1.2.1微生物的基本培养技术第2课时 课件高二下学期人教版生物选择性必修3

1.2微生物的基本培养技术（第2课时)一、培养基的配置人们按照微生物对

的不同需求，配制出供其

的营养基质。营养物质生长繁殖用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。1.概念：2.作用：3.类型：液体培养基固体培养基半固体培养基扩大培养、工业生产观察微生物的运动、分类鉴定（有无鞭毛）微生物分离、鉴定、活菌计数、保存菌种琼脂仅作为凝固剂，

不能为微生物生长提供能量和碳源。4.培养基的营养构成无机碳源：（1）碳源（提供碳元素）有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸、牛肉膏和蛋白胨、石油等CO2、NaHCO3等异养微生物基本成分：自养微生物（2）氮源（提供氮元素）（4）水（3）无机盐4.培养基的营养构成无机碳源：（1）碳源（提供碳元素）（2）氮源（提供氮元素）氮是微生物合成蛋白质、核酸等物质的元素。有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸、牛肉膏和蛋白胨、石油等CO2、NaHCO3等异养微生物有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素CO(NH2)2、氨基酸等

无机氮源：NH4＋、NO3-、N2、NH3等功能：①调节PH

功能：①良好的溶剂

（自由水）

①构成细胞结构物质和一些代谢产物

②有机碳既是碳源又是能源物质基本成分：自养微生物（4）水（3）无机盐功能：②维持渗透压②维持生物大分子结构的稳定

（结合水）功能：如固氮菌利用N2特殊需求：培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。④培养厌氧微生物时，需要提供

的条件。①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加

；②培养霉菌时，需要将培养基调至

；③培养细菌时，需要将培养基调至

；维生素酸性中性或弱碱性无氧主要指生长因子：维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等4.培养基的营养构成：培养基组分提供的主要营养牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸盐、维生素蛋白胨10g碳源、氮源、维生素NaCl5g无机盐H2O定容至1000mLH2O以1000mL牛肉膏蛋白胨培养基为例：一、培养基的配置1.培养微生物时，培养基中是否必须额外添加碳源和氮源？不一定。培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的CO2；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的N2。2.下表是某微生物培养基的成分，圆褐固氮菌是一种异养微生物，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？编号①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量/g0.44.00.50.5100mL圆褐固氮菌可以固氮，可以利用空气中的N2但其为异养型，而此培养基不含有机碳源，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌。二消毒：使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌：使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌二、无菌技术注意：为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。芽孢：孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞(是繁殖体)。能直接发育成新个体。知识拓展有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜(如温度、水分适宜)的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。二1.消毒：使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。①物理方法：煮沸消毒：在100℃煮沸5〜6min，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。巴氏消毒：对于一些不耐高温的液体，如牛奶，则可使用巴氏消毒法，即在62〜65℃消毒30min或80〜90℃处理30s〜1min，可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且基本不会破坏牛奶的营养成分。（啤酒啤酒、人乳及婴儿合成食物等）紫外线消毒：接种室、接种箱或超净工作台在使用前，用紫外线照射30min，杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。二、无菌技术二1.消毒：①物理方法：②化学方法：如采用碘酒、体积分数为70%的酒精、双氧水、氯气等化学药剂，对实验室的空间、操作台表面、实验人员的工作服与手等进行消毒。③生物方法：生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解，因此可以用它们来净化污水、污泥。二、无菌技术

湿热灭菌：

干热灭菌：

灼烧灭菌：二、无菌技术2.灭菌：

湿热灭菌：这是一种利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法，其中高压蒸汽灭菌的效果最好。实验室常用的高压蒸汽灭菌锅就是以水蒸气为介质，在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min来灭菌的。（培养基等）

干热灭菌：

灼烧灭菌：二、无菌技术2.灭菌：

湿热灭菌：这是一种利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法，其中高压蒸汽灭菌的效果最好。实验室常用的高压蒸汽灭菌锅就是以水蒸气为介质，在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min来灭菌的。（培养基等）

干热灭菌：

灼烧灭菌：二、无菌技术2.灭菌：

思考1、在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是？_____________________。

思考2、从高压蒸汽灭菌锅内拿出培养基后发现，培养基已经溅满了锥形瓶的瓶壁，最可能的原因是？未将锅内冷空气排尽高压蒸汽锅的压力表读数还未降至零就提前打开了高压蒸汽锅。

湿热灭菌：这是一种利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法，其中高压蒸汽灭菌的效果最好。实验室常用的高压蒸汽灭菌锅就是以水蒸气为介质，在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min来灭菌的。（培养基等）

干热灭菌：将灭菌物品放入密闭容器如干热灭菌箱，在160～170℃的热空气中维持2～3h可以达到灭菌的目的。耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（如吸管、培养皿等）、金属用具等，采用这种方法灭菌。

灼烧灭菌：二、无菌技术2.灭菌：

湿热灭菌：这是一种利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法，其中高压蒸汽灭菌的效果最好。实验室常用的高压蒸汽灭菌锅就是以水蒸气为介质，在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min来灭菌的。（培养基等）

干热灭菌：将灭菌物品放入密闭容器如干热灭菌箱，在160～170℃的热空气中维持2～3h可以达到灭菌的目的。耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（如吸管、培养皿等）、金属用具等，可以采用这种方法灭菌。

灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌。此外，在接种过程中，试管口、瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。二、无菌技术2.灭菌：三培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体。纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。获得纯培养物的过程就是纯培养步骤：配置培养基、灭菌、接种、分离和培养等三、微生物的纯培养锥形瓶封口膜皿盖皿底三、微生物的纯培养马铃薯(200g)去皮马铃薯块切块加水(1000mL)煮沸软烂马铃薯纱布过滤滤液加葡萄糖/蔗糖(20g)加琼脂加水定容(1000mL)酵母菌培养基配制培养基→（调pH）→灭菌→倒平板→接种和分离→培养三、微生物的纯培养配制培养基→（调pH）→灭菌→倒平板→接种和分离→培养将培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧高压蒸汽灭菌锅将5~8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧干热灭菌箱压力为100kPa，温度为121℃条件下灭菌15~30min160~170℃加热1~2h一、微生物的纯培养先调pH，后灭菌，防止杂菌污染类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分