常用分子生物学技术及基因诊断练习题

常用分子生物学技术及基因诊断、治疗

一、选择题

（一）A型题

1.印迹技术可以分为

A.DNA印迹B.RNA印迹C.蛋白质印迹D.斑点印迹E.以上都对

2.PCR实验延伸温度一般是

A.90℃B.72℃C.80℃D.95℃E.60℃

3.Westernblot中的探针是

A.RNAB.单链DNAC.eDNAD.抗体E.双链DNA

4.Northernblotting与Southernblotting不同的是

A.基本原理不同B.无需进行限制性内切酶消化C.探针必须是RNA

D.探针必须是DNAE.靠毛细作用进行转移

5.可以不经电泳分离而直接点样在NC膜上进行杂交分析的是

A.斑点印迹B.原位杂交C.RNA印迹D.DNA芯片技术E.DNA印迹

6.下列哪种物质在PCR反应中不能作为模板

A.RNAB.单链DNAC.eDNAD.蛋白质E.双链DNA

7.RT-PCR中不涉及的是

A.探针B.eDNAC.逆转录酶D.RNAE.dNTP

8.关于PCR的基本成分叙述错误的是

A.特异性引物B.耐热性DNA聚合酶C.dNTPD.含有Zn2+的缓冲液

E.模板

9.eDNA文库构建不需要

A.提取mRNAB.限制性内切酶裂解mRNAC.逆转录合成eDNA

D.将eDNA克隆入质粒或噬菌体E.重组载体转化宿主细胞

10.目前主要克隆的致病基因是

A.糖尿病致病基因B.恶性肿瘤致病基因C.单基因致病基因

D.多基因致病基因E.高血压致病基因

11.目前基因治疗中选用最多的基因载体是

A.噬菌体B.脂质体C.逆转录病毒D.腺病再相关病毒E.腺病毒

12.目前基因治疗多采用的方法是

A.基因增补B.基因置换C.基因矫正D.基因灭活E.基因疫苗

(-)B型题

A.SouthernblottingB.Northernblotting

C.WesternblottingD.dotblottingE.insituhybridization

I.不需要电泳、转膜等程序

2.电泳前不需进行限制性内切酶消化

3.靠电转移完成生物大分子的转移

4.直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交

A.逆转录PCRB.原位PCRC.实时PCRD.多重PCRE.RFLP

5.将目的基因扩增与定位相结合

6.能动态检测反应过程中的产物最

7.将RNA的逆转录和PCR反应联合应用的一项技术

8.在同一反应中采取多对引物

A.基因疫苗B.基因疥正C.基因置换D.基因增补E.基因失活

9.FI前基因治疗采用最多的方法是

10.将致病基因的异常碱基进行修正的基因治疗方法是

11.将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是

12.利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是

(三)X型题

1.核酸探针可以是

A.人工合成寡核甘酸片段B.基因组DNA片段C.RNA片段

D.cDNA全长或部分片段E.核甘酸

2.核酸分了杂交可以形成的杂化双链有

A.DNA/DNAB.RNA/RNAC.DNA/RNAD.寡核甘酸/RNA

E.寡核甘酸/DNA

3.PCR技术主要用于

A.目的基因的克隆B.基因的体外突变C.DNA和RNA的微量分析D.DNA序

列测定E.基因突变分析

4.基因组DNA文库建立需要

A.基因组进行限制性内切酹消化B.DNA片段克隆到相应载体中

C.重组体感染宿主菌D.筛选目的基因可以通过核酸分子杂交的方法进行

E.以入噬菌体为载体的人基因组DNA文库的克隆数目至少应在106以上

5.用于构建基因组DNA文库的载体有

A.酵母人工染色体B.粘粒C.X噬菌体D.腺病毒E.脂质体

6.基因诊断较常规诊断其特点有

A.属于病因诊断B.特异性强C.适用范围窄D.灵敏度高E.有放大效应

7.基因失活的常用技术包括

A.基因疫苗B.核酶C.小干扰RNAD.反义核酸E.基因置换

8.克隆羊多莉的产生属于

A.同种异体细胞转移技术B.同种异体细胞核转移技术C.试管内受精

D.无性繁殖E.同种异体细胞转某因技术

9.基因治疗的基本程序包括

A.治疗性基因的选择B.基因载体的选择C.靶细胞的选择

D.基因转移E.回输体内

10.目前可用作基因治疔的基因载体包括

A.腺病毒相关病毒B.噬菌体C.腺病毒D.逆转录病毒E.粘粒

二、是非题

1.Southernblot主要用于RNA的定性和定显分析。

2.蛋白质卬迹分析技术中蛋白质的转移，可以用电转移，也可以靠毛细作用转移。

3.实时PCR技术与普通PCR技术相比，它可以动态监测反应过程中产物的量。

4.生物芯片可以是DNA芯片、cDNA芯片或蛋白质芯片。

5.基因矫正是用正常的基因通过体内基因同源重组，替换致病基因来达到治疗忖的。

6.目前基因治疔多采用基因增补的方式。

7.RNA印迹技术中，RNA分子在转移前需进行限制性内切酶切割。

8.PCR反应中变性主要是使模板DNA完全变性为单链。

9.实时PCR技术中，TaqDNA聚合的在链延伸过程口遇到荧光探针，可发挥31->51核

酸外切酶活性。

10.内源基因结构突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。

二、填空题

1.分子杂交是利用DNA—和—这一基本性质来进行DNA或RNA定性、定量分

析的。

2.在印迹技术中，将DNA片段在琼脂糖凝胶中—使其成为—，利用—使胶中的

生物大分子转移到—膜上，使之成为固相化分子。

3.印迹技术的基本流程依次为、、和o

4.Southernblotting主要用于定性和定量分析，亦可用于和的分析。

5.Northernblotting主要用于检测—的表达水平，敏感性较PCR—,但其

具有和的优点。

6.Westernblotting主要用于检测样品中—的存在、细胞中以及—的相互作

用研究等。

7.PCR的基本反应步骤包括、、o

12.目前克降致病相关基因主要有和两大策略.

13.根据受体细胞的类型不同，基因治疗分为的基因治疗和的基因治疗两大

类。

14.目前使用的基因载体有和两大类。

15.在人类基因治疗实施中，导入基因的方式有和两大类。

四、名词解释

1.probe

2.blottingtechnologe

3.genelibary

4.genechip

5.genetherapy

6.genediagnosis

7.geneiiiaulivaiion

8.genereplacement

9.geneaugmentation

10.PCR

五、问答题

1.简述印迹技术的分类及应用。

2.简述PCR技术的基本原埋。

3.简述逆转录PCR、原位PCR和实时PCR技术的基本原理和主要区别。

4.简述基因诊断的概念及特点。

5.何为基因治疗，目前基因治疗有哪些基本策略？

6.试述基因治疗的基本程序。

7.欲生产一种药用多肽，科学家已经将此多肽的基因与某真核表达质粒重组在一起。请你

设计一个实验，利用PCR方法鉴定此重组表达质粒是否含有这一多肽的基因。

8.请为某一单基因遗传病（低表达或不表达）的患者设计一个基因治疗方案。

参考答案

一、选择题

（一）A型题

l.E2.B3.D4.B5.A6.D7.A8.D9.B10.Cll.D12.A

（二）B型题

I.D2.B3.C4.E5.B6.C7.A8.D9.D10.B11.C12.E

（三）X型题

1.ABCD2.ABCDE3.ABCDE4.ABCDE5.ABC6.ABDE

7.BCDE8.BD9.ABCD10.ACD

二、是非题

1.X2.X3.Vd.-J5.X.6,V7.X8.V9.X10.X

三、填空题

I,变性复性

2.变性单链毛细作用NC

3.电泳转移杂交放射自显影或化学显色

4.DNA重组质粒噬菌体

5.niRNA差特异性强假阳性率低

6.特异性蛋白质的存在特异性蛋白质的半定量分析蛋白质分子

7.变性退火延伸

8.功能克隆定位克隆

9.体细胞生殖细胞

10病毒载体非病毒载体

四、名词解释

1.探针，是指带有特殊可检测标记(放射性核素或其它化合物标记)的核酸片段，它具有

特定的序列，能够与待测的核酸片断互补结合，因此可用于检测核酸样品中特定的基因。

2.印迹技术，是指将在凝胶中分离的生物大分了•转移或直接放在固定化介质上并加以检测

分析的技术。它包括DNA印迹技术、RNA印迹技术和蛋白质印迹技术等。

3.基因文库，是指一个包含了某一生物体全部DNA序列的克隆群体。基因文库可以分

为基因组DNA文库和cDNA文库。

4.基因芯片，乂称DNA微阵列，包括DNA芯片(DNAchip)和cDNA芯片(cDNA

chip),是指将许多特定的DNA片段或cDNA片段作为探针，有规律地紧密排列固定

于支持物上，然后与待测的荧光标记样品进行杂交，杂交后用荧光检测系统等对芯片进

行扫描，通过计算机系统对每•位点的荧光信号做出检测、比较和分析，从而迅速得出

定性和定量的结果。

5.基因诊断，是指利用现代分子牛物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测某因结构及

其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。

6.基因治疗，从广义上讲，是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，

以达到治疗疾病目的的方法。

7.基因失活，是指将特定的序列导入细胞后，在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达，

已达到治疗疾病的目的。

8.基因置换，是指用正常的基因通过体内基因同源重蛆，原位替换致病基因，使细胞内的

DNA完全恢复正常状态。

9.基因增补，是指将目的基因导入病变细胞或其它细胞，不去除异常基因，而通过目的基

因的非定点整合，使其表达产物弥补缺陷基因的功能或使原有的功能增强。

10聚合酶链反应，指以DNA分子为模板，以一对与模板序列相互补的寡核甘酸片段为引

物，在DNA聚合酶的作用下，完成新的DNA的合成，重复这一过程使目的DNA片

段得到扩增。这技术可以将微量目的DNA片段扩增百万倍以上。

五、问答题

I•简述印迹技术的分类及应用。

答：己技术是指将在凝胶中分离的生物大分子转移或直接放在固定化介质上并加以检测分

析的技术。它主要包括DNA印迹技术(Southernblol)、RNA印迹技术(Northernblot)和

蛋白质印迹技术(Westernblot)等。

DNA印迹技术主要用于基因组DNA的定性和定量分析，例如对基因组中野异基因的定位

及检测等，此外亦可用于分析重组质粒和噬菌体。

RNA印迹技术主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异niRNA的表达水平，也可以比

较不同组织和细胞中的同一基因的表达情况。

蛋白质印迹技术，也叫免疫印迹，用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质

的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用研究等。

2.简述PCR技术的基本原理及应用。

答：PCR技术类似于DNA的体内复制。以DNA分子为模板，以一对与模板序列互补

的寡核甘酸片段为引物，在DNA聚合酶作用下，利用4种脱氧核苗酸，完成新的DNA的

合成，重复这一过程使目的DNA片段得到扩增。这一技术可以将微量目的DNA片段扩

增100万倍以上。基本步骤是首先待扩增DNA-模板加热变性解链，随之将反应混合物

冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在

DNA聚合酶作用下得以延伸。这种变性-密性-延伸的过程就是一个PCR循环，PCR

就是在合适条件下的这种循环的不断重复。主要用于目的基因的克隆、基因的体外突变、

DNA和RNA的的微量分析、DNA序列测定和基因突变分析等。

3简述逆转录PCR、原位PCR和实时PCR技术的基本原理和主要区别。

答：逆转录PCR是将RNA的逆转录和PCR反应联合应用的一种技术。即首先以RNA

为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA,再以后者为模板通过PCR反应来扩增目的基

因U

原位PCR是在固定液固定、石蜡包埋的组织切片或细胞涂片上的单个细胞内进行的PCR

反应，然后用特异性探针进行原位杂交，即可检出待测DNA或RNA是否在该组织或细

胞中存在。

实时PCR的基本原理是引入了荧光标记分子，并使荧光信号强度与PCR产物量成正比，

对每一反应时刻的荧光信号进行实时分析，计算出PCR产物量。根据动态变化数据■，可以

精确计算出样品中最初的含量差弁。

逆转录PCR与传统PCR相比，将RNA的逆转录和PCR反应联合起来，可以对已知序

列的RNA进行定性及半定量分析。常规PCR或RT-PCR技术的产物不能在组织细胞中

定位原位，因而不能与特定的组织细胞特征表型相联系，原位PCR技术可以将目的基因的

扩增与定位相结合。实时PCR技术与传统PCR反应相比，在常规正向和反向引物之间，

增加了一特殊引物作为探针。该技术可以通过动态监测反应过程中的产物量，消除了产物堆

积对定量分析的干扰。

4简述基因诊断的概念及特点。

答：基因诊断是指利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其

表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。

基因诊断与其他诊断方法相比，基因诊断的方法特点是：

(1)针对性强，以基因作为检杳材料和探察目标，属于“病因诊断”。

(2)特异性强，用分子杂交技术选用特定基因序列作为探针，故有很高的特异性。

(3)灵敏度高，所用技术具有放大效应，故诊断灵敏度高

(4)适用性强，诊断范围广。

5何为基因治疗，目前基因治疗有哪些基本策略？

答：从广义上讲，是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治

疗疾病目的的方法，均谓之基因治疗。

(1)缺陷某因精确的原位修知包括对致病基因的突变碱某讲行矫正的某因矫正和用正常某

因通过重组原位替换致病基因的基因置换。这两种方法是对缺陷基因精确的原位修复，不涉

及基因组的任何改变，是最为理想的治疗方法，但技术上目前尚未突破。

(2)基因增补是指将目的基因导入病变细胞或其它细胞，不去除异常基因，而通过FI的基

因的非定点整合，使其表达产物弥补缺陷基因的功能或使原有的功能增强。FI前基因治疗多

采用此法。

(3)基因失活是指将特定的序列导入细胞后，在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达，

已达到治疗疾病的目的。

(4)基因疫苗主要是指DNA疫苗，是第三代疫苗。其将编码外源性抗原的基因插入到真

核表达质粒中，直接导入人体内，抗原