DB54∕T 0562-2026 牦牛片形吸虫病防控技术规程

ICS65.020.30

CCSB43

54

西藏自治区地方标准

DB54/T0562—2026

牦牛片形吸虫病防控技术规程

2026-1-4发布2026-2-4实施

西藏自治区市场监督管理局  发布

DB54/T0562—2026

目次

前言............................................................................II

1范围.................................................................................1

2规范性引用文件.......................................................................1

3术语和定义...........................................................................1

4诊断.................................................................................1

5实验室诊断...........................................................................2

6防控.................................................................................2

7治疗.................................................................................3

附录A（资料性）片形吸虫虫卵形态及感染牦牛肝脏..................................4

附录B（规范性）实验室检测方法..................................................5

I

DB54/T0562—2026

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口。

本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所、佛山大学。

本文件主要起草人：唐文强、黄福强、赵霞玲、石斌、马弘财、韩海玉、何小国、任晓丽。

II

DB54/T0562—2026

牦牛片形吸虫病防控技术规程

1范围

本文件规定了牦牛片形吸虫病的临床诊断、实验室诊断、防控和治疗等技术要求。

本文件适用于牦牛片形吸虫病的诊断、预防和治疗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

《中华人民共和国兽药典》（2020版）

NY/T1950-2010片形吸虫病诊断技术规范

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

片形吸虫

属复殖目、片形科、片形属吸虫，在我国主要包括肝片形吸虫、大片形吸虫及两种片形吸虫杂交形

成的“中间型”片形吸虫。

片形吸虫病

由片形吸虫寄生于动物或人体所引起的疾病，包括片形吸虫童虫在腹腔和肝脏实质中移行所造成的

急性期损害，以及成虫寄生于胆管内所致的以胆管上皮增生、胆管及胆囊炎症等为主的慢性期损害。

聚合酶链式反应（PCR）

一种在体外扩增DNA片段的方法。当存在模板DNA、底物、上下游引物和耐热的DNA聚合酶时，经过

多次“变性-退火-延伸”反应，模板可扩增至数百万倍。

4诊断

流行病学

在河边、沼泽草场，存在中间宿主椎实螺的条件下，夏秋季节放牧容易发生该病；患病牛或带虫牛

粪便中带有虫卵,为主要感染源；当地有片形吸虫病牛羊和既往患病牛羊记录，为片形吸虫病流行地区

或曾为片形吸虫病流行地区。

临床症状

1

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4.2.1急性期

牦牛急性期比较少见，主要表现为肝脏肿大，急性肝炎和内出血，腹腔中有带血色的液体和腹膜炎

变化。

4.2.2慢性期

牦牛患本病时多呈慢性型，主要症状为体态消瘦，食欲减退，颌下、前胸、下腹部水肿，贫血，颌

下水肿最明显，结膜与口黏膜苍白，生长受阻，产奶量降低，孕畜可能流产。

病理变化

4.3.1急性病例

比较少见，主要变化为可视黏膜苍白，剖检可见腹腔中充满血水，含幼小虫体；肝脏肿大和充血，

呈急性肝炎病变。

4.3.2慢性病例

主要表现为慢性肝炎病变，肝脏变硬，体积缩小，胆管壁增生、变厚、坚硬、钙化等，形成索状物，

突出于肝脏的表面。剖检为肝脏、胆管和胆囊中有成熟虫体；胆管内壁粗糙而坚实，内含血性黏液及磷

酸盐结石；肌肉松软而多水；胸腹腔及心脏含有透明渗出液。

5实验室诊断

样本采集

样本采集和处理时应采取必要的预防寄生虫感染的安全措施，穿一次性防护服，佩戴医用外科口罩

及手套。检测过程产生的废弃物应按照GB19489的规定处理。

病原学检查

5.2.1粪便虫卵检查

检测粪便中的片形吸虫虫卵，见附录A的图A.1和附录B的B.1。

5.2.2肝脏虫体检查

剖检肝脏查看片形吸虫虫体，见附录A的图A.2和附录B的B.2。

分子生物学（PCR）检查

取新鲜粪便进行聚合酶链式反应，扩增出特异性目的片段，只出现约250bp的特异性条带为肝片吸

虫，只出现约500bp的特异性条带为大片吸虫，同时出现约250bp和500bp条带为“中间型”片形吸虫，

见附录B的B.3。

6防控

预防性驱虫

6.1.1驱虫时间

2

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每年春、冬两季定期驱虫，牛群发病可随时驱虫。

6.1.2驱虫药物选择

驱虫药多使用高效、低毒且能驱杀各发育阶段虫体的药物，推荐使用三氯苯达唑。

6.1.3驱虫方法

预防片形吸虫病要有季节性，针对童虫和成虫分别驱虫。在春季驱虫，以驱除杀灭机体内残存的成

虫；在进入夏季牧场前给药，以防止囊蚴感染机体；在秋季节进行一次驱虫，以驱除感染的虫体，防止

在体内发育。

防控中间宿主

结合草原或农田基本建设、兴修水利和填补与改造低洼沼泽地带等措施，控制椎实螺生存的环境。

具备条件的，可用饲养的水禽、鸭、鹅等生物方法灭螺。

粪便无害化处理

实施驱虫的牛，远离中间宿主区域，圈留5d～7d，对病牛所排粪便及时清理，严格进行生物热发酵、

焚烧，杀死虫卵。

加强饲养卫生管理

选择在干燥处放牧，最好饮用自来水、井水或流动的河水，并保持水源清洁，以防感染。利用人工

草场，不食用流行区的牧草。采用放牧与补饲相结合的饲养方式，合理补充精料和添加剂，增强牦牛体

质。

7治疗

药物应符合《中华人民共和国兽药典》要求，选择高效、低毒、安全方便、易于推广的驱虫药，首

选对童虫和成虫有效的三氯苯哒唑和碘醚柳胺等药物；粪便虫卵检查发现有虫卵，则选用硝氯酚、丙硫

咪唑和吡喹酮等对成虫效果较好且价格相对低廉的药物。根据剂型含量不同，具体用量以药品说明书为

依据，并严格遵守药物规定的用法、用量和休药期。严禁使用未经农业农村部批准或已淘汰的兽药。

3

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A

A

附录A

（资料性）

片形吸虫虫卵形态及感染牦牛肝脏

图A.1片形吸虫虫卵图A.2感染片形吸虫牦牛肝脏

4

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附录B

（规范性）

实验室检测方法

B.1粪便虫卵检查（水洗沉淀法）

B.1.1材料

200mL玻璃杯，60目网筛，玻璃棒，镊子，胶帽吸管，载玻片和盖玻片，天平，显微镜。

B.1.2方法

取新鲜粪便10g放入玻璃杯中，先加10mL水搅成糊状，然后再继续加水20倍。经充分混合后，用60

目网筛滤入另一玻璃杯中，把滤过的粪便混悬液静置沉淀30分钟后，倒掉上清液，再继续加水混合，静

置沉淀。静置的时间可逐渐缩短，但至少要10分钟。这样反复进行，直到上清液透明为止。最后吸取沉

淀物放在载玻片上，加盖玻片在显微镜下作定性检查。若作定量检查，须将所有沉淀物全部镜检（不加

盖玻片，用低倍显微镜检查），统计全部虫卵数。

B.1.3结果判定

肝片吸虫和大片吸虫虫卵前端均较窄，有一个不明显的卵盖，后端较钝。卵壳较薄而透明，卵内充

满卵黄细胞和一个胚细胞（见附录A的图A.1）。肝片形吸虫(F.hepatica)虫卵呈长卵圆形，大小为116

μm～132μm×66μm～82μm，大片形吸虫(F.gigantica)虫卵的形态与肝片形吸虫虫卵相似，大小为150

μm～190μm×75μm～90μm。由于西藏地区存在中间型片形吸虫，因此无法通过虫卵形态区别出所检

测的片形吸虫虫卵为大片吸虫卵还是肝片吸虫卵，如要进一步区分，可通过PCR方法（按B.3进行）进行

鉴别。同时，由于同盘属吸虫（genusParamphistomum）虫卵与片形吸虫虫卵形态和大小相似，还应区

别片形吸虫虫卵与同盘吸虫虫卵，两者的鉴别要点为：同盘吸虫虫卵呈灰白色，有透明感，卵黄细胞松

散地分布在内，可见到许多空隙。其次，通过微分干涉相差显微镜可以看到片形吸虫的胚细胞在虫卵前

端，而同盘吸虫的胚细胞在虫卵中部偏后。

B.2肝脏虫体检查

B.2.1材料

解剖刀，组织剪，挑虫针，无齿镊，搪瓷盆，搪瓷盘，搪瓷缸，大平皿，载玻片。

B.2.2虫体采集

a）按一般剖检术式摘出肝脏，再剪断胆管与十二指肠连接部位，要注意观察断端有无虫体流出。

b）将肝脏放搪瓷盘中。首先分离胆囊，单放在大平皿中，剪开囊壁，将胆汁用清水稀释，等自然

沉淀后，检查沉淀物中有无虫体。检查肝脏时，先看肝表面有无病变结节，发现后用组织剪剪取，放在

两块载玻片中间做压片检查。

c）沿肝脏的大胆管及其分支剪开，如发现虫体取出放在盛有清水的平皿中。再沿着与胆管垂直的

方向将肝组织切成数大块，注意断面有无虫体或病灶。用手压挤，看是否有虫体被压出。

d）将肝块浸入盛有多量水的搪瓷盆中，用手撕成小块，再挤每个小肝块，洗净后取出。向搪瓷盆

内再加些水进行反复水洗沉淀，检查沉淀物，用无齿镊挑出虫体。

e）挑出的虫体用生理盐水洗净，再放在常温自来水中使虫体松弛。有些虫体的肠管内含有大量食

物，可在生理盐水中放置过夜，待其食物消化或排出。

5

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B.2.3虫体固定

将松弛了的虫体放在吸水纸上吸干水分，再放在清洁的载玻片上，载玻片两端铺上单层滤纸，盖上

另一载玻片，稍加压力将虫体压薄后，用橡皮筋或线绳扎紧，投入70%酒精内固定。注意投入时，应以

一端慢慢浸入，便于将两载玻片之间的空气赶出，固定时间应达24h以上。

B.2.4虫体染色标本制作步骤（硼砂卡红染色）

a）虫体染色原保存于70％酒精内的标本，可直接取出投入硼砂卡红（4％硼砂（Na2B4O7)溶液100mL，

加入卡红染粉1g，加热使其溶解，再加入70％酒精100mL，放冷，过滤，滤液即为硼砂卡红染液）染色

液中染色。保存于福尔马林液内的虫体标本，应先取出水洗1～2h，尔后循序通过30％，50％，70％的

酒精各0.5～1h，再投入染液中，在染液中过夜，使虫体染成深红色。

b）虫体脱色自染液中取出虫体，放入1%酸酒精中褪色（1%酸酒精是以70％酒精99mL加浓盐酸1mL，

根据情况也可以使用2%或3%的酸酒精），使颜色深浅分明，即虫体外层呈淡红色，内部构造呈深红色。

c）虫体脱水将脱色好的虫体移入80%，95％和100%酒精（2次）中各0.5～1h。（如果脱水不充分

制作出的标本会有一层雾状膜，原因就是浸泡时间不够或最后一步就酒精使用过程中已不是无水酒精，

建议更换新的无水酒精）

d）虫体透明将虫体先经1:1的100%酒精和二甲苯混合液中透明30min，再取出放入纯二甲苯中，

待虫体下沉后即可取出封片。用二甲苯透明时，时间不宜过长，否则虫体变硬而脆，不便封片。最好随

时透明，随时封片。

e）虫体封片已透明的虫体，移至载玻片上，加适量滴加拿大树胶，加盖玻片封固，封固时切忌

留有气泡在内，待干后放入标本盒内。

B.2.5结果判定

肝片吸虫和大片形吸虫的形态相似。成虫背腹扁平，呈叶片状，红褐色，雌雄同体，被覆皮棘。虫

体前端有一突出的圆锥状头锥，头锥后方变宽，或形成肩部。口吸盘位于头锥前端的亚腹面，腹吸盘位

于头锥基部稍后方。在口、腹吸盘之间有生殖孔。消化系统由咽、食道和两肠支组成，两侧的肠支一直

延伸至虫体后端，并向内外两侧发出分支。生殖系统中，睾丸两个，呈高度分支，前后排列于虫体的中

部。卵巢一个，较小，呈鹿角状，位于腹吸盘右后方，前睾丸的前方。子宫较短，盘曲在卵巢与腹吸盘

之间，其内充满虫卵，开口于生殖孔。卵黄腺分布在虫体两侧，自头锥基部直达虫体后端。

“中间型”片形吸虫成虫形态兼具两种片形吸虫的形态特点。肝片形吸虫与大片形吸虫的成虫形态

主要鉴别要点见表B.1。

表B.1肝片形吸虫与大片形吸虫成虫的形态鉴别

鉴别要点肝片吸虫大片吸虫

体形较狭长，有明显的肩部，末端较尖呈“V”形狭长，肩不明显，两侧平，末端钝圆呈

“U”形

大小21～41mm×9～14mm25～75mm×5～12mm

体长：体宽2:1～3:1左右3:1以上

吸盘腹吸盘稍大于口吸盘腹吸盘约为口吸盘的1.5倍

肠管内侧支分支少内侧支分支复杂

睾丸分支区域约占虫体的2/3分支区域约占虫体的1/2

B.3PCR检测

6

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B.3.1试剂

粪便基因组DNA提取试剂盒，TaqPCRMix预混液（2X,含蓝染料），1.5%琼脂糖凝胶，50×TAE电

泳缓冲液，DL2,000DNAMarker，核酸染料，片形吸虫阳性对照：中间型片形吸虫基因组DNA（10ng/μL），

片形吸虫阴性对照：非片形吸虫基因组DNA，空白对照：ddH2O，3条引物序列及配置的母液浓度见表B.2。

表B.2引物序列及浓度

引物名称引物序列母液浓度（μM）

Fh-pepck-F5’-GATTGCACCGTTAGGTTAGC-3’100

Fg-pepck-F5’-AAAGTTTCTATCCCGAACGAAG-3’100

Fcmn-pepck-R5’-CGAAAATTATGGCATCAATGGG-3’100

B.3.2耗材

离心管（15mL、50mL、1.5mL），药匙，称量纸，0.2mL薄壁PCR管，500mL量筒，500mL锥形瓶，枪

头（10μL、200μL、1000μL），记号笔。

B.3.3仪器设备

分析天平，PCR扩增仪，台式低温高速离心机，水平电泳仪，紫外凝胶成像系统，可调移液器（2

μL、20μL、200μL、1000μL），恒温水浴锅或金属浴。

B.3.4实验步骤

B.3.4.1牦牛粪便样品采集和处理

a)采集待检测牦牛200mg左右的粪便，放入一个1.5mL离心管中，供PCR检查用，每头牦牛采的粪便

样品不少于2管；

b)采集的样品宜当天处理和检测，若不能当天检测，应暂时放于冰箱冷冻室-20℃保存，若需长期

保存，应放置于-80℃超低温冰箱；

c)使用粪便基因组DNA提取试剂盒提取粪便样品中的全基因组；

d)提取好的全基因组置于4℃保存，若不能当天检测，应放于冰箱冷冻室-20℃保存。

B.3.4.2PCR扩增

反应体系：30μL，体系组成见表B.3。设置至少两个平行样品，设立阴性、阳性及空白提取对照。

表B.3PCR扩增反应体系

试剂名称用量（μL）

TaqPCRMix预混液（2X,含蓝染料）