2025年微生物组织标本细菌学检验操作规程培训试题及答案

2025年微生物组织标本细菌学检验操作规程培训试题及答案一、单项选择题（共20题，每题2分，共40分）1.临床手术/活检采集的组织标本用于普通细菌学检验时，最小合格标本量为（）A.0.2gB.0.5gC.1.0gD.2.0g2.组织标本采集后常温下送检的最长时限为（）A.1hB.2hC.4hD.6h3.下列哪种送检的组织标本可接收进行细菌学检验（）A.10%中性甲醛固定的淋巴结组织B.2-8℃冷藏18h的肺部结节组织C.无唯一标识的手术切除坏死组织D.沾取切口表面渗出物的棉拭子标记为“组织标本”4.组织标本接收核对时，无需核对的信息是（）A.患者姓名、ID号、标本唯一标识B.标本采集部位、采集时间C.申请检验项目、临床诊断D.患者缴费状态、医保类型5.组织标本研磨制备匀浆时，应使用的缓冲液为（）A.无菌蒸馏水B.pH6.0的醋酸盐缓冲液C.pH7.2~7.4的无菌磷酸盐缓冲液D.pH8.0的Tris-HCl缓冲液6.组织标本涂片革兰染色后镜检，为提高阳性检出率，需至少观察的油镜视野数量为（）A.10个B.20个C.30个D.50个7.普通需氧/兼性厌氧细菌培养的孵育条件为（）A.35±1℃，5%~10%CO₂B.30±1℃，5%~10%CO₂C.35±1℃，厌氧环境D.42±1℃，普通空气环境8.按照2025年执行的CLSIM100-S35版折点要求，非苛养菌药敏试验采用的方法为（）A.K-B纸片扩散法B.微量肉汤稀释法C.梯度扩散法D.以上均可，根据实验室验证结果选择9.组织标本分离到疑似致病菌时，MALDI-TOFMS质谱鉴定分值达到多少可直接报告菌种（）A.≥1.7B.≥1.9C.≥2.0D.≥2.310.组织标本细菌学检验操作需在什么级别的生物安全防护环境下开展（）A.BSL-1级实验室，普通操作台B.BSL-2级实验室，Ⅱ级生物安全柜C.BSL-3级实验室，Ⅲ级生物安全柜D.无特殊要求，做好个人防护即可11.普通需氧/兼性厌氧细菌培养阴性的报告时限为（）A.24hB.48hC.72hD.7天12.厌氧菌培养的组织标本，阴性报告的最短孵育时间为（）A.48hB.72hC.5天D.7天13.怀疑结核分枝杆菌感染的组织标本，需接种的专用培养基为（）A.麦康凯平板B.巧克力平板C.罗氏固体培养基D.沙保弱葡萄糖琼脂平板14.下列哪类致病菌分离到后需按照法定传染病要求2h内上报属地疾控部门（）A.甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌B.鼠疫耶尔森菌C.碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌D.万古霉素耐药肠球菌15.组织标本研磨匀浆后的接种量为（）A.10~20μlB.20~50μlC.50~100μlD.200μl以上16.下列关于组织标本处理的说法错误的是（）A.处理前需用无菌生理盐水冲洗3次去除表面污染B.脓肿壁组织的致病菌检出率高于脓液C.坏死组织可直接丢弃，无需研磨培养D.研磨后的匀浆需同时制备涂片和接种培养基17.细菌鉴定生化试验的室内质控频次为（）A.每批次试验B.每周1次C.每月1次D.每季度1次18.标本拒收后，需在多长时间内通知临床科室并说明拒收原因（）A.1hB.2hC.4hD.24h19.生物安全柜使用前需提前开启自净的时间为（）A.10minB.20minC.30minD.60min20.下列关于危急值报告的说法正确的是（）A.所有分离到的致病菌均需按危急值报告B.危急值报告需在30min内通知临床主管医生C.危急值仅需电话通知，无需记录D.污染菌也可能需要按危急值报告二、多项选择题（共10题，每题3分，共30分，多选、少选、错选均不得分）1.组织标本细菌学检验的合格判断标准包括（）A.标本量≥0.5gB.标识唯一，与申请单信息一致C.采集后2h内送检，或2~8℃冷藏不超过24hD.无甲醛、戊二醛等固定剂污染E.为深部组织，未接触体表污染区域2.下列属于组织标本拒收情形的有（）A.标本标识模糊无法识别B.24h内同一部位重复送检的组织标本C.送检时间超过24h且未冷藏D.标本量仅为0.3gE.申请厌氧菌培养但标本放置于普通生理盐水中送检3.组织标本接种的基础培养基组合包括（）A.血琼脂平板B.麦康凯/中国蓝琼脂平板C.巧克力琼脂平板D.厌氧血琼脂平板（申请厌氧菌培养时）E.沙保弱葡萄糖琼脂平板（申请真菌培养时）4.组织标本涂片镜检的报告内容需包括（）A.白细胞数量B.上皮细胞数量（判断污染程度）C.细菌的染色特性、形态、排列方式D.可能的致病菌提示E.建议进一步检验的项目5.下列属于细菌学检验室内质控内容的有（）A.每批次培养基的无菌试验和生长试验B.染色液每周质控C.药敏试验每批次带质控菌株D.质谱仪每月校准E.生物安全柜每季度沉降菌监测6.下列哪些致病菌分离到后需按照多重耐药菌防控要求上报医院感染管理部门（）A.甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）B.万古霉素耐药肠球菌（VRE）C.碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌（CRE）D.碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌（CRPA）E.碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌（CRAB）7.组织标本细菌学检验的生物安全防护要求包括（）A.穿戴医用外科口罩、乳胶手套、隔离衣B.可能产生喷溅时佩戴护目镜/面屏C.所有操作在Ⅱ级生物安全柜内进行D.研磨时使用密闭式组织研磨器E.实验结束后对操作台表面用1000mg/L含氯消毒剂消毒8.阳性细菌培养报告需包含的内容有（）A.菌种名称B.药敏试验结果（含药物名称、MIC/抑菌圈直径、敏感性判断）C.培养时间D.标本类型、采集部位E.备注（如耐药表型提示、定植/感染判断建议）9.关于厌氧菌培养的组织标本处理，说法正确的有（）A.需采用厌氧运送培养基送检B.标本接收后需15min内接种到厌氧预还原培养基C.孵育采用厌氧袋/厌氧箱，厌氧环境含80%N₂、10%H₂、10%CO₂D.孵育48h无生长即可报阴性E.厌氧菌鉴定可采用质谱或生化试验10.下列关于检验结果解读的说法正确的有（）A.同一标本分离到3种及以上杂菌时，考虑为污染菌B.组织标本分离到金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等致病菌时，无论数量多少均需报告C.涂片见到细菌但培养阴性时，需在报告中备注说明D.药敏结果仅需报告对该菌种有临床意义的药物E.慢生长致病菌（如放线菌、诺卡菌）需延长培养时间至7~14天三、判断题（共10题，每题1分，共10分，对打√，错打×）1.组织标本可冷冻保存后送检，不影响细菌检出率。（）2.甲醛固定的组织标本可进行核酸扩增检验，不可进行细菌培养。（）3.组织标本研磨时需加入无菌石英砂提高研磨效率。（）4.怀疑放线菌感染的组织标本，需同时做革兰染色和弱抗酸染色。（）5.药敏试验结果的敏感性判断可采用任意版本的CLSI折点。（）6.生物安全柜内可同时处理多个患者的组织标本，无需分区。（）7.阴性培养报告需注明“未检出致病菌”，无需标注培养时间。（）8.组织标本表面的污染菌可通过无菌生理盐水冲洗3次完全去除，无需判读污染程度。（）9.多重耐药菌报告需在备注中提示临床采取接触隔离措施。（）10.检验后剩余的组织标本需按感染性医疗废物处置，高压灭菌后丢弃。（）四、填空题（共5题，每空1分，共10分）1.组织标本细菌学检验常用的药敏试验质控菌株包括：金黄色葡萄球菌____、大肠埃希菌____、铜绿假单胞菌____。2.标本接收后需在LIS系统中登记的信息包括：____、____、接收时间、接收人。3.组织标本涂片除常规革兰染色外，怀疑结核分枝杆菌感染需加做____，怀疑真菌感染需加做____。4.MALDI-TOFMS鉴定分值为1.7~2.0时，需____确认后报告，分值<1.7时需____后重新鉴定。5.危急值报告需留存记录，内容包括：报告时间、通知人、被通知人、____、____。五、简答题（共2题，每题10分，共20分）1.简述组织标本细菌学检验的完整操作规程。2.简述组织标本细菌学检验的危急值范围及报告流程。六、案例分析题（共1题，20分）患者男，68岁，2型糖尿病病史20年，左足溃疡伴坏死1个月，临床送检左足坏死组织标本，申请普通细菌培养+药敏、厌氧菌培养+药敏。请写出该标本的完整处理流程及报告要求。参考答案一、单项选择题1.B依据：WS/T640-2018《临床微生物学检验标本的采集和转运》要求，组织标本最小合格量为0.5g，优先采集1g以上提高检出率。2.B依据：常温下标本需2h内送检，避免苛养菌死亡。3.B依据：2~8℃冷藏18h符合标本保存要求，其余选项均为拒收情形。4.D缴费状态、医保类型不属于检验前核对范畴。5.C缓冲液pH需接近人体生理pH，维持细菌活性。6.C依据：最新操作规范要求，革兰染色镜检需至少观察30个油镜视野，降低漏检率。7.A普通细菌培养的标准孵育条件。8.D依据：CLSIM100-S35允许实验室采用验证合格的任意药敏方法。9.C质谱鉴定分值≥2.0为种水平鉴定可靠，可直接报告。10.B组织标本属于潜在感染性物质，需在BSL-2实验室Ⅱ级生物安全柜内操作。11.B需氧/兼性厌氧菌48h无生长可报阴性。12.D厌氧菌培养需孵育7天无生长方可报阴性。13.C罗氏培养基为分枝杆菌专用分离培养基。14.B鼠疫耶尔森菌属于甲类传染病致病菌，需2h内上报。15.C标准接种量为50~100μl，保证菌落生长浓度适宜。16.C坏死组织中可能存在大量致病菌，需研磨培养。17.A生化试验每批次需带质控菌株，保证结果准确。18.B标本拒收需2h内通知临床，避免延误诊疗。19.C生物安全柜提前30min开启自净，保证操作区洁净度。20.B危急值需30min内通知临床，且需完整记录。二、多项选择题1.ABCDE所有选项均为合格组织标本的判断标准。2.ABCDE所有选项均符合拒收情形要求，24h内同一部位重复送检无临床意义。3.ABCDE所有选项均为对应检验项目的基础培养基配置要求。4.ABCDE所有内容均为涂片镜检的必要报告要素。5.ABCDE所有选项均为微生物室内质控的强制要求。6.ABCDE5类均为国家要求上报的重点监测多重耐药菌。7.ABCDE所有选项均符合BSL-2实验室操作的生物安全要求。8.ABCDE所有内容均为阳性培养报告的必要组成部分。9.ABCE厌氧菌阴性报告需孵育7天，D选项错误。10.ABCDE所有选项均符合检验结果解读的规范要求。三、判断题1.×冷冻会导致苛养菌细胞壁破裂，降低检出率，组织标本禁止冷冻。2.×甲醛会导致核酸交联降解，无法进行核酸扩增检验，也无法培养。3.√无菌石英砂可提高研磨效率，保证组织匀浆充分。4.√放线菌革兰染色阳性，弱抗酸染色阳性，可与分枝杆菌鉴别。5.×需采用当前有效版本的CLSI折点，2025年为M100-S35版。6.×多个患者标本需分区操作，避免交叉污染。7.×阴性报告需标注培养时间，提示临床检验覆盖的致病菌范围。8.×冲洗仅能去除大部分表面污染，仍需通过上皮细胞数量判断污染程度。9.√多重耐药菌需提示临床采取接触隔离，避免医院感染传播。10.√剩余组织标本属于感染性废物，需高压灭菌后统一处置。四、填空题1.ATCC25923、ATCC25922、ATCC278532.患者基本信息、标本信息3.抗酸染色、钙荧光白真菌染色4.补充生化试验、重新分离纯化菌落5.危急值内容、临床反馈结果五、简答题1.组织标本细菌学检验完整操作规程如下：（1）检验前核对：核对申请单与标本标识、采集信息、标本质量，不合格标本按要求拒收并登记。（2）标本处理：无菌生理盐水冲洗标本3次去除表面污染，取0.5g组织加入1ml无菌磷酸盐缓冲液和少量无菌石英砂，密闭研磨成匀浆。（3）涂片镜检：取10μl匀浆制备涂片，行革兰染色（按需加做抗酸、真菌染色），镜检后2h内出具初步涂片报告。（4）接种培养：取50~100μl匀浆接种对应培养基，需氧/兼性厌氧孵育35±1℃、5%~10%CO₂，厌氧菌接种预还原厌氧培养基，置于厌氧环境孵育。（5）鉴定药敏：孵育24~48h后观察菌落，挑取可疑致病菌行MALDI-TOFMS鉴定，采用验证合格的方法行药敏试验，折点参照CLSIM100-S35版。（6）结果阴性结果按要求时限报告，阳性结果核对无误后出具正式报告，危急值按要求上报。（7）检验后处置：剩余标本高压灭菌后按感染性废物处置，检验记录留存至少3年。2.（1）危急值范围：①甲类/按甲类管理的乙类传染病致病菌：鼠疫耶尔森菌、炭疽芽孢杆菌、霍乱弧菌、结核分枝杆菌（无菌部位标本）；②无菌部位组织分离到的致病菌：如脑膜炎奈瑟菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、念珠菌等；③重点监测多重耐药菌：CRE、VRE、MRSA等；④涂片镜检见到细菌但培养阴性，结合临床高度怀疑感染的结果。（2）报告流程：①确认结果准确无误后，30min内通过电话通知临床主管医生/护士；②记录报告时间、通知人、被通知人姓名、危急值内容、临床反馈信息；③报告中注明“危急值”标识，同步推送至LIS系统；④甲类传染病致病菌需同时上报属地疾控部门和医院感染管理科。六、案例分析题1.标本处理流程：（1）标本接收核对：确认标本标识、采集时间、申请项目无误，标本量0.8g符合要求，2h内送检无固定剂污染，予以接收登记。（2）标本预处理：用无菌生理盐水冲洗坏死组织3次，去除表面溃疡渗出物，取深部脓肿壁和坏死交界部位组织0.5g用于研磨。（3）涂片镜检：制备2张涂片，1张行革兰染色，观察白细胞数量、细菌形态排列；1张行弱抗酸染色