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文档简介
DB32TechnicalSpecificationfortheSeedlingDetect江苏省质量技术监督局发布本标准主要起草人：程兆榜、任春梅、季英华、杨柳、缪倩、1黄瓜绿斑驳花叶病毒苗期检测技术规程本标准规定了苗床期瓜苗黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测条件、检测技术、结果判定和结果记本标准适用于苗床期症状尚未表现的瓜类作物上黄瓜绿斑驳花叶病毒的3用具耗材：移液器、一次性手套、牛皮纸袋、标签纸4检测技术4.1采样方法4.1.1采样时间待检材料为嫁接或未嫁接的黄瓜、西瓜、甜瓜、南瓜等瓜类作物幼苗，采样时间为出厂定植前34.1.2采样部位2保存。留存样品室温下荫干-20℃的条件下冰冻保存一年后，确认不再需要时焚烧或深埋处4.2检测方法4.2.1样品处理4.2.2免疫捕获4.2.2.1用碳酸盐包被缓冲液（见附录A）稀释黄瓜绿斑驳花叶病毒的抗清30μL包被PCR管，4℃孵育过夜或37℃下放置2h。4.2.2.3弃样品提取液，用洗涤4.2.3反转录4.2.3.1CGMMV特异性引物的设以反转录合成的cDNA第一条链为模板，进行PCR扩增，扩增反应体系25μL。上述PCR结束后，每个PCR管中取出1μL加入新PCR管中，采用同样的25μLPCR标准反应体观察琼脂糖凝胶电泳（参见附录B）结果，阳性对照在660出现的前提下，待测样品在660bp处有条带出现，即可判定样品携带CGMMV；否则为阴性反应，即将实验室检测鉴定结果记载于表1（瓜苗携带黄瓜绿斑驳花叶病毒检测结果记录表见附录B4A.1免疫捕获缓冲液A.1.2通用样品处理缓冲液（GeneralExtractBuA.1.3碳酸盐包被缓冲液（Coatingb离子水10倍
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