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文档简介

DNA重组技术的必要条件幻灯片24：DNA重组技术的基本概念定义：又称基因工程或遗传工程，是指按照人们的意愿，将一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状的技术。核心：实现不同生物DNA分子的体外拼接和在受体细胞中的表达。幻灯片25：必要条件一：工具酶限制性核酸内切酶（限制酶）作用：能够识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，并在特定的位点切割DNA分子，产生黏性末端或平末端，为DNA片段的拼接提供可能。特点：具有特异性，即一种限制酶通常只识别一种特定的核苷酸序列，并且切割位点在该序列内部或附近。DNA连接酶作用：将两个具有相同黏性末端或平末端的DNA片段连接起来，形成重组DNA分子。常见类型：E・coliDNA连接酶（主要连接黏性末端）和T4DNA连接酶（既能连接黏性末端，也能连接平末端）。其他工具酶DNA聚合酶：用于DNA片段的扩增或填补缺口，如TaqDNA聚合酶在PCR技术中常用。逆转录酶：以RNA为模板合成cDNA，用于从RNA中获取目的基因。幻灯片26：必要条件二：目的基因定义：人们所需要的特定基因，即编码某种蛋白质或具有特定功能的DNA片段。获取途径从基因文库中获取：包括基因组文库和cDNA文库，通过筛选文库得到目的基因。利用PCR技术扩增：以已知目的基因的核苷酸序列为模板，设计引物，在体外快速扩增目的基因。人工合成：对于核苷酸序列已知且长度较短的目的基因，可通过化学方法人工合成。幻灯片27：必要条件三：载体作用：将目的基因导入受体细胞，并在受体细胞中复制、保存和表达。必备条件具有一个或多个限制酶切割位点，以便目的基因插入。能够在受体细胞中自主复制，保证目的基因的稳定存在和扩增。具有标记基因（如抗生素抗性基因），便于筛选含有重组载体的受体细胞。对受体细胞无害，不会影响受体细胞的正常生命活动。常见类型质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的小型双链环状DNA分子，是基因工程中最常用的载体。噬菌体或病毒：如λ噬菌体、动植物病毒等，可利用其侵染宿主细胞的特性，将目的基因导入受体细胞。幻灯片28：必要条件四：受体细胞定义：能够接受重组DNA分子，并使其在细胞内复制和表达的细胞。选择标准具有繁殖能力，能够使重组DNA分子随着细胞的分裂而扩增。对导入的重组DNA分子无明显的排斥反应，保证其能稳定存在。便于进行培养和筛选操作。常见类型：原核细胞（如大肠杆菌）、真核细胞（如酵母菌、动植物细胞）等，根据实验目的和基因表达的需求选择合适的受体细胞。幻灯片29：总结：各条件的协同作用DNA重组技术的实现是多个必要条件协同作用的结果：限制酶切割目的基因和载体，DNA连接酶将两者连接形成重组DNA，载体携带重组DNA进入受体细胞，受体细胞为重组

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