CN119451686A 在颗粒上生长细菌的细菌组合物和方法 （迈彼欧提克斯制药有限公司）

2024.12.04PCT/IL2023/0503722023.04.04WO2023/195008EN2023.10.12本发明尤其涉及包含至少部分附着在颗粒23.根据权利要求1或2所述的组合物，其中同的颗粒内包含所述多糖基材料和所述金属碳5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述颗粒进一步包含磷酸二钙6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，进7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述多糖基材料包括纤维素衍生9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述多糖基材料包括微晶纤维素态失调。18.一种用于制备组合物的方法，所述组合物包含至少部分附着在颗粒上的至少一种3从而制备所述组合物，所述组合物包含至少部分附着在所述颗粒上的所述20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述接触步骤包括在包含所述颗粒的生长有至少一种选自以下的特征：(a)呈包含所述多糖基材料和所述金属碳酸盐的复合物的形22.根据权利要求18至21中任一项所述的方法，其中所述提供的颗粒进一步包括磷酸酸盐的重量相对于所述溶液体积在9g/1L至215g/1L之间的颗粒的总重量相对于所述溶液的体积在60g/1L至250g/1L之间的25.根据权利要求24所述的方法，其中所述提供的颗粒包含浓度为基于所述颗粒的干26.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述提供的颗粒的特征在于以下任一个：(i)包含浓度为基于所述颗粒的干重，所述颗粒总重量的至少15％(w/w)的所述金属碳酸27.根据权利要求18至26中任一项所述的方法，其中所述金属碳酸盐不是由所述至少4[0002]本申请要求于2022年4月5日提交的名称为“在颗粒上生长细菌的组合物和方法[0003]本发明属于微生物学领域，特别涉及附着和/或聚集形式的细菌组合物及其制备部分附着在颗粒上的至少一种细菌菌株的种群，其中所述颗粒包含：(i)多糖基材料；和5金属碳酸盐的复合物的形式；和(b)在分离的颗粒内包含多糖基材料和金属碳酸盐中的每[0021]在一些实施方式中，组合物和/或方法进一步包括不含多糖基材料和金属碳酸盐6包括在同一颗粒内未共混在一起的多糖基材料和金属包含多糖基材料和金属碳酸盐的复合物的形式；和(b)在不同的或分离的颗粒内包含多糖7[0060]除非另有定义，否则本文使用的所有技术和/或科学术语具有与本发明所属领域[0062]图1包括条形图，显示了在如下情况下培养后两歧双歧杆菌(Bifidobacterium(Lactobacillusplantarum)培养物的存活率的柱状图。测试了通过不同培养方法制备的[0064]图3包括显示冻干植物乳杆菌培养物在重构和暴露于增加的H2O2浓度后的存活率8)。9粒存在下使用和培养时与在不存在金属碳酸盐颗粒的情况下在包含微晶纤维素的颗粒的存在金属碳酸盐颗粒的情况下在包含微晶纤维素的颗粒的存在下使用或培养和/或与浮游合物被配置为粘合和/或保留在粘液表面上，并在目标区域长时间由组合物释放细菌。例或功能是指保持在消除/分解步骤之前的初始值的至少80％。在一些实施方式中，保持消除/分解步骤之前的初始值的80％至10[0082]在一些实施方式中，通过测量细菌影响受试者代谢过程和/或改善受试者任何疾病、紊乱或病症的能力来确定有益效果；测量细菌的潜在代谢路线(route)/途径和/或致病菌丰度增加为特征的女性泌尿生殖道病症方面。这种病症的一个非限制性实例是细菌性阴道病，其中有或没有抗生素和/或酸性物质的情况下施用根据本发明制备的产37℃至50℃、38℃至50℃或在50℃至55℃的范围内。组合物或方法包括不含金属碳酸盐的包含多糖基材料的颗粒和不含多糖基材料的包含金组合物和/或方法包括不含金属碳酸盐的包含多糖基材料的颗粒和不含多糖基材料的包含着的细菌产生的。在一些实施方式中，至少一种细菌菌株产生金属碳酸盐和/或多糖基材在一些实施方式中，组合物包含一种细菌菌株的种群和/或方法包括接触或培养一种细菌本”是指包含通过组合/混合选定的(两种或更多种)细菌物种而人工创建的细菌群落的样(Lactobacillusreuteri)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、阴道乳杆菌(Lactobacillusvaginalis)、发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)、鼠李糖乳杆菌乳杆菌(Lactobacillussalivarius)、德氏乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckii)或其任硬脂酸棒状杆菌、溶血性葡萄球菌(Staphylococcushominis)、表皮葡萄球菌苛求棒状杆菌(Corynebacteriumfastidiosum)、轻型链球菌、溶血性葡萄球菌(Staphylococcushaemolyticus)、藤黄微球菌(Micrococcusluteus)、非发酵棒状杆菌囊水栖菌(Enhydrobacteraerosaccus)、克氏棒状杆菌(Corynebacterium枝菌酸棒杆菌(Corynebacteriumamycolatum)、阻抗棒状杆菌(Corynebacterium接触或培养步骤结束时存在的总细菌的以下范围的细菌为颗粒附着/粘附的形的细菌粘附到金属碳酸盐颗粒的表面上(例如，在总附着的细菌组分中，超过50％且上至[0104]在一些实施方式中，细菌附着和细菌附着占培养系统内总细菌的百分比评估如分离，并去除含有未附着细菌的上清液。在一些实施方式中，用0.9％生理盐水[0108]在一些实施方式中，本文中与颗粒相关的所有数字百分比和w/w比都是基于干燥和/或方法进一步包含不含多糖基材料和金属碳酸盐的颗粒。在一些实施方式中，组合物合物形式的颗粒包括通过施加机械压力而结合的的复合颗粒是通过将两种分离的颗粒类型分散在溶液中和/或通过混合/组合两种分离分组合物和/或方法包括包含多糖基材料且基本上不含金属碳酸盐的颗粒。在一些实施方式其中组合物和/或方法包括多种类型的多糖基材料，每种类型的多糖基材料可以具有不同铁(Fe2+2+酸钙(CaCO3)。在一些实施方式中，多糖基材料是或包括纤维素衍生物，例如微晶纤维素[0141]根据本发明可使用的“碳酸钙”(CaCO3)可以以本领域已知的任何方法合成或制干燥的Na2CO3和CaCl2滴入溶液中和/或混合Na2CO3与CaCl2的溶液，从而提供包含碳酸钙的[0144]在一些实施方式中，金属碳酸盐和多糖基材料在接触和/或培养期间以将允许种碳酸盐含量范围在组合物中的颗粒和/或方法中提供、添加或使用的颗粒的总重量的15%多糖基材料的含量范围在组合物中的颗粒和/或方法中提供、添加或使用的颗粒的总重量在一些实施方式中，所提供的金属碳酸盐颗粒的重量相对于溶液体积的范围在9g每1L至在一些实施方式中，所提供的多糖基材料颗粒的重量相对于溶液体积的范围在9g每1L至含量范围在组合物内颗粒总重量的15％w/w至99％w/w之间，例如15％w/w至95％w/w之间、养基的非限制性实例包括但不限于胰蛋白酶大豆肉汤(TSB)、酵母酪胨脂肪酸(YCFA)、ManRogosaSharpe琼脂(MRS)、拟杆菌属胆汁七叶甙琼脂(Bacteroidesbileesculin[0165]在一些实施方式中，该方法还包括在溶液中接种至少一种细菌菌株的种群的步中，合适的条件是使至少一种细菌菌株的种群与颗粒接触或培养1小时至15天范围内的时相移动或运动的条件。在一些实施方式中，移动是轴向的、径向的、混合的、分布式的浮液中的其他细菌可以附着在颗粒、附着/粘附颗粒的细菌和/或由附着/粘附细菌形成的[0175]在一些实施方式中，分离组分或去除未附着的细菌是通过过滤和/或重力沉降例所有分离技术以及利用可分离组分的过滤器的[0179]在一些实施方式中，消除步骤在其中进行接触的容器内和/或在不同的容器中进气体通过溶液释放并离开其中进行接触的容器。在另一个实施方式中，其中：(i)碳酸镁BrgnstedBrgnsted以通过相对于颗粒内存在的金属离子的摩尔数计算加入溶液中的酸和/或者CO2的摩尔数没有颗粒和/或存在目前用于细菌生长的颗粒的情况下制备的组合物相比，根据本发明的155到至少110或至少17到至少19678920或其间的任何[0200]在一些实施方式中，根据本发明的组合物和/或方法包括单一细菌菌株的种群或一起作为共培养物；或两者的混合物。细菌菌株和/或不同菌株之间的比率可能会有所不[0210]在一些实施方式中，提供了用于预防或治疗有需要的受合物用于减少和/或预防与早产和流产相关的生态失调。床症状相关的身体任何外表面或内表面以及微生物群与医疗状况有关和/或对受试者(例如人类受试者)的[0223]如本文所使用的，术语“改变的微生物群”是指已经偏离体内平衡微生物群Merck&Co.,Inc.,Rahway,N.J.(2001)；theCTFA(Cosmetic,Toiletry,andFAssociation)InternationalCosmeticIngredientDictionaryandHandbook,第10版(FDA)CenterforDrugEvaluationandResearch(CDER)OfficeofManagement中所公标准教科书中进行了描述，如Goodman和Gillman的ThePharmacologicalBasesofTherapeutics，第8版，Gilman等人，编辑，PergamonPress(1990)；Remington’sPharmaceuticalSciences，第18版，MackPublishingCo.,Easton,Pa.(1990)；以及Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy，第21版，LippincottWilliams&[0233]在一些实施方式中，组合物被配置用于胃肠道中细菌菌株的pH依赖性靶向释实施方式不一定被解释为优选或优于其他实施方式和/[0247]上文所述和所附权利要求部分所要求保护的本发明的各种实施方式和方面在以的本发明的各种实施方式和方面的每一个在以下实施例中重组DNA技术。这些技术在文献中得到了充分的解释。例如，参见“MolecularCloning:AlaboratoryManual”Sambrook等人(1989)；“CurrentProtocolsinMolecularinMolecularBiology”,JohnWiley和Sons,Baltimore,Maryland(1989)；Perbal,等人,“RecombinantDNA”,Scie“GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries”,Vols.1_4,ColdSpringHarborIIICellis,J.E.,编辑(1994)；“CultureofAnimalCells_AManualofBasicTechnique”byFreshney,Wiley_Liss,N.Y.(1994),第三版；“CurrentProtocClinicalImmunology”(第8版),Appleton&Lange,Norwalk,CT(1994)；MishellandHybridization”Hames,B.D.,和HigginsS.J.,编辑(1985)；“TransciptionandTranslation”Hames,B.D.,和HigginsS.J.,编辑(1984)；“AnimalCellCulture”PracticalGuidetoMolecularCloning”Perbal,B.,(1984)和“MethodsinEnzymology”Vol.1_317,AcademicPress；“PCRProtocols:AGuideToMethodsAndProteinPurificationandCharacterization_ALaboratoryCourseManual”CSHL20g)；和25%:[0265]浮游生长(在没有颗粒的情况下培养)也在为每种细菌详细说明的相应条件下进[0268]从储存在_80℃下的初始接种物中制备每种细菌的培养物(接种物原液含有浮游[0269]将五十(50)μl(用于卷曲乳杆菌和副干酪乳杆菌)或100μl(用于两歧双歧杆菌)接种物与200ml培养基混合，培养基含有或不含有40g颗粒(100％MCC；100％CaCO3或MCC/2_90H2_5CO2_5％)温度37℃,[0271]为了定量评估不同测试颗粒上的细菌附着，对细菌总数计数[以Log(CFU/ml)表物与在没有CaCO3颗粒的MCC存在下培养时附着水平的任[0275]为了评估使用酸溶解颗粒的可行性，在从颗粒附着的细菌组分(如图1中的“第3[0276]图1中的结果显示了第1_3组和两歧双歧杆菌浮游培养中获得的细菌计数(Log过连续稀释从每种测试条件进行CFU测量(滴定试验)，并将细菌一式三份铺板在琼脂平板2_90H2_5CO2_5％)在37℃下HCl逐步加入到100一200μl部分的如上所详细描述制备的第3组生理盐水(0.[0293]检查了根据本发明制备的包含颗粒附着细菌的组合物，与浮游细菌组合物和/或 3以1干后测试组合物(i)和(iii)。以96w/p制备的组合物(iii)以湿的形式检查。为了测量冻干按照下面详述的相同方式进行处理。[0298]从储存在80℃的初始接种物制备96w/p的植物乳杆菌培养物[接种物原液含有含25％)下在37℃的温度下温育/培养10小时。[0300]温育10小时后，测量OD600，用植物乳杆菌培养基将细菌种群稀释至初始OD600为[0301]温育12小时后，测量OD600，用植物乳杆菌培养基将细菌种群稀释至初始OD600为[0304]在含有2L生长培养基的5升发酵罐中并且在400g颗粒混合物[MCC和CaCO3以1：1[0308]植物乳杆菌培养物由储存在_80℃下的初始接种物制备(接种物原液含有浓缩的[0317]为了定量评估应激后的细菌存活率，通过剧烈移液将96w/p生长的细菌与孔表面)。[0322]图1显示了在如下情况下生长的两歧双歧杆菌的细菌计数(CFU/ml)：没有颗粒的双歧杆菌导致附着增加(在图1中比较；第2组在100％MCC颗粒的存在下培养与在MCC和[0324]结果还表明(图1)，与其他细菌生