充满于透明带内卵母细胞才能进行成熟与胚胎发育培养。

A级：卵丘细胞致密，最少有5层以上；

B级：卵丘细胞为2-4层；

C级：卵母细胞大部分被包裹；

D级：卵母细胞少许被包裹；

E级：裸卵。

A、B级可用于培养，C、D级成熟率低。体外受技术医学宣教专家讲座第10页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟卵母细胞成熟目标：提供可利用卵母细胞用于体外受精、克隆等；研究其体内成熟模型。卵母细胞体外成熟特征生发泡破裂；染色体凝集；纺缍体形成；极体排出；透明带软化；卵丘细胞扩展。体外受技术医学宣教专家讲座第11页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟卵母细胞成熟培养液以TCM-199很好，可使牛、羊、猪卵母细胞体外成熟率高达80%以上。添加成份：促性腺激素：FSH、LH

FCS、BSA：有认为FCS比BSA好，而发情牛血清或发情羊血清比FCS好。抗生素体外受技术医学宣教专家讲座第12页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟培养OocyteCollectionMedium(OCM)最惯用是碳酸氢钠或Hepe’s缓冲TCM-199;

2.OocyteMaturationMedium

（1)Bovinesteerserum

(2)Folltropin

(3)Estradiol

(4)NaPyruvate

(5)Glutamine体外受技术医学宣教专家讲座第13页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟培养2.成熟培养时间

普通22h-24h，但猪40h-44h，马30h-36h，兔仅12h-15h3.成熟培养温度和气相环境

人和啮齿类动物：37℃牛、猪、羊和马等：38℃~39℃。pH：7.7好于7.1，7.4，8.0渗透压：330Osm/kg好于300，320气相：5%CO2

5%CO2＋5%O2＋90%N2

体外受技术医学宣教专家讲座第14页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟培养4.IVM系统⑴开放培养系统1ml-2ml成熟培养液直接置于平皿内或培养板内，放入50枚-200枚卵母细胞培养，上面不盖石蜡油。优点：简单，对培养液中脂溶性物质没有若影响，能同时培养大量细胞缺点：渗透压改变较大，轻易污染体外受技术医学宣教专家讲座第15页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟培养⑵微滴培养系统将成熟培养液在做成50-500

l微滴，覆石蜡油，将卵母细胞置于其中培养。优点：渗透压比较稳定，不易污染；缺点：对脂溶性物质有稀释作用，成本高，培养结果易受石蜡油质量影响。

⑶密闭培养系统置1～2ml培养液试管中，胶塞，在培养箱或恒温水浴中培养；若采取培养皿或微滴培养，则可将其装入密闭塑料袋内。优点：不要CO2培养箱，方便运输缺点：pH不如前者稳定。体外受技术医学宣教专家讲座第16页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟卵母细胞成熟标志第一极体排出、卵丘细胞扩展可作为成熟标志，而生发泡破裂(GVBD)是卵母细胞恢复减数分裂主要标准，所以惯用地衣红染色才可判断。牛卵母细胞体外成熟标准：1级成熟卵：卵丘细胞完全扩展，卵丘细胞最少向外扩展3倍于裸卵直径；2级成熟卵：卵丘细胞中等扩展，卵丘细胞最少向外扩展2倍于裸卵直径；3级成熟卵：卵丘细胞轻度假扩展，卵丘细胞仍紧紧粘附于透明带上。1级和2级卵通常均已排出第一极体。体外受技术医学宣教专家讲座第17页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟质量评定⑴形态观察：细胞质均匀、没有空泡

⑵固定染色法：0.1%透明质酸酶醋酸酒精或醋酸甲醇（1:3）固定24h～48h1%间苯二酚兰（Lacmoid）或1%地衣红（Orcein）40%醋酸溶液染色⑶受精和胚胎发育潜能评定

体外受技术医学宣教专家讲座第18页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟影响卵母细胞成熟原因卵母细胞起源：不一样种类动物、不一样生理阶段动物(小牛低于成年牛)、卵母细胞质量等；（1）动物种类与年纪：牛、羊效果很好，而马、猪较差。小牛卵母细胞平均直径（118.04±1.15μm）比成年母牛（122.84±0.74μm）小。体外成熟小牛卵母细胞体外受精后发育潜力也低于成年卵母细胞体外受技术医学宣教专家讲座第19页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟（2）卵母细胞形态A、76.2%；B、67%；C、22%；D、11.4%（3）卵巢贮存时间与温度<30ºC对成熟和胚胎发育不利(First&Parrish）绵羊卵巢贮存在22ºC数小时对成熟无显著影响，但体温条件下则会使卵母细胞质量下降(Moodie&Graham)体外受技术医学宣教专家讲座第20页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟2.激素

当前大多数都离不开FSH或LH或二者混合物，但仍有争议GH能显著提升精子受精率，促进卵裂及胚泡形成甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）胰岛素激活素体外受技术医学宣教专家讲座第21页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外成熟3.生长因子

当前已经证实与卵母细胞成熟相关生长因子有：上皮细胞生长因子（EGF）、转化生长因子α和β（TGF-α，β）、成纤维细胞生长因子（FGF）、胰岛素类生长因子Ⅰ和（IGFⅡ-Ⅰ，Ⅱ）4.血清胎牛血清（FBS）、发情牛血清（OCS）、发情前期母牛血清（POS）、超排母牛血清（SCS）、公牛血清（SS）。体外受技术医学宣教专家讲座第22页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外保留1.37℃保留

应考虑保留时间与卵老化2.低温保留

0℃-10℃兔:<10℃24h，受精率78％，78h仍可保持受精能力；>10℃，受精能力显著降低。

体外受技术医学宣教专家讲座第23页体外胚胎生产技术要点卵母细胞体外保留3.冷冻保留

借鉴胚胎冷冻方法，现已建立了几个卵母细胞冷冻程序：A慢速冷冻、慢速解冻法B慢速冷冻、快速解冻法C快速冷冻、快速解冻法D一步冷冻法E玻璃化法

F超快速冷冻法体外受技术医学宣教专家讲座第24页体外胚胎生产技术要点影响卵母细胞成熟原因培养条件：温度：37C很好，但各种动物最适温度不一样，如兔子低于体温3C很好，牛35-39C都可，但38-39C最适当；培养基：水、血清（无血清、有血清)、无血清时添加BSA等；有血清时如胎牛血清、发情牛血清、公牛血清、超排牛血清等；体外受技术医学宣教专家讲座第25页体外胚胎生产技术要点精子分离与洗涤洗涤目标：去掉精浆中抑制精子获能因子和死精子，或洗去防冻剂及卵黄等成份，以取得活力好精子。精子分离及洗涤方法悬浮法(Swim-up)：利用精子上游特征将高活力精子与死精子及精浆成份分开。将精液置于获能液或受精液中，培养箱中孵育龄10-30分钟，吸收上层液体，再离心洗涤1-2次即可。精子分离、洗涤与体外获能体外受技术医学宣教专家讲座第26页体外胚胎生产技术要点精子分离、洗涤与体外获能离心洗涤法：对于活力好精子直接将其放入获能液或受精液中，离心洗涤若干次便可。BSA/Percoll密度梯度离心法：利用形态正常精子密度高于异常精子原理。如将BSA制成不连续密度梯度或将Percoll制成30-40%或45-90%梯度，经平衡离心从而得到高受精力精子。

玻璃棉过滤法：采作小玻璃珠过滤除去死精子。因其成本高，较少采取。体外受技术医学宣教专家讲座第27页（二）精子获能处理方法

1.血清白蛋白法

将精子与血清白蛋白溶液进行长时间孵育。该法因为需要时间较长，且诱发精子获能作用不强，故仅在IVF技术研究早期进行过尝试，含有一定作用，当前仅作为精子获能一个辅助伎俩。2.高渗盐法

精子表面含有许多被膜蛋白，即所谓“去能因子”。当用高离子强度溶液处理精子时，这些被膜蛋白将从精子表面脱落，从而造成精子获能。因为高离子强度溶液对精子含有渗透打击作用，会影响精子活力，故当前已废除不用。

体外受技术医学宣教专家讲座第28页（二）精子获能处理方法3.卵泡液孵育法卵泡液含有来自血清大分子物质，并含有诱发精子获能和顶体反应因子，故在精液中添加一定浓度卵泡液可诱发精子获能。10%卵泡液，牛受精分裂率（40.3%Vs87.5%）和囊胚发育率（8.3%Vs40.4%）均显著下降，但加入50%卵泡内膜细胞条件液则能。卵泡液能够用于精子获能处理，但不能用于IVF系统。体外受技术医学宣教专家讲座第29页（二）精子获能处理方法4.钙离子载体法钙离子载体A23187能直接诱发Ca2+进入精子细胞内，提升细胞内Ca2+浓度，从而造成获能。

0.5

mol/L~1.0

mol/LA23187溶液处理精子5min，然后加入等量含1%BSABO溶液终止A23187作用，即可将获能精子加到含卵母细胞受精滴中进行IVF。注意控制A23187工作浓度和作用时间，不然会造成精子活力下降和死亡。

体外受技术医学宣教专家讲座第30页（二）精子获能处理方法

5.肝素法肝素是一个高度硫酸化氨基多糖类化合物，与精子结合后，能引发Ca2+进入精子细胞内部而造成精子获能。

最初，制备好精子惯用含有肝素（100mg/L）获能液预处理15min，然后加到受精滴中进行IVF。现直接将肝素（50mg/L）添加到受精液中进行受精。

体外受技术医学宣教专家讲座第31页（三）精子获能检测

1.精子形态及运动方式观察

头部膨大，活力增强，超活化2.顶体反应检测

（1）双重染色法

优点：无需昂贵设备，简单易行；缺点：易发生误判

（2）透射电镜观察

成本高，制片繁琐，可操作性不强。

体外受技术医学宣教专家讲座第32页三、IVF培养系统（一）微滴系统

20-40

l微滴受精液，覆石蜡油，每滴放入IVM卵母细胞10-20枚及获能处理精子（1.0-1.5）×106个/ml，孵育6-24h

优点：受精液及精液用量均较少，IVF效果亦很好；缺点：结果易受石蜡油质量影响，操作繁琐，成本较高。体外受技术医学宣教专家讲座第33页（二）四孔培养板系统

每孔加入500ml受精液和100-150枚IVM卵母细胞，然后加入获能处理精子（1.0-1.5）×106个/ml，孵育6h-24h。优点：操作相对比较简单，受精结果不受石蜡油质量影响；

缺点：精子利用率相对较低，IVF效果不如微滴法稳定。三、IVF培养系统体外受技术医学宣教专家讲座第34页通常以精子穿透率、原核形成率、受精分裂率和囊胚发育率来衡量。其中，囊胚发育率最为可靠。（一）固定染色法

受精8~10h精子穿透率和多精子受精率；受精18~20h双原核形成率（二）体外培养

受精48h2-8细胞百分比，7d囊胚发育率，9d囊胚孵化率三、IVF质量评定体外受技术医学宣教专家讲座第35页体外胚胎生产技术要点精子分离、洗涤与体外获能

SpermSwim-upItisslowerthanthePercollprocedure,sometimesitdoesnotgivebetterresults.

1.Thaw6to8strawsoffrozensemeninthecyto-thawfor60seconds.

Ifpossible,usesemenfromdifferentbulls.2.Combinecontentsofstrawsin5mlSp-TALP.

Placesampleintotheincubator(38.5°C)for5minutes.

3.Centrifugesemen(200xg;5min)anddiscardallbutthebottom1mlofsupernatant.4.Prepare4to5testtubescontaining1mlSp-TALP.

Addapproximately250mlofspermsuspensionveryslowlytothebottomofeachtubeusinga20gaugeneedleand1mlsyringe.

Placetubesinincubator(38.5°C)for1h.5Attheendofspermswim-up,aspiratethetop800mlfromeachtubeandcombinesamples.

Centrifuge(1000rpm)thecombinedsamplefor5minutes.

Discardallbutthebottom500mlofsupernate.体外受技术医学宣教专家讲座第36页体外胚胎生产技术要点精子分离、洗涤与体外获能

Glass-woolFiltrationThisfiltrationprocedureusuallyrequires10-15minutesandgenerallyyieldsnearly100%viablesperm.

1.Prepareinadvance0.2mlglasswoolcolumnsin1mlsyringesthatarerinsed10XwithMilli-Qwaterandautoclaved.2.

Immediatelybeforestartingpurification,rinsecolumnseveraltimeswithHepes-TALPandfinallywithSperm-TALPtoequilibratecolumn.3.Frozen-thawedsemen(3-5straws)iswashedtwicewith10-15mlSperm-TALPbycentrifugationat200xg(10min)andthenresuspendedin0.6-0.8mlIVF-TALP.4.Spermsuspensionisthenlayeredoverthewetcolumnandallowedtofilterbygravity.5.Thenumberandviabilityoffilteredspermisdetermined.体外受技术医学宣教专家讲座第37页体外胚胎生产技术要点精子分离、洗涤与体外获能体外受技术医学宣教专家讲座第38页

ThawstrawLayeringofspermontoPercoll.

Aftercuttingthetipofthestraw(Leftpanel),thecontentsofthestrawareexpelledontothetopofthePercollgradient(rightpanel).

Here,removalofthesemenisfacilitatedbyusingahomemadeplunger.Percollgradient:uptobottom45-90%体外受技术医学宣教专家讲座第39页RemovalofspermfromthebottomofthePercollgradient.WashingsperminSp-TALP.

Theleftpanelshowsthewashedandcentrifugedsperm.

Therightpanelshowsthepelletofspermremaininginthetubeafteraspirationofthesupernatant.Percollmethod体外受技术医学宣教专家讲座第40页Hemacytometerusedforcountingsperm.

体外受技术医学宣教专家讲座第41页体外胚胎生产技术要点精子分离、洗涤与体外获能2.精子体外获能(1)卵泡液孵育法：卵泡液含有来自血清大分子物质，并含有诱发精子获能和顶体反应因子，故在精液中添加一定浓度卵泡液可使精子获能。但不能用于体外受精(卵裂率和囊胚率下降)。(2)钙离子载体法：钙离子载体A23187能诱发Ca进入精子细胞内，诱发精子超活化和顶体反应，从而造成获能。但其作用时间和浓度对于获能非常关键。体外受技术医学宣教专家讲座第42页体外胚胎生产技术要点精子分离、洗涤与体外获能(3)肝素法：它与精子孵育后，能引发Ca进入精子内，造成获能。这是被广泛采取获能法。原来将肝素(100mg/ml)获能液预处理精液，再受精，现在直接将肝素(50mg/ml)添加到受精液中受精。实际操作时，常将各种原因共同使用，如咖啡因-肝素-BSA系统。体外受技术医学宣教专家讲座第43页体外胚胎生产技术要点精子分离、洗涤与体外获能3.精子获能检测(1)精子形态及运动方式改变(惯用)：获能后精子头部膨大，运动增强。(2)顶体反应检测：

双重染色法：取样—固定—染色(快绿FCF和曙红)—涂片—干燥—观察—若头部有厚蓝绿区为无获能，若出现粉经为获能。电镜法：体外受技术医学宣教专家讲座第44页2.体外授精

授精通常在覆盖下微滴中进行，微滴以50-100ul，普通每滴中加5-10个卵母细胞，精子最终浓度为1X106个/ML。

培养条件：5%CO2、39C培养，BO液中6-8h，TALP液中18-24h。

体外胚胎生产技术要点精子体外获能与体外受精(牛)体外受技术医学宣教专家讲座第45页1.

Removeplatescontainingmaturedoocytesfromtheincubatorandplaceontheslidewarmer.2.Add25mlspermpreparationand25mlPHEmixintoeachwell.

Whenpipettingthesperm,placethepipetteinthemiddleofthespermsuspensionratherthanonthebottomtoavoidgrabbingdebristhatcansettletothebottomofthetube.

3.

Return4-wellplatetoincubatorfor8-10h.Manypeopledofertilizationfor18-20h.WhenwewereestablishingIVFinourlab,8-10hgavebetterresultsthanlongerincubationtimes.Recently,however,wehavegottengoodresultswith18-20hfertilizationtimes.Inaddition,longerfertilizationtimesmakeiteasiertoremovecumuluscellsafterfertilization.

Todeterminetheincidenceofparthenogenesis,onewellshouldbepreparedwithoutsperm,butwithPHE.

After8–10h,placetheseoocytesintoaseparateculturemediumdropandculturefor2daysbeforelookingatrateofparthenogenesis.体外胚胎生产技术要点体外受精体外受技术医学宣教专家讲座第46页体外胚胎生产技术要点早期胚胎体外发育阻滞期：

各种动物早期胚胎体外发育时都存在阻断期，所以可经过改进培养条件和在培养液中添加生长因子(TGF-或bFGF等)或细胞外基质因子克服阻断。但当前发育率依然比较低，约为40%，是限制体外受精应用一个突出问题。

各种动物阻断期：

牛：

猪：

羊：

体外受技术医学宣教专家讲座第47页体外胚胎生产技术要点早期胚胎体外发育

培养液添加成份：(1)丙酮酸钠和乳酸钠：作为能量底物。(2)生物体液和蛋白质：FCS、NCS、发情母畜血清、BSA等。(3)激素：PMSG、FSH、胰岛素、雌激素等，提升囊胚率。(4)生长因子及多肽：IGF，促进卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育；EGF促进胚胎分化和囊胚形成；TGF促使牛胚胎经过早期阻断；LIF(白血病抑制因子)提升孵化囊胚发育率，并抑制胚胎干细胞体外分化。体外受技术医学宣教专家讲座第48页体外胚胎生产技术要点早期胚胎体外发育

2.胚胎体外培养系统常规培养系统：微滴法和培养板法。输卵管离体培养法：克服阻断，但因繁琐不惯用。与体细胞共培养：如输卵管上皮细胞、滋养层细胞、颗粒细胞、子宫内膜细胞等。体外受技术医学宣教专家讲座第49页体外胚胎生产技术要点胚胎冷冻保留常规慢速冷冻法

冷冻液:

1.5M甘油+0.25M蔗糖+PBSS液+0.1mg/mlPVP

1.5M乙二醇+0.25蔗糖+PBSS液+0.1mg/mlPVP

冷冻方法：

①在室温下，先将牛胚胎放入防冻液中平衡一段时间；

②装管；

③以每分钟1℃速度降温至–7℃；

④植冰；

⑤以每分钟0.5℃速度降温至–35℃；平衡10分钟后，投入液氮中保留。体外受技术医学宣教专家讲座第50页体外胚胎生产技术要点胚胎冷冻保留2.玻璃化冷冻

冷冻液：

EFS40：40%乙二醇+0.3M蔗糖+18%聚蔗糖+PBSS

冷冻步骤：

首先将胚胎放入20%乙二醇溶液（EFS20）中平衡5min；

用移卵管移入玻璃化溶液中平衡10min；

装管，封口；

将细管投入液氮冷冻保留。体外受技术医学宣教专家讲座第51页影响体外受精因素卵母细胞成熟精子体外获能体外受技术医学宣教专家讲座第52页（一）卵母细胞成熟度体外受技术医学宣教专家讲座第53页（二）精子体外获能体外受技术医学宣教专家讲座第54页（三）公畜影响体外受技术医学宣教专家讲座第55页Someinstrumentsusedtopickupembryosandoocytes.

Fromlefttorightarea1ccsyringewithanextensionofrubbertubingconnectedtoaUnopette,

awiretrol(fromDrummondScientific),thesamedeviceas#1withouttherubbertubingextensionanda5mlDrummondMicrodispenser.体外受技术医学宣教专家讲座第56页Useofthewiretrolusingtwohands(leftpanel)oronehand(rightpanel).体外受技术医学宣教专家讲座第57页TwomethodsforusingtheUnopettetip.

ThedeviceontheleftpanelhasbeenmodifiedtoincludeapieceofrubbertubingbetweentheUnopetteandsyringetogivethetechniciangreatercontroloverthevolumeaspirated.体外受技术医学宣教专家讲座第58页

(A)

OnaPetri-dish(i.e.Intergridplate)place3microdropsof70

lholdingmediumsidebyside.

(B)Placeoneblastocystintothemiddledrop(C(C-D)Insertthecottonplugsideofa0.25mlFrenchstrawintothewideendofthepipettip.D((E)Aspirateoneemptydrop.A(E)Aspirateairtocreatea~0.5cmcolumnA(F)Aspiratethemicrodropcontainingembryo(makesurethattheembryoisaspiratedbyobservingunderthemicroscope;A(F)Aspirateairtocreatea~0.5cmcolumnh(G)Aspiratetheremainingemptydropuntilthecottonplugiswet.R(H)Removetransferstrawfromsyringeandplaceonslidewarmeruntiluse.体外受技术医学宣教专家讲座第59页Whoshouldbetreatedwithinvitrofertilization?

Invitrofertilizationcanbeusedasaneffectivetreatmentforinfertilityofallcausesexceptforwomenwithinfertilitycausedbyananatomicproblemwiththeuterus,suchassevereintrauterineadhesions.

Itisgenerallyusedincoupleswhohavefailedtoconceiveafteratleastoneyearoftryingwhoalsohaveoneormoreofthefollowing:1.Blockedfallopiantubesorpelvicadhesionswithdistortedpelvicanatomy.WomenthathavehadtuballigationandareconsideringtubalreversalsurgeryaswellasmenthatareconsideringvasectomyreversalsurgerymightalsoconsiderIVF.

2.Severemalefactorinfertility(lowspermcountorlowmotility)

3.Failed2-6cyclesofovarianstimulationwithintrauterineinsemination

体外受技术医学宣教专家讲座第60页Whoshouldbetreatedwithinvitrofertilization?4.Advancedfemaleage-over38

5.Reducedovarianreserve,whichmeanslowerquantity(andsometimesquantity)ofeggs.Aday3FSHandestradioltestandantralfolliclecountsareoftendoneasscreeningtestsforeggquantity(andquality).ReducedeggquantityandqualityisusuallytreatedwitheitherIVF,orwithIVFusingeggdonationfromanotherwoman.

6.Severeendometriosis体外受技术医学宣教专家讲座第61页Thegraphshowslivebirthratesforall23reportingIllinoisIVFcentersfor

Theseclinicsreportedlivebirthratesrangingfrom13.5%to47.4%pereggretrievalforwomenunder35

FiveIllinoisIVFprogramsfailedtoreporttheiroutcomedatatothegovernment(USlawrequiresreportingannually)体外受技术医学宣教专家讲座第62页Howisinvitrofertilizationperformed?1.BasicscreeningtestsareperformedonbothpartnersatallIVFclinics.Ingeneral,sometestingof"ovarianreserve"shouldbedoneonthefemalepriortostartingtheinjections.Weuseday3FSHtestingaswellasantralfolliclecountsforthispurpose.Theresultsofthesetestsgiveussomeabilitytopredictwhetherherovarieswillrespondwelltothedrugs(makesufficientfolliclesandeggs).ThenumberofeggsretrievedcorrelatesstronglywithIVFsuccessrates.

2.Consentsaresignedbyallparties.3.Thewomanisstimulatedwithinjectedmedicationstodevelopmultipleeggdevelopment.Theseinjectionscontinueforabout8-10days.体外受技术医学宣教专家讲座第63页Howisinvitrofertilizationperformed?4.Bloodandultrasoundtestingisdoneevery1-3daystomonitorthedevelopmentofthefollicles(egg-containingstructures)intheovaries.Weneedtogetaminimumnumberof3folliclestodeveloptomaturityinordertobeabletoproceedwiththeeggretrieval.About90%ofwomenunder40withanormalFSHandnormalantralfolliclecountswilldevelopatleastthisminimumnumberoffollicles.Ifthismanymaturefolliclescannotbeobtainedfromthestimulationprocess-wewill"cancel"thecycle(notproceedtoeggretrieval).体外受技术医学宣教专家讲座第64页Howisinvitrofertilizationperformed?5.Whenthewoman'sfolliclesaremature,atransvaginalultrasound-guidedeggretrieval(eggaspiration)procedureisperformedtoremovetheeggsfromthefollicles.Theaverage

durationofthisprocedureis5-6minutes(atourfacility).6.Theembryosareculturedinthelaboratoryfor2-6days.7.Theembryotransferprocedureisdonewhichplacestheembryosinthewoman'suteruswheretheywillhopefullyimplantanddeveloptoresultinalivebirth.ThisislikeaPapsmearforthewoman.Thereshouldbenodiscomfort.

8.Ifthereareleftoverembryos(ofsufficientquality)beyondthenumberthatistransferred,manycouplesprefertohavethemfrozen(cryopreserved)foruseinafuturecycle.

Embryocryopreservationcanbeusedforanotherattemptathavingababyifthe"fresh"cyclefails-orasanattempttohaveanotherchi