怀化医专微生物学检验教案

怀化医专《微生物学检验》教案编号：20XX年上学期授课教师李争鸣李争鸣教学课题非发酵菌及检验课时授课时间2星期星期星期星期星期星期授课对象检验专业班级目的要求【掌握】1、非发酵菌的概念，菌属和种属间的鉴别。2、铜绿假单胞菌、不动杆菌的生物学特性和微生物学检验。【了解】非发酵的感染特点和假单胞菌属的其他种类。教学重点及难点非发酵菌的分群依据。铜绿假单胞菌的主要生物学特性及微生物学检验。不动杆菌属主要生物学特性及微生物学检验。教法与学法讲授法、归纳、比较课型理论课教学手段多媒体教学内容与时间分配一、概述：非发酵菌的概念，菌属和种属间的鉴别。（20min）二、假单胞菌属：铜绿假单胞菌的生物学特性和微生物学检验；其他假单胞菌。（35min）三、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属。（30min）小结（5min）复习思考题1、什么叫非发酵菌？如何鉴定？2、非发酵菌与肠道杆菌有何共同点，怎样鉴别？参考资料1、张卓然主编《临床微生物学与微生物检验》人卫出版社第3版2006.112、倪语星主编《临床微生物学与检验》人卫出版社第4版，20XX年3、李凡主编《医学微生物学》人卫出版社第7版2008.1自评非发酵菌也是临床细菌检验工作中常见菌。本次课重点突出，要求学生掌握分群依据,作出初步判断，其中重点应掌握铜绿假单胞菌的主要生物学特性及微生物学检验法。由于非发酵菌与肠道杆菌的镜下形态非常相似，因此在进行非发酵菌的鉴定时应特别注意与肠道杆菌的区别。讲解清楚，授课效果较好。第二十一章非发酵菌及检验第一节概述非发酵菌（nonfermenters）是指一群不能利用或仅以氧化形式利用糖类、生化特性十分相近的革兰阴性无芽胞杆菌。包括多个菌属，主要有：假单胞菌属不动杆菌属产碱杆菌属莫拉菌属黄杆菌属分群依据：1.氧化酶试验阳性（不动杆菌及个别假单胞菌为阴性）2.葡萄糖氧化/发酵（O/F）：开管产酸，闭管不变。3.动力：大多为专性需氧菌，在半固体上动力不明显（动力观察应在30℃或室温12~24小时培养物悬滴法为准或以鞭毛染色鉴别）据鞭毛位置和数目分三类：无鞭毛，端鞭毛，周毛菌。4.麦康凯培养基上生长：可分群。见表非发酵菌主要菌属的生化反应菌属氧化酶葡萄糖O/F悬滴触酶硝酸盐麦康凯生长假单胞菌属+O/-+++/-+不动杆菌属-O/--+-+产碱杆菌属+-+++/-+莫拉菌属+--++/-+黄杆菌属+O/F-+-+/-第二节假单胞菌属（Pseudomonas）广泛存在于自然界的空气、水和土壤中。种类多达200余种，大多数为条件致病菌。特点：革兰阴性，直或微弯曲，大多有鞭毛（单鞭毛或单端丛毛），无芽胞，专性需氧，营养要求不高。氧化酶（+）。铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）为假单胞菌的代表，为条件致病菌，也是医院感染的常见病菌之一。（一）生物学性状1、形态染色性：革兰阴性杆菌，呈球杆状或长丝状，长短不一，单个或短链排列。无芽胞，单端有鞭毛1~3根，运动活泼。2、培养特性：专性需氧，4℃不长，42℃可生长（鉴别）。血平板：常见透明溶血环普通平板：有生姜气味。可产多种色素，主要有：绿脓素（兰绿色，可溶于水和氯仿）和荧光素（只溶于水）。从临床标本中分离的菌株大多产生此色素。麦康凯上可形成5种不同形态的菌落：①典型型：灰绿色，大小不一，扁平湿润，边缘不齐，表面可见金属光泽。②大肠菌群型：圆形凸起，灰白色半透明。③粗糙型：菌落中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。④侏儒型：细小无光泽，半透明菌落⑤粘液型：光滑凸起呈粘液状3、生化反应：氧化酶＋，O/F上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸，精氨酸双水解酶＋，枸橼酸盐＋，硝酸盐＋。4、抵抗力：较强，临床分离株对多种抗生素耐药。（二）致病性：可产生多种致病物质：内毒素、外毒素、菌毛、荚膜、胞外酶和溶血物质。除自然界外，也存在于人体皮肤上及与外界相通的腔道中。多为继发感染，如烧伤后的创面感染，也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严重时可引起败血症，死亡率甚高。（三）微生物学检验1、标本采集：血液、脑脊液、胸腹水、尿液、痰液、脓汁等。医院环境监控：可采空气、水、物体表面等。2、检验程序血液脑脊液、胸腹水、粪便体液脓汁、痰、尿液增菌分离培养直接涂片染色分离培养（营养肉汤）（血平板、麦康凯）（SS、麦康凯）初步鉴定最后鉴定菌落特征，色素，生化反应菌体形态，氧化酶分型：血清学噬菌体3、检验方法：（1）直接镜检：（2）分离培养：血液和体液可先增菌，再转种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、尿可直接种于上述培养基分离培养。（3）初步鉴定：根据菌落特征、色素（约10%菌株不产生色素）、生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等作出鉴定。铜绿假单胞菌的最低鉴定特征生物学特性所占比例单端鞭毛（3根以下）+93%动力+93%氧化酶+100%O-F试验葡萄糖O100%枸橼酸盐+100%精氨酸双水解酶+96%在42℃生长生长100%（４）最后鉴定：生化反应：对无色素的菌株应与其他假单胞菌鉴别：P231表21-3硝酸盐还原试验、明胶液化、精氨酸双水解酶、0.2%硫酸铜营养琼脂生长试验均为+。（5）分型1）血清学分型法2）噬菌体分型法3）质粒指纹图谱分析4）脉冲场凝胶电泳第三节不动杆菌属不动杆菌（Acinetobacter）为一群氧化酶阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。含6个种：醋酸钙不动杆菌洛菲不动杆菌溶血不动杆菌鲍曼不动杆菌琼氏不动杆菌约翰逊不动杆菌一、生物学性状1、形态与染色革兰阴性球杆菌，常成双排列，不易退色，多数有荚膜、无芽胞、无鞭毛。2、培养特性专性需养，营养要求不高。最适温度35℃，鲍曼不动杆菌42℃可生长。血平板上：圆形凸起、2-3mm，光滑、边缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶血不动杆菌可形成β-溶血环）；不产生色素。麦康凯平板：形成粉红色菌落。3、生化反应氧化酶—，触酶+，葡萄糖O/F为氧化型，动力、I、M、VP试验、H2S、硝酸盐还原试验—，不动杆菌属主要菌种生化反应特征：P233表21-4二、致病性该菌广泛存在于自然界，属条件致病菌，也是医院感染的常见病菌之一，常引起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。三、微生物学检查1、标本采集：血液、脑脊液、痰液、尿液、脓汁等。2、检验程序：3、检验方法：（1）直接镜检：脑脊液、尿液离心取沉淀物涂片，脓汁和痰液直接涂片染色镜检可见革兰阴性球杆菌成双排列，细胞内外可见，因本菌难退色，常染成革兰假阳性。（2）分离培养：（3）初步鉴定：符合下述五项即可判定为不动杆菌属的细菌。a.染色为革兰阴性球菌或球杆菌，成双排列。b.氧化酶（－），C.硝酸盐还原（－）。d.动力（－），e.不发酵葡萄糖。注意：不动杆菌属中某些菌株在KIA：底层+，易误认为肠杆菌科细菌，与肠杆菌的鉴别是：不发酵葡萄糖，硝酸盐还原试验—与假单胞菌属的鉴别是：氧化酶—，动力—第四节产碱杆菌属产碱杆菌属（Alcaligenes）为一群有动力，专性需氧，不分解糖类的革兰阴性杆菌。包括2种：粪产碱杆菌，去硝化产碱杆菌（又分为去硝化亚种和木糖氧化亚种）广泛存在于自然界，水和土壤中及人体皮肤粘膜有其存在。常从临床标本中分离出。一、生物学性状1、形态与染色：为革兰阴性短杆菌，成对或链状排列，有周鞭毛，有动力，无芽胞，多数无荚膜。2、培养特性：需氧，最适温度25－37℃，营养要求不高。血平板：形成较大灰白、扁平、边缘菲薄的菌落。麦康凯和SS：形成透明无色菌落（少数菌株在SS上不长）。液体培养：均匀混浊生长，表面形成菌膜，管底有粘性沉