《 动物源性制品中源性成分检测 实时荧光定量PCR法 第8部分：火鸡DNA检测方法》编制说明

12 2（一）工作简况 31、任务来源 3 33、协作单位 34、标准编制过程和主要工作过程 45、国家标准主要起草人及其所做的工作 4（二）国家标准编制原则、主要内容 51、标准编制原则 52、确定国家标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等）及其确定依据（包括试验、统计数据） 5（三）试验验证的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效益、社会效益和生态效益 51、实验材料及仪器 52、实验方法 63、方法验证 125、经济与社会效益 13（四）与国际、国外同类标准技术内容的对比情况，或与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况13（五）以国际标准为基础的起草情况，以及是否合规引用或者采用国际国外标准，并说明未采用国际标准的原因 13（六）与有关的现行法律、行政法规及相关标准的关系 （七）重大分歧意见的处理经过和依据 （八）涉及专利的有关说明 （九）实施国家标准的要求，以及织措施、技术措施、过渡期和实施日期建议等措施建议 （十）其他应予说明的事项 本标准根据国家标准化管理委员会公布的2025年第一批推荐性国家标准计划及相关标准外文版计划的通知生检标[2025]31号，本项目计划编号为20253187-Z-469，名称为动物源性制品中源性成分检测实时荧光定量PCR法-第8部分本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/T随着我国经济快速发展，人民生活水平不断提高，动物源性食品在人们日常消费中的占比呈上升趋势，食品真实性、掺杂使假也一直是消费者关注的热点。目前，我国肉制品造假和真实性问题（尤其是清真食品和生产供应链方面）仍然存在诸多问题，尤其是肉制品经深加工后改变了肉的组织形态，在利益驱动下，有可能存在以假充真、掺杂使假或标识不符的生产经营行为，将一种或多种低价格肉类掺杂到高价肉中，以假乱真、以次充好扰乱市场秩序，鸡血冒充鸭血、猪鸡鸭肉冒充牛羊肉、马肉冒充驴肉、鳕鱼肠检出鸡源性成分而配料表未如实标识等事件在各地时有发生，这为监管部门带来了新的挑战。快速、有效、准确和可靠的检测技术是有效监管肉类掺假的关键手段。目前国内现行的动物物种鉴定标准繁多，方法不统一。该标准的建立对保障肉类真实性、防止动物疫病传播、推动肉类食品鉴别和打假具有重要意义。该项标准为等同采用ISO国际标准，将ISO检测标准转化为国家标准，不仅是国家质量基础设施与国际接轨的关键一步，也是保障贸易公平、提升产业竞争力、支撑科学监管和引领科技创新的战略性举措。其最终目的，是补充完善国内标准体系以及提升国际认可度，为了在全球化竞争中，让中国的“测量”数据与世界“同频共振”，并逐步成为规则的共同制定者，也符合了我国《国家标准化发展纲要》的目标。食品检验检疫技术中心、中国质量检验检测科学基因技术有限公司、甘肃省商业科技研究所有限公司、四川威4（1）2025年4月至2025年5月，标准起草单位组织相关技术人员对该标准项目进行了预研，课题组成员广泛收集了国内外相关标准、（3）2025年9月收到全国生化检测标准化技术委员会生检标[2025]31号文件以及该标委会转发的国标委综合国标委发〔批国家标准制修订计划的通知》立项文件，计划编号：20253并对全国生化检测标准化技术委员会汇报了标准起草工作，就该标准（草案）进行了讨论，标准起后向全国生化检测标准化技术委员会提交了标准（123456789司5司准化文件的结构和起草规则》和《食品补充检验方法研制和污染判定能够满足食品风险监测工作的需要，方法的准确性能够满2、确定国家标准主要内容（如技术指标、参苯酚-三氯甲烷-异戊醇（25:24:1，体积比）：将苯酚、三氯甲烷、异戊醇按25比246参照GB/T35918-2018《动物制品中动物源性检测基因条码技术Sanger测序法》，取各物种新鲜肌肉组织0.1g，用于DNA提取、PCR扩增和测2，比对结果显示用于特异性试验的动物肌肉组织样品均为单一源性，且为相应源性成分样品名称匹配序列号比对物种样品名称匹配序列号比对物种猪KT279760.1Susscrofa火鸡HQ122602.1Meleagrisgallopavo黄牛KU891850.1Bostaurus海狸鼠JF318985.1Myocastorcoypus水牛KR009128.1Bubalusbubalis大鼠KT279110.1Rattusnorvegicus7牦牛KX232527.1Bosgrunniens小鼠AP014941.1MusmusculusKJ789954.1Caprahircus竹鼠KC789518.1Rhizomyspruinosus绵羊KF677301.1Ovisaries猫KT626623.1Feliscatus鸡KX534431.1Gallusgallus狗KU253531.1Canislupusfamiliaris鸭EU755252.1Anasplatyrhynchos貂MT888755.1Neogalevison鹅KU211647.1Ansercygnoides鸽子KC811463.1Columbalivia驴JX312730.1Equushemionus鹌鹑KX712089.1Coturnixjaponica马KT757742.1Equuscaballus草鱼MN923203.1Ctenopharyngodonidella兔KT626640.1Oryctolaguscuniculus鲢鱼MT002870.1Hypophthalmichthysmolitrix提取的不同物种源性DNA作为特异性试验的DNA价各目标源性的特异性。检验过程分别设阳性对照结果显示，火鸡肉中火鸡源性成分有典型扩明检出火鸡源性成分；而其他物种生鲜肉中均未出现荧光扩增检出火鸡源性成分。该结果表明方法中火鸡源性成分的对常见其他物种源性的特异性试验符合预期，方法的特异对模板DNA进行倍比稀释，作为反应模板进行扩增，确定性关系。参照《RB/T032-2020基因扩增检测式，计算检测方法的扩增效率，并建立本方法的判定原则。当灵敏度达到1ng/μL，线性范围内的相关系数（R20.98，扩增效率在80%~120%之间时，可满足检测要求。。表3.火鸡源性成分灵敏度检测Ct值DNA浓度ng/μLng/μL10-1ng/μL10-2ng/μL10-3ng/μL10-4ng/μL火鸡源性成分24.3627.3031.0534.2938.78无27.2030.8733.7638.31无23.8327.3730.5334.2839.53无灵敏度试验结果火鸡源性成分检测灵敏度：10-3ng/μL，线性范围：101-10-3ng/µl，相关系数（R2）：0.991，扩增效率：88.3%；L，能够满足方法对样品DNA浓度的要求。本方法在线性范系数（R2）均＞0.98；在线性范围内，火鸡源性成分检测方法的扩增效率均在80%～120%依据《食品安全监督抽检实施细则》（2025表性的畜禽肉（生鲜火鸡肉）和肉制品（火鸡翅根）的限3个梯度水平分别为目标源性占比1%、0.1%和0.01%，每个检出限梯度做5个重复样，每畜禽肉及肉制品检出限制样方法：分别将火鸡肉样品以临近检出限的3个梯度水平掺入猪肉样品中。称取1g火鸡肉和9g猪肉，充分均质混匀后，分均质混匀，制成1%样品，0.1%和0.01%样品依次同法制备。每个检出限样品取不同点位各100mg提取基因组DNA，作为检测模板，利用转化的标准PCR反应体系进行不同混合比例表4.不同源性成分生鲜肉混合肉样检出限扩增Ct值混合比例1%（w/w）混合比例0.1%（w/w）混合比例0.01%（w/w）浓度（ng/μL）检测结果浓度（ng/μL）检测结果浓度（ng/μL）检测结果火鸡源性成分（生鲜火鸡27.7422.031.6034.4628.0331.4735.0827.8631.4634.4727.7831.5634.8527.9520.031.3525.034.6827.9231.3034.4227.9731.6634.1627.9131.5334.2821.028.4131.3625.034.2128.3331.3734.51火鸡源性成分（火鸡翅根）29.2123.035.4039.9029.0735.5139.6429.0435.0025.539.6728.8634.6539.4229.0234.9827.038.9029.1034.8639.3829.2522.535.4538.0929.0735.7438.2828.7825.034.3529.039.0828.7434.7538.16检出限试验结果在不同代表性食品基质中，该方法对畜禽肉、肉制品的检出限能达到0.01%。应源性成分。为确保检测结果的准确性，当40.0＜Ct值＜），被检样品阳性；如再次扩增后Ct值仍≥35.0，则判定被检样品阴性。样品编样品名称产地样品编样品名称产地HJ01生鲜火鸡肉HJ06火鸡翅根安徽马鞍山HJ02火鸡肉切片HJ07火鸡胸切片安徽马鞍山HJ03生鲜鸡肉HJ08烤火鸡腿安徽马鞍山HJ04生鲜鸭肉HJ09火鸡胸火腿安徽马鞍山HJ05生鲜鹅肉奥尔良鸡胸肉火鸡源性成分样品编号浓度(ng/μL)检测结果GB/T38164比对结果结果判定HJ0136.519.58/19.4825.57/25.6318.38/17.38检出HJ0232.519.38/19.3625.42/25.3818.31/17.19检出HJ0331.019.79/19.94无/无无/无未检出HJ0427.020.45/20.16无/无无/无未检出HJ0532.020.02/20.06无/无无/无未检出HJ0627.525.26/25.2617.98/19.09检出HJ0727.016.95/16.8925.11/25.10检出HJ0835.516.87/16.94检出HJ0934.029.04/29.0823.06/22.99检出HJ1029.518.80/18.69无/无无/无未检出依据适用性试验结果，同时结合动物成分代于畜禽肉及副产品、肉制品及标识含火鸡成分的食品中适应范围内样品的检测，含火鸡成分的样品检测结果Ct值均小于45.0，可判定为检出火鸡源性成分。通过不同基质样品的适用性试验，表明方其所含的火鸡源性成分，适用性考察的食品类型和范源性成分检测方法实时荧光PCR法》（简），比对样品，用GB/T38164检测火鸡源性成分，结果显示：本方法对样品的火鸡源性成分检测与现行动物源性检测方法的Ct值有差异，其原因是本方法的靶标基因（染色体Z基因）为核基因，而GB/T38164的靶标基因（12SrRNA基因）为线粒体基因，中的含量差异较大所致，但结合不同循环数的判定原则），），），表7.不同试剂一致性比对扩增Ct值A试剂B试剂C试剂D试剂火鸡源性25.1824.6924.4824.5525.0324.4124.4824.2924.6825.5025.1025.0424.6625.1624.8924.8925.0925.3325.3125.1325.1025.6025.1625.04空白对照无/无无/无无/无无/无结果显示，不同荧光PCR预混液试剂对鸡源性成分均有荧光扩增曲线和Ct值，所得），差异源平方和均方F值P-valueF临界值组间0.27294630.0909820.714270.5549463.098391组内2.547550.127378///鸡源性成分检测，混样肉类及结果见表9。混样肉类火鸡源性结果判定猪、牛、羊、鸡、火鸡26.37/26.24检出火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽子26.16/26.08检出等比肉样混合检测结果显示，不同混合肉样致，且各源性的Ct值在不同混合样中无差异，表明方法对等比混合样品的抗干扰性满足根据标准要求，标准起草小组对特异性、灵敏度、检出限和适用性等关键指标参数进行了验证，实验验证样品由本标准起草单位提供，将验验研究院、成都海关技术中心、沈阳市食品药品检验所、验检测院、四川威尔检测技术股份有限公司，使用本方法的特异性良好，仅目标源性成分检出，其他导致的复检争议。减少企业违